用于鉴定治疗癌症的化合物的方法。本发明专利技术涉及用于在那些能够激活MDA-5蛋白或增加NOXA蛋白水平并触发自体吞噬的化合物中鉴定用作癌症治疗的治疗剂的候选化合物的方法。其是基于以下事实：dsRNA感应器MDA-5的激活能够通过自主地和选择性地激活肿瘤细胞的自体吞噬和凋亡两者而不引起天然拮抗剂NOXA、MCL-1的稳定来破坏癌症细胞。本发明专利技术还涉及与运载体诸如聚乙烯亚胺聚阳离子(PEI)复合的具有相同或相似性质的双链RNA诸如聚肌苷酸-聚胞苷酸(pIC)用于制备治疗癌症的药物的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及肿瘤学领域，并且主要集中于鉴定可用于治疗不同类型的癌症，例如 黑素瘤、胰腺癌、结肠癌、膀胱癌、胶质瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和卵巢癌的化合物。此外，本专利技术还涵盖通过这样的方法鉴定的化合物，例如化合物B0-110 (参见下文)，该化合物能够在所有上文所示类型的癌症中促进彻底的肿瘤细胞死亡。
技术介绍
黑素瘤仍然是具有增加的发病率和极差的晚期预后的实体瘤的典型(Jemal等人，2008)。已付出了相当的努力来鉴定黑素瘤化学和免疫抗性的潜在分子决定物。美国食品和药物管理局(FDA)批准的用于治疗转移性黑素瘤的唯一药剂是烷化剂达卡巴嗪 (DTIC)和免疫调节物IL-2 (Tawbi和Kirkwood，2007)。然而，转移性黑素瘤的持久和完全响应罕有地使多于5%的患者受益，并且继发毒性可能使严重的。因此，具有转移性黑素瘤的患者目前的平均存活为6到10个月，所以，改进的疗法的开发在这一疾病中是优先的 (Jemal 等人，2007)。最初，称为pIC(聚肌苷-聚胞苷酸(polyinosine-polycytydylic acid))的病毒dsRNA合成类似物，一种已用于独立于干扰素(IFN)刺激免疫系统四十多年的化合物 (Field等人，1967)，被认为是针对黑素瘤的有希望的治疗剂。遗憾的是，使用裸露pIC的临床研究揭示了其低稳定性、低IFN诱导和不存在对黑素瘤的抗肿瘤效应(Robinson等人， 1976)。因此，作为单一剂，pIC被视为黑素瘤的不良药剂。高通量组织遗传学分析和系统性功能研究已显著提升了我们对黑素瘤起始和进展以及与治疗失败相关的复杂机制的了理解O^cher等人，2007 ；Gray-Schopfer等人， 2007)。鉴定了 BRAF/MAH( ；PI3K/AKT、NF-κ B或NOTCH信号级联中的一致性缺陷和改变，为理性药物设计提供了令人兴奋的平台(Gray-Schopfer等人，2007)。然而，黑素瘤试验中尚未证明靶向疗法有效(Flaherty，2006)。还评估了线粒体和/或内质网控制的死亡程序，尽管在体内常常是无效的(Hersey和a^ng，2008)。因此，目前的抗癌药物要么无法以生产性方式到达其靶标，要么必须以对正常细胞区室(compartment)造成无法耐受的毒性的剂量方案施用(Tawbi和Kirkwood，2007)。重要的是在治疗过程中可激活补偿机制，选择具有甚至更高化学抗性的细胞群(Lev等人，2004 ；Shatton等人，2008 ；Wolter等人，2007)。事实上，认为黑素瘤具有通过不同途径逃避凋亡的强大能力，这赋予黑素瘤进展、 形成转移灶和幸免于不同疗法的治疗的能力(由Ivanov等人，2003综述)。与旨在从“内部”(即通过激活细胞死亡的内在程序)杀伤肿瘤细胞的标准化学疗法相反，免疫疗法传统上涉及细胞-细胞相互作用的间接级联。在黑素瘤中，大多数努力集中于加强两个区室抗原呈递细胞和细胞毒性T细胞的水平或功能效力(Wilcox 和MarkOVic，2007)。还测试了针对抑制性免疫调节物(如CTL4)的疫苗以及抗体，尽管在IV期临床试验中遭遇挫折(Kirkwood等人，2008)。最近，进行经由激活Toll样受体 (TLR) -3、-4、-7和-9刺激先天免疫系统来支持自然杀伤细胞(NK)、树突细胞(DC)和T细胞对黑素瘤细胞的细胞毒性破坏(Kirkwood等人，2008，和1Tormo等人，2007)。然而，多项研究，包括我们自己的研究，已显示细胞通过下调(删减)免疫反应性表面标志物绕过免疫疗法的固有能力。黑素瘤还可对宿主发挥阻遏作用(如抑制抗原呈递细胞的成熟或阻断完全 T-细胞激活)(Tormo 等人，2006 ；Ilkovitch 和 Lopez, 2008 ；Verma 等人，2008)。因此， 黑素瘤呈现逃避免疫调节物的抗肿瘤活性的遗传能力。在免疫疗法领域，其增加已作为黑素瘤治疗的潜在阳性因子进行研究的分子之一是MDA-5 (黑素瘤分化相关基因5)，它是一种最初被描述为与黑素瘤分化相关的基因的产物(Kang等人，200 。MDA-5是识别并被长的双链RNA (dsRNA)激活的解旋酶(Yoneyama等人，2005)。其他RNA解旋酶是RIG-I (视黄酸诱导蛋白1，也称为Dsx58)，其识别短dsRNA 的裸露3磷酸，和LGP2 (也称为Dhx58)，其是dsRNA感应的负调节物。因为长dsRNA可由病毒在病毒感染中产生，MDA-5充当抵抗病毒病原体的先天免疫的第一线(Akira等人，2006)。此外，MDA-5具有胱天蛋白酶激活募集结构域(CARD)。合在一起，解旋酶和CARD结构域激活NF- κ B和参与细胞因子调节的其他转录因子(Kawai等人，2005)。因此，MDA-5的最熟知的功能是免疫刺激。从治疗角度讲，已知IFN-β和dsRNA均诱导Mda-5基因的转录。因此，已提出 dsRNA对IFN诱导的生长抑制中Mda-5表达的增加起作用。此外，已显示(Kang等人，2002) IFN-β对内源MDA-5的诱导是细胞生长抑制的(换言之，停止细胞周期)。因此，为了激活肿瘤细胞死亡，已以高水平异位过表达MDA-5 (Kovacsovics等人，200 。而且，MDA-5异位表达的这一促凋亡活性在具有超活性RAS/MEK/ERK途径的肿瘤细胞中是无效的(Lin等人， 2006)，黑素瘤正是这种情况(Chin等人，2006)。因此，本领域中一个待解决的问题是如何用化学治疗剂以肿瘤区室专一性方式激活内源MDA-5 (而不在正常细胞中诱导继发毒性)。美国专利申请US 2007/0259372提出通过能够增强MDA-5表达的化合物鉴定 IFN-β、IFN-α或IFN-γ的激动剂或拮抗剂。该专利还暗示Mda_5基因表达的诱导物(借助其启动子)可被视为诱导肿瘤细胞终末分化的候选化合物。它还暗示MDA-5通过其CARD 结构域在凋亡信号产生中的可能作用。然而，目前为止，尚不知道可触发凋亡的MDA-5靶标是什么，以及如何以对肿瘤细胞可示踪和选择性的方式激活该靶标。此外，由于黑素瘤细胞具有活跃的RAS/MEK/ERK活性途径(其抑制MDA-幻，以及避开凋亡性细胞死亡的显著能力， 并不明确MDA-5介导的凋亡信号将是针对黑素瘤的有效治疗机制。因此，根据有关MDA-5 调节和功能的先前信息，此蛋白并未显示作为鉴定针对黑素瘤的治疗剂的候选物的程序中的强靶标。自体吞噬显示作为参与癌症细胞的内源死亡机制的替代策略。这一过程涉及最终导致胞质溶胶组分被隔离用于随后由溶酶体的降解的事件的复杂级联(Xie和KliOnsky，2007)。取决于吞食的机制和递送至自体溶酶体的货物的性质，已描述了自体吞噬的多种机制。在抗癌治疗背景中，大量自体吞噬(macroautophagy) 或细胞内的细胞器和蛋白质聚集物的大量降解由于其通过使关键细胞器(如内质网或线粒体)功能障碍或过度剥夺这些关键细胞器来危害细胞生存力的潜能而引起关注 (Hoyer-Hansen,2008)。然而，不了解自体吞噬是如何调节的，并且其治疗潜能是不清楚和不简单的 (Hippert等人，200本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：玛丽亚索莱达·叟恩哥斯冈萨雷斯，达玛·托莫卡卢拉，
申请(专利权)人：玛丽亚索莱达·叟恩哥斯冈萨雷斯，达玛·托莫卡卢拉，
类型：发明
国别省市：
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