本发明专利技术涉及具有有机磷水解酶活性的分离的多肽和编码所述多肽的分离的多核苷酸。本发明专利技术还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及用于产生和使用所述多肽的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】涉及序列表本申请包含计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式的序列表通过提述并入本文。涉及生物材料的保藏本申请包含对于生物材料保藏的提及，所述保藏通过提述并入本文。关于完整的信息，参见说明书最后一段。
本专利技术涉及具有有机磷水解酶活性的分离的多肽和编码所述多肽的分离的多核苷酸。本专利技术还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用所述多肽的方法。
技术介绍
本领域已知有机磷化合物。具体而言，已知一些战争药剂(warfare agent)为有机磷化合物如沙林(Sarin)、环沙林(Cyclosarin)和梭曼/索曼(Soman)。其他有机磷化合物作为农药为人所知。需要能够使被上述有机磷化合物污染的区域去污染。已提出将具有有机磷水解酶活性如二异丙基氟磷酸酶(diisopropylfluorophosphatase)活性的多肽用于此目的，因为此种多肽能够水解有害的有机磷化合物并由此将其转化为有害性较低的产物。在WO99/43791中，公开了来自鱿鱼(Loligo Vulgaris)的二异丙基氟磷酸酶，且亦描述了其用于去污染的潜在用途以及其他应用。本专利技术的目的是提供具有有机磷水解酶例如二异丙基氟磷酸酶活性的多肽和编码所述多肽的多核苷酸，特别是具有高稳定性和/或高比活性的。专利技术概述本专利技术涉及具有有机磷水解酶活性的分离的多肽，所述多肽选自下组：(a)包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2的成熟多肽具有至少75％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，最优选至少90％，和甚至最优选至少95％的同一性；(b)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少中-高严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列的DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；(c)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含与SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列具有至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少96％，甚至更优选至少97％，最优选至少98％，且甚至最优选99％同一性的核苷酸序列；(d)SEQ ID NO：2的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸的变体。本专利技术还涉及编码具有有机磷水解酶活性的多肽的分离的多核苷酸，所述多核苷酸选自下组：(a)编码包含氨基酸序列的多肽的多核苷酸，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2的成熟多肽具有至少75％同一性；(b)多核苷酸，其在至少中严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列的DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的互补链；(c)多核苷酸，其包含与SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列具有至少65％同一性的核苷酸序列；和(d)多核苷酸，其编码SEQ ID NO：2的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸的变体。本专利技术还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、重组表达载体、重组宿主细胞，和产生具有有机磷水解酶活性的多肽的方法。本专利技术还涉及去污染的方法，例如，通过降解有机磷化合物。具体而言，本专利技术涉及通过将本专利技术的有机磷水解酶施于经一种或多种有害的或不希望的有机磷化合物污染的区域或装置来对所述区域或装置去污染的方法。本专利技术还涉及包含编码此种具有有机磷水解酶活性的多肽的分离的多核苷酸的植物。本专利技术还涉及产生此种具有有机磷水解酶活性的多肽的方法，包括：(a)在有助于产生该多肽的条件下培养包含编码此种具有有机磷水解酶活性的多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞；和(b)回收所述多肽。附图简述图1显示了NN059104的限制图。定义：术语“有机磷水解酶”在本文中定义为针对有机磷化合物，特别是有机磷化合物包括神经毒气中的磷酐键(phosphorous anhydride bond)的水解活性。因此该术语包括具有水解酶和/或酯酶活性的酶，例如有机磷水解酶活性(EC3.1.8.1)(如有机磷酸酯酶活性)或有机磷酸酐水解酶(anhydrolase)(OPAA)活性，或羧酯酶活性，二异丙基氟磷酸酶(DFP酶)活性(EC 3.1.8.2)，脱卤酶活性，氨酰基脯氨酸二肽酶(prolidase)活性和/或亚胺二肽酶活性。术语“DFP酶(EC 3.1.8.2)”在本文中定义为二异丙基氟磷酸酶(diisopropylfluorophosphatase)、二烷基氟磷酸酶(dialkylfluorophosphatase)、氟磷酸二异丙酯水解酶(diisopropylphosphorofluoridate hydrolase)、二异丙基氟膦脱卤酶(diisopropylfluorophosphonate dehalogenase)、二异丙基磷酸氟化酶(diisopropylphosphofluoridase)、异丙基磷酸氟化酶(isopropylphosphorofluoridase)、有机磷酸脱水酶(organophosphate acid anhydrase)、有机磷酸酐水解酶(organophosphorous acid anhydrolase)、索曼酶(somanase)和塔崩酶(tabunase)。DFP酶作用于有机磷化合物(包括神经毒气)中的磷酸酐键(如磷-卤化物和磷-氰化物)。本专利技术的多肽的活性如实施例3中“酶活性的测量”所述进行测量。本发明的多肽具有SEQ ID NO：2的成熟多肽的有机磷水解酶活性的至少20％，优选至少40％，更优选至少50％，更优选至少60％，更优选至少70％，更优选至少80％，更优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少100％，或甚至更优选高于100％如110％，或120％，或130％，或140％，或甚至更优选至少或高于150％。去污染活性：本文中术语“去污染活性”应理解为去除有害试剂如有机磷化合物例如神经毒气、毒素、农药，因此该术语包括例如解毒活性。分离的多肽：术语“分离的多肽”用于本文中指由来源分离的多肽。在一个优选的方面，多肽是如通过SDS-PAGE测定的，至少1％纯，优选至少5％纯，更优选至少10％纯，更优选至少20％纯，更优选至少40％纯，更优选至<本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.05.06 EP 09159516.51.一种具有有机磷水解酶活性的分离的多肽，所述多肽选自下组：
(a)包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2的成熟多
肽具有至少75％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，最优选至少90％
和甚至最优选至少95％的同一性；
(b)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少中高严格条件下与以下
杂交：(i)SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQ ID NO：1的成熟
多肽编码序列的DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；
(c)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含与SEQ ID NO：1的成熟
多肽编码序列具有至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至
少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少
96％，甚至更优选至少97％，最优选至少98％，且甚至最优选99％同一性的
核苷酸序列；
(d)SEQ ID NO：2的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入一个或多个(几
个)氨基酸的变体。
2.权利要求1的多肽，包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列或其具有有机磷
水解酶活性的片段，或由SEQ ID NO：2的氨基酸序列或其具有有机磷水解酶
活性的片段组成。
3.权利要求2的多肽，包含SEQ ID NO：2的成熟多肽，或由SEQ ID NO：
2的成熟多肽组成。
4.权利要求1的多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸包含SEQ ID NO：
1的核苷酸序列或其编码具有有机磷水解酶活性的片段的亚序列，或由SEQ ID
NO：1的核苷酸序列或其编码具...
【专利技术属性】
技术研发人员：S丹尼尔森，LK斯科夫，R莱特，V莱兹，MLC达方塞卡，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。