一种精制聚肌胞的制备方法及用途技术

本发明专利技术提供了一种精制聚肌胞的制备方法及用途，其特征是：通过化学方法纯化聚肌苷酸和聚肌胞酸，分别经过精制之后，合并成聚肌胞溶液，再经过超滤浓缩，加入辅料制成一种精制聚肌胞，这种精制聚肌胞可有效提高抗癌效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药
，尤其是精制聚肌胞的制备方法和用途。
技术介绍
聚肌胞为一种干扰素诱导剂。在体内细胞诱导下产生干扰素，有类似干扰素的作用，故有广谱抗病毒和免疫调节功能。用于病毒感染性疾病和肿瘤的辅助治疗。目前国内已经开展用聚肌胞作为疫苗佐剂进行的研究，其中中国专利公布了专利号为93105862. 7、名称为聚肌胞复合物免疫佐剂及含有该佐剂的疫苗和专利号为 200810011586. 6、名称为冻干疫苗及其稀释溶液分别包装的疫苗产品和稀释溶液的制备方法。还有文献名为皮卡佐剂和皮卡狂犬病疫苗的安全性等文章都对聚肌胞作为佐剂的可行性进行了研究。但是对于单独聚肌胞作为抗癌辅助治疗的相关报道还没有，因此本专利技术就是针对目前的情况，利用聚肌胞的广谱抗病毒的原理，将聚肌胞设计为一种可有效提高聚肌胞抗肿瘤效果的制剂。我们对市售PIC产品进行了一系列的检测，包括内毒素、残留DNA及残余宿主菌体蛋白的含量检测，对不同内毒素、残留DNA及残余宿主菌体蛋白PIC进行了动物的发热试验对比；进行了 PIC加速和长期稳定性实验，制订了 PIC内毒素、残留DNA及残余宿主菌体蛋白的检验标准。申请将内毒素、残留DNA及残余宿主菌体蛋白控制于标准范围的PIC与市场销售PIC品种进行临床对比实验研究，以期明确内毒素、残留DNA及残余宿主菌体蛋白标准范围。在此基础上，我们进行了精制聚肌胞的纯化与合成工艺探索。精制聚肌胞是在原聚肌胞制备工艺的基础上通过层析技术进行精制，最大限度地去除内毒素、残留DNA及残余宿主菌体蛋白等杂质，从而大大地提高了纯度和有效成分的含量；其内控标准中主要成分纯度总含量控制在95%以上，远远高于原聚肌胞注射液的纯度；该精制聚肌胞制备是在-40°C冷冻干燥的，低温可以最大限度地保持了有效成分及其活性。
技术实现思路
针对现有技术存在的缺陷，本专利技术的目的之一是提供一种精制聚肌胞制剂的产品，它可以提高产品质量，减少副作用，扩大聚肌胞产品的应用范围。本专利技术的目的之二是提供上述精制聚肌胞的制备方法及其用途。一种精制聚肌胞的制备方法及用途，其特征在于先用化学法纯化聚肌苷酸和聚胞苷酸；再经过柱层析的方法对聚肌苷酸和聚胞苷酸进行精制；然后合并纯化后聚肌苷酸和聚胞苷酸，配制成精制聚肌胞溶液；将配好的精制聚肌胞溶液经过超滤浓缩制成精制聚肌胞原液；最后用0. 45um滤芯过滤，高压，加入辅料后进行分装，成品即为精制聚肌胞。一种精制聚肌胞的制备方法及用途，其特征在于(1)用化学的方法提取聚肌苷酸和聚胞苷酸；(2)用柱层析的方法对聚肌苷酸和聚胞苷酸进行精制；(3)合并精制后的聚肌苷酸和聚胞苷酸，合成聚肌胞溶液；(4)用超滤的方法将合成的聚肌胞溶液进行浓缩；(5)浓缩后的聚肌胞经0. 45um滤芯过滤、高压灭菌，加入辅料，即成精制聚肌胞制剂。一种精制聚肌胞的制备方法及用途，其特征在于所述步骤(1)纯化聚肌苷酸和聚肌胞酸的方法为用水饱和酚氯仿抽提。一种精制聚肌胞的制备方法及用途，其特征在于所述步骤( 凝胶过滤所用的填料是 kpharose4FF。一种精制聚肌胞的制备方法及用途，其特征在于所述步骤C3)合并聚肌苷酸和聚胞苷酸，用水浴锅进行加热。一种精制聚肌胞的制备方法及用途，其特征在于所述步骤(4)超滤浓缩所用的膜包分子量为5KD。一种精制聚肌胞的制备方法及用途，其特征在于所述步骤( 加入的辅料为甘露醇。具体实施例方式具体实施例1(1)缓冲液的配制磷酸氢二钠1.5g磷酸二氢钠0. 2g注射用水IOOOml(2)水饱和酚氯仿抽提将聚肌苷酸和聚肌胞酸用0. 5%的SDS溶液溶解，配制成30mg/ml溶液，用1/4体积的水饱和酚、氯仿抽提，100r/min搅拌10分钟，然后静置20分钟，取上清液加入2. 5mol/L醋酸钠溶液至浓度为0. 15mol/L,混勻后再加入2倍体积乙醇，4°C放置12小时，3000r/min离心20分钟，取沉淀。取沉淀加入一定量的PBS溶解备用。(3)聚肌苷酸和聚胞苷酸的精制将溶解好的聚肌苷酸和聚胞苷酸溶液，用注射器打入柱床内，用磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集洗脱峰。(4)合并聚肌苷酸和聚胞苷酸将精致的聚肌苷酸溶液和聚胞苷酸溶液分别加热至60士5°C，然后将聚胞苷酸溶液缓慢加入聚肌苷酸溶液中，在IOOrpm转速下搅拌60分钟，同时调节PH8. O左右，滴加硫酸卡那霉素200万单位，在滴加的同时不断搅拌。(5)超滤在无菌环境下用截留分子量为5KD超滤膜对样品进行浓缩，首先用无菌的每升含 100万单位硫酸卡那霉素的磷酸盐缓冲液循环平衡超滤膜2L，将合并好的聚肌胞浓缩2倍，然后用含有硫酸卡那霉素的磷酸盐缓冲液洗脱4L。(6)过滤用0. 45um滤芯对超滤后的聚肌胞溶液进行过滤。(7)配制聚肌胞取上述聚肌胞样品0. 2ml,即含Img聚肌胞、含200单位硫酸卡那霉素；加入 0. lmol/L磷酸盐缓冲液0. 017ml，加入8mol/L磷酸盐缓冲液0. 017ml，最后补加甘露醇注射液至0. 5ml。具体实施例2(1)缓冲液的配制磷酸氢二钠1.5g磷酸二氢钠0. 2g注射用水IOOOml(2)水饱和酚氯仿抽提将聚肌苷酸和聚肌胞酸用0. 5%的SDS溶液溶解，配制成30mg/ml溶液，用1/4体积的水饱和酚、氯仿抽提，在lOOr/min搅拌10分钟，然后静置20分钟。取上清液加入2. 5mol/L醋酸钠溶液至浓度为0. 15mol/L,混勻后再加入2倍体积乙醇，4°C放置12小时，3000r/min离心20分钟，取沉淀。取沉淀加入一定量的PBS溶解备用。(3)聚肌苷酸和聚胞苷酸的精制将溶解好的聚肌苷酸和聚胞苷酸溶液，用注射器打入柱床内，用磷酸盐缓冲液进行洗脱。收集洗脱峰。(4)合并聚肌苷酸和聚胞苷酸将精致的聚肌苷酸溶液和聚胞苷酸溶液分别加热至60士5°C，然后将聚胞苷酸溶液缓慢加入聚肌苷酸溶液中，在IOOrpm转速下搅拌60分钟，同时调节PH8. 0左右，滴加硫酸卡那霉素200万单位，在滴加的同时不断搅拌。(5)超滤在无菌环境下用截留分子量为5KD超滤膜对样品进行浓缩，首先用无菌的每升含 100万单位硫酸卡那霉素的磷酸盐缓冲液循环平衡超滤膜2L，将合并好的聚肌胞浓缩2倍， 然后用含有硫酸卡那霉素的磷酸盐缓冲液洗脱4L。(6)过滤用0. 45um滤芯对超滤后的聚肌胞溶液进行过滤。(7)配制聚肌胞取上述聚肌胞样品1500ml，即含Img聚肌胞、含350万单位硫酸卡那霉素；加入 0. lmol/L磷酸盐缓冲液300ml，加入8mol/L磷酸盐缓冲液300ml，最后补加甘露醇注射液至 2000ml ο上述参照实施例对该一种精制聚肌胞的制备方法及用途进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本专利技术总体构思下的变化和修改，应属本专利技术的保护范围之内。权利要求1.一种精制聚肌胞的制备方法及用途，其特征在于先用化学法纯化聚肌苷酸和聚胞苷酸；再经过柱层析的方法对聚肌苷酸和聚胞苷酸进行精制；然后合并精制后聚肌苷酸和聚胞苷酸，合成精制聚肌胞溶液；将精制聚肌胞溶液经过超滤浓缩制成精制聚肌胞原液； 最后用0. 45um滤芯过滤，高压，加入辅料后进行分装，成品即为精制聚肌胞溶液。2.一种精制聚肌胞的制备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：焦月，侯本晶，赵钢，王国新，王智佳，沈丽丽，
申请(专利权)人：天津济命生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：