靶定补体蛋白C3B的抗体的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及结合人和猕猴补体蛋白C3b的抗体及其抗原结合片段，以及使用其的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利技术背景年龄相关性黄斑变性(AMD)是进行性疾病，并且是美国年龄65岁及以上老年人视觉丧失和失明的主要原因。AMD主要影响黄斑；其为负责阅读或开车所需的高视敏度的视网膜的一部分。大多数AMD患者遭受该疾病的早期阶段，所述疾病的特征在于存在称为玻璃疣的细胞外视网膜沉积物。玻璃疣是细胞碎片的细胞外视网膜沉积物、炎症介质、和细胞外基质组分。AMD的晚期阶段表现为干涩或湿润形式，两者均与视觉丧失相关。干涩AMD，也称为地图样萎缩，在检眼镜检查中呈现为界线清楚的区域，其对应于视网膜色素上皮细胞(RPE)丧失的局部区域。湿润AMD与脉络膜的新血管形成相关，引起Bruch’s膜完整性受损和视网膜中脉管生长，其中它们经常出血。这种渗漏引起对视网膜细胞的永久性损伤，它们相继死亡的，并在中央视觉区产生盲点。人先天性系统由补体途径组成。补体途径作用于防御化脓性细菌感染，桥接先天性和适应性免疫；并去除免疫复合体的产物和炎性损伤。补体是在血浆和细胞表面参与级联反应的多于30种蛋白质的系统。补体系统及其补体组分参与多种免疫过程。例如，补体C5b-9复合体，也称为末端复合体或膜攻击复合体(MAC)，通过诱导膜通透性损伤而在细胞死亡中起重要作用。近期工作已经证明，补体组分C3和C5是AMD患者中玻璃疣的主要成分。Mulling，R.F.等(2000)FASEB J 14，835-46。已经推测它们以及膜攻击复合体(MAC)C5b-9和其它急性期反应蛋白在玻璃疣上RPF细胞中的存在参与了可激发补体激活和MAC形成的过程。Johnson，L等(2001)Exp Eye Res 73，887-896。因此，越来越多的证据表明，补体组分不仅仅是先天性免疫的介体。已经建议营养干预用于抑制干涩AMD发展成湿润AMD。目前，仅FDA批准的湿润AMD的治疗包括光动力学疗法(PDT)、抗VEGF适体，如pegaptanib，和抗VEGF抗体ranibizumab。这些药物或治疗通常向已患有重大视觉丧失的患者施用。仍然需要开发AMD的有效治疗，来替换或补充目前的治疗。尤其是，需要可以提供早期检测、预防或恢复视觉丧失的治疗。专利技术概述本专利技术涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人或猕猴补体C3b蛋白，其中所述抗体以低于或等于100pM的KD结合人C3b，并以低于或等于200pM的KD结合猕猴C3b。例如，此处描述的抗体或抗原结合片段可以低于或等于90pM、低于或等于80pM、低于或等于70pM、低于或等于60pM、低于或等于50pM、低于或等于40pM、低于或等于30pM，并优选高达低于或等于20、19、18、17、16、15、14、13、12或11pM的KD结合人C3b。优选的是，抗体或其抗原结合片段以低于或等于10pM的Kd结合人C3b。例如，抗体或其抗原结合片段可以低于或等于9pM、低于或等于8pM、低于或等于7pM、低于或等于6pM、低于或等于5pM、低于或等于4pM、低于或等于3pM、低于或等于2pM，或高达低于或等于1pM的KD结合C3b。此处描述的抗体或抗原结合片段可以低于或等于250pM、低于或等于240pM、低于或等于230pM、低于或等于220pM、低于或等于210pM、低于或等于200pM、低于或等于190pM、低于或等于180pM、低于或等于170pM、低于或等于160pM、低于或等于150pM、低于或等于140pM、低于或等于130pM、低于或等于120pM、低于或等于110pM、低于或等于100pM、低于或等于90pM、低于或等于80pM、低于或等于70pM、低于或等于60pM、低于或等于50pM、低于或等于40、39、38、37、36、35、34、33、32或31pM、低于或等于30pM、低于或等于20、19、18、17、16、15、14、13、12或11pM并优选高达低于或等于10、9、8、7、6、5、4、3、2或1pM的KD结合猕猴C3b。优选通过溶液平衡滴定(SET)测定此处描述的抗体的结合亲和力。SET的方法为本领域所知并在下文中进行了进一步的详细描述。本专利技术的抗体可用于抑制补体旁路。例如，此处描述的抗体或其片段如体外溶血测定所测定以低于或等于70nM、优选低于或等于65nM、优选低于或等于50nM、优选低于或等于40nM、30nM或20nM，并更优选低于或等于10nM的IC50抑制补体旁路。此处描述的抗体或其片段如体外溶血测定所测定以低于或等于100nM、优选低于或等于90nM、优选低于或等于80nM、优选低于或等于75nM，并更优选低于或等于70nM的IC50抑制猕猴中的补体旁路。此处描述的抗体或其片段如体外C3b沉积所测定以低于或等于30nM、低于或等于25nM、低于或等于20nM，并优选低于或等于10nM的IC50抑制补体旁路。此处描述的抗体或其片段可如体外C3b沉积所测定以低于或等于70nM、低于或等于50nM、低于或等于40nM，并优选低于或等于30nM的IC50抑制猕猴中的补体旁路。此处描述的抗体或其片段如补体膜攻击复合体的沉积所测定以低于或等于5nM，优选低于或等于4nM、3nM、2nM，并更优选低于或等于1nM的IC50抑制补体旁路。此处描述的抗体或其片段如补体膜攻击复合体的沉积所测定以低于或等于20nM，优选低于或等于19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM或13nM，并更优选低于或等于10nM的IC50抑制猕猴中的补体旁路。此处描述的抗体或其片段如通过产生C3a和C5a测定以低于或等于100nM，优选低于或等于90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM或20nM，并更优选低于或等于10nM抑制补体旁路。本专利技术描述的抗体或其抗原结合片段优选具有如表12中所示的Fab的结合特征。本专利技术还包括分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人或猕猴的补体C3b蛋白，并与表1中描述的抗体交叉竞争。此处描述的抗体或其抗原结合片段可以是单克隆抗体、人或人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段、Fv片段、F(ab’)2片段、或ScFv片段、和/或IgG同种型。本专利技术的抗体可包括这样的构架，其中氨基酸已经替换成来自各人VH或VL种系序列的抗体构架。一方面，本专利技术的抗体以比所述抗体结合C3的亲和力高至少1000倍的亲和力结合C3b。本专利技术包括具有表1中抗体9556的重链和轻链序列本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.05.06 US 61/175,8601.分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人或猕猴补体C3b
蛋白，其中所述抗体以低于或等于100pM的KD结合人C3b。
2.权利要求1的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗
原结合片段也以低于或等于250pM的KD结合猕猴C3b。
3.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体
或其抗原结合片段以低于或等于10pM的KD结合人C3b。
4.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体
或其抗原结合片段以低于或等于2pM的KD结合人C3b。
5.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体如通过体外溶血测
定法所测定以低于或等于65nM的IC50抑制人补体旁路。
6.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体如通过体外C3b
沉积所测定以低于或等于50nM的IC50抑制人补体旁路。
7.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体如通过补体膜攻击
复合体的沉积所测定以低于或等于5nM的IC50抑制人补体旁路。
8.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体如通过产生C3a
和C5a所测定以低于或等于100nM的IC50抑制补体旁路。
9.权利要求1的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗
原结合片段特异性结合人或猕猴的补体C3b蛋白，并与表1中描述的抗体
交叉竞争。
10.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
11.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是人或人源化抗
体。
12.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
13.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是单链抗体。
14.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是Fab片段或
ScFv片段。
15.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体是IgG同种型。
16.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体包含这样的构架，
其中氨基酸已经替换到来自各人VH或VL种系序列的抗体构架。
17.任一前述权利要求的分离的抗体，其中所述抗体以比所述抗体结
合C3的亲和力高至少1000倍的亲和力结合C3b。
18.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗
体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NOs：1、15、29、43、57、71、85、
99、113、127、141、155、169和183的重链CDR1；选自SEQ ID NOs：2、
16、30、44、58、72、86、100、114、128、142、156、170和184的重链
CDR2；和选自SEQ ID NOs：3、17、31、45、59、73、87、101、115、129、
143、157、171和185的重链CDR3，其中所述分离的抗体或其抗原结合
片段结合补体蛋白C3b。
19.任一前述权利要求的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗
体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NOs：4、18、32、46、60、74、88、
102、116、130、144、158、172和186的轻链CDR1；选自SEQ ID NOs：
5、19、33、47、61、75、89、103、117、131、145、159、173和187的
轻链CDR2；和选自SEQ ID NOs：6、20、34、48、62、76、90、104、118、
132、146、160、174和188的轻链CDR3，其中所述分离的单克隆抗体或
其抗原结合片段结合补体蛋白C3b。
20.权利要求18的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗
体还包含选自SEQ ID NOs：4、18、32、46、60、74、88、102、116、
130、144、158、172和186的轻链CDR1；选自SEQ ID NOs：5、19、
33、47、61、75、89、103、117、131、145、159、173和187的轻链
CDR2；和选自SEQ ID NOs：6、20、34、48、62、76、90、104、11...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·埃特马德吉尔博特逊，B·C·吉尔德，YI·金，I·克拉格，A·克劳泽，M·罗古斯卡，I·斯普劳斯基，K·赵，
申请(专利权)人：诺瓦提斯公司，
类型：发明
国别省市：