本发明专利技术公开了一种从天麻原药材中提取的天麻多糖WGE和其降解产物WGE-AD-I和WGE-AD-O，及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途。该天麻多糖的结构式如下，其中x和y为整数且x+y＝16；n为整数，其平均分子量为1000kD(平均分子量范围为800-1200kD)，其比旋度为[α]19D+382°(c0.05，H2O)。所述天麻多糖部分酸水解的降解产物多糖WGE-AD-I的结构重复单元与WGE一样，但平均分子量为10kD(平均分子量范围8～12kD)。另一降解产物WGE-AD-O为寡葡聚糖的混合物(分子量范围320～3,000Dalton)。该天麻多糖及其降解产物经体外实验证明能显著抑制胰腺癌细胞和黑色素瘤细胞的生长，而且对正常细胞几乎没毒性，因而有望开发为抗肿瘤药物。
【技术实现步骤摘要】
,其制备方法和应用的制作方法
本专利技术涉及一种从天麻根茎中提取的天麻多糖及其降解产物，以及天麻多糖降解产物的制备方法，本专利技术还涉及天麻多糖降解物在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
胰腺癌与黑色素瘤为临床常见肿瘤，死亡率高。尤其是胰腺癌，患者从肿瘤发现至死亡时间平均只有3-6个月。胰腺癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，是恶性肿瘤中最常见的，多发生于胰头部。 胰腺癌被称为癌症中的王中之王，因其手术成功率低，病情恶变快，患者疼痛剧烈，大多都以短期治疗缓解症状，延长生命为主，然后再考虑如何治愈。一般认为胰腺癌对于放疗和化疗均不甚敏感，多数药物的近期有效率低于10%。相比之下较为有效的药物有5-氟脲嘧啶(5-Fu)、丝裂霉素(MMC)、链脲霉素(STZ)、阿霉素(ADM)/表阿霉素(E-ADM)、异环磷酰胺 (IFO)、吉西他滨(GEM)以及雷替曲塞(Raltitrexed，Tomudex)等。对于转移性或局部晚期合并广泛腹膜播散的胰脏癌，化疗扮演了重要的角色。但是因为这些药物或者化疗都会对病人的身心带来巨大的副作用，目前正在寻在更好的候选药物。黑色素瘤是一种恶性程度相当高的恶性肿瘤，又称恶性黑瘤，是死亡率最高的一种皮肤癌。大多原发于皮肤，也可起源于眼、鼻腔等处，早期可发生转移，转移部位多见肺、 脑。治疗黑色素瘤的药物主要有亚硝脲类药物与氮烯咪胺(DTIC)。但是这些药物的毒性给患者带来了巨大的痛苦，因此，如果能研发出有抗肿瘤活性又对正常细胞毒性较小的药物，无疑是肿瘤治疗的一个重大突破。天麻(Gastrodia elata BL.)是一味常用而比较名贵的中药。之前有本专利技术人的相关研究已经报道(Hong Qiu ；Wei Tang ；Xiankun Tong ；Kan Ding Jianping Zuo. Carbohydr. Res. 2007，342，2230-2236.)从天麻中分离得到的一个均一多糖，它的硫酸化衍生物可以通过抑制血管生成进而抑制肿瘤生长。在本专利技术中专利技术人基于以往的研究从天麻中分离得到一个天麻均一多糖(编号 WGE)，该多糖与上述已报道结构有一定的相似性，但分子量相差巨大，是一种新的多糖化合物。在8mg/ml剂量下能有效抑制胰腺癌细胞和黑色素瘤细胞的生长，其抑制率分别为45% 和32%。它的降解产物(编号WGE-AD-I和WGE-AD-0)有更好的活性，其中WGE-AD-I是 WGE酸降解产物的透析袋内成分，WGE-AD-O是WGE酸降解产物的透析袋外成分。特别是 WGE-AD-0,在lmg/ml剂量下表现出比原多糖WGE在8mg/ml剂量更强的活性，它对胰腺癌细胞和黑色素瘤细胞的抑制率分别为42%和50%。在2mg/ml的浓度下，对胰腺癌的抑制率为87%。同时，原多糖与其降解产物对正常肝细胞几乎都没有毒性，因而有望开发为抗肿瘤药物。
技术实现思路
因此，本专利技术的一个目的在于提供一种从天麻中提取的天麻多糖，该天麻多糖的结构式如下 权利要求1.从天麻根茎中提取的天麻多糖WGE，其中该天麻多糖的结构式如下2.一种如权利要求1所述的天麻多糖的降解产物WGE-AD-I，其特征在于，所述降解产物WGE-AD-I按照以下方式获得将权利要求1中所述天麻多糖WGE置于干燥烧瓶中，加入1. Omol/L三氟乙酸，密塞， 100°C保温0. 5至3h，反应液经减压蒸馏除去三氟乙酸后，对蒸馏水透析，透析袋内液浓缩后冻干，得到天麻多糖降解产物WGE-AD-I ；该天麻多糖降解产物WGE-AD-I的结构重复单元与权利要求1中所述天麻多糖WGE — 样，其分子量范围为8kD-12kD，平均分子量为IOkD;其比旋度为19D+78°，其中测试条件为19°C，浓度为0. 05g/100ml的水溶液。3.—种如权利要求1所述的天麻多糖的降解产物WGE-AD-0，其特征在于所述降解产物WGE-AD-I按照以下方式获得将权利要求1中所述天麻多糖WGE置于干燥烧瓶中，加入1. Omol/L三氟乙酸，密塞， 100°C保温0. 5至3h，反应液经减压蒸馏除去三氟乙酸后，对蒸馏水透析，透析袋外液浓缩后冻干，得到天麻多糖降解产物WGE-AD-O ；该天麻多糖降解产物WGE-AD-O为寡糖混合物，其中包括葡萄糖单糖，以及2-19个单糖组成的葡聚糖；其平均分子量为3kD;其比旋度为19D+142°，其中测试条件为19°C，浓度为0. 05g/100ml的水溶液。4.一种从天麻根茎中提取权利要求所述天麻多糖的方法，该方法包括以下步骤(1)取天麻原药材，用95%乙醇脱脂，脱脂后室温自然干燥。干燥后的天麻原药材用沸水提取4至6次，每次4h到他，天麻原药材与每次加水量的比例为Ikg药材加水8至10L， 硫酸-苯酚法检测提取液的糖含量，直至糖反应不明显；(2)将每次的提取液合并，最终浓缩至5-15L，扎透析袋，以截留分子量约为3000，对流动水透析三天，透析袋内液浓缩至5-10L，加入5-10L 30% (W/V)三氯乙酸溶液，使其终浓度为15% (W/V)，脱蛋白，之后用10% NaOH中和至pH为7.0至8.0，对流动水透析三天去蛋白，以透析袋截留分子量约为3kD，内液浓缩至5L，离心去沉淀，上清液加入3至4倍95 % 乙醇沉淀，静置，沉淀离心，用95%乙醇洗涤数次后烘干，得到天麻水提粗多糖GE ；(3)取步骤O)中的水提粗多糖GE，适量水溶解，离心除去不溶物，上清液通过二乙基氨乙基纤维素柱进行分离，逐步以蒸馏水、0. lmol/L NaCl洗脱， 硫酸-苯酚法绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线分别收取合并洗脱液，其中0. lmol/L NaCl洗脱液经浓缩至30-40ml，装透析袋以截留分子量为3kD，对蒸馏水透析4至6次，每次2L，透析袋内液冷冻干燥后得到白色絮状固体，为天麻多糖WGE。5.根据权利要求1至3中任意一项所述天麻多糖或其降解产物在制备抗肿瘤药物中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其中所述肿瘤为胰腺癌与黑色素瘤。全文摘要本专利技术公开了一种从天麻原药材中提取的天麻多糖WGE和其降解产物WGE-AD-I和WGE-AD-O，及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途。该天麻多糖的结构式如下，其中x和y为整数且x+y＝16；n为整数，其平均分子量为1000kD(平均分子量范围为800-1200kD)，其比旋度为19D+382°(c0.05，H2O)。所述天麻多糖部分酸水解的降解产物多糖WGE-AD-I的结构重复单元与WGE一样，但平均分子量为10kD(平均分子量范围8～12kD)。另一降解产物WGE-AD-O为寡葡聚糖的混合物(分子量范围320～3,000Dalton)。该天麻多糖及其降解产物经体外实验证明能显著抑制胰腺癌细胞和黑色素瘤细胞的生长，而且对正常细胞几乎没毒性，因而有望开发为抗肿瘤药物。文档编号A61K31/7016GK102464725SQ201010548119公开日2012年5月23日 申请日期2010年11月17日 优先权日2010年11月17日专利技术者丁侃, 曹殿秀, 陈霞 申请人:中国科学院上海药物研究所本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：丁侃，陈霞，曹殿秀，
申请(专利权)人：中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。