一种螃蟹体液的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种螃蟹体液的提取方法，属于生物技术领域。本发明专利技术方法是用注射器针头插入螃蟹活体内，轻轻抽取螃蟹活体内体液，然后将抽取液立即放入预先加有乙二胺四乙酸盐抗凝剂溶液或草酸盐抗凝剂溶液的容器中，调整抗凝剂溶液添加量，使抗凝剂在抽取液中的浓度在一定范围，充分混合后，用过滤介质过滤，再以4000rpm/min～8000rpm/min的转速，离心2min～10min，得澄清液，最后向澄清液中加入pH在5.5～7.5范围的磷酸缓冲液，得螃蟹体液存储液，将螃蟹体液存储液暂存于0℃～4℃冷藏室或在－80℃～－20℃下长期保存备用。本发明专利技术方法操作简单、不需昂贵设备，螃蟹体液蛋白质含量高、杂质少。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种动物体液的提取方法，特别是。
技术介绍
贝类麻痹性毒素(简称PSP毒素)是由毒甲藻或产毒微生物产生，通过食物链蓄积于贝类或一些鱼类以石房蛤毒素为基本骨架的一类衍生化合物。由于PSP毒素分布范围广，由麻痹性毒素导致的食物中毒发生频率高，目前已经被列入贝类安全监控的常规检测指标。有学者尝试通过化学药物或者免疫学方法寻找解毒药物，遗憾的是，到目前为止， 尚未找到理想的解毒药物。本专利技术的专利技术人所在课题组以火红皱皮蟹、钝齿短桨蟹和方形大额蟹等潮间蟹为研究材料对其进行了抗毒性研究，发现这些潮间蟹体液均有不同程度的抗毒效果，有较好的研究开发前景。目前对螃蟹体液的研究尚无任何报道，这在一定程度上阻碍了相关研究的进展。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，为螃蟹体液的开发利用提供成熟的提取方法和技术。本专利技术的技术方案，包含如下步骤(1)体液抽取用注射器针头插入螃蟹活体内，抽取螃蟹活体内体液，得抽取液；(2)抗凝处理抽取完毕，立即将抽取液放入预先加有抗凝剂溶液的体液接收容器中，充分混合，得到混合液；(3)过滤除杂处理将混合液过滤、离心，得澄清液；(4)储存液处理向澄清液中加入磷酸缓冲液， 混合均勻后，得到螃蟹体液储存液并置于冷藏室保存，如果长时间不用可置于条件下保存备用。所述螃蟹活体是指从水体中捕获、具有生命体征的螃蟹个体。所述抗凝剂溶液是以乙二胺四乙酸盐或草酸盐中的任何一种作为抗凝剂所配置而成的水溶液。所述抗凝剂溶液以乙二胺四乙酸盐作为抗凝剂时，根据步骤(1)所得抽取液体积， 调整的乙二胺四乙酸盐抗凝剂溶液添加量，使乙二胺四乙酸盐在步骤(2)所得混合液中的浓度在4 mmol/L 20 mmol/L范围。所述抗凝剂溶液以草酸盐作为抗凝剂时，根据步骤(1)所得抽取液体积，调整草酸盐抗凝剂溶液添加量，使草酸盐在步骤(2)所得混合液中的浓度在2 mmol/L 10 mmol/L 范围。所述过滤是指用滤纸、绢布和棉花中的任何一种过滤介质滤除步骤(2)所得混合液中的泡沫和杂质。所述离心是指在转速4000 rpm/min 8000 rpm/min条件下，离心机离心2 min 10 min，使不溶物颗粒沉降后，去除沉淀物。所述储存液处理是指向每升澄清液中加入IOOml浓度为100 mmol/L 500 mmol/ L的磷酸缓冲液，使所得螃蟹体液存储液中磷酸盐浓度在10 mmol/L 50 mmol/L范围。所述磷酸缓冲液是指用相等浓度的磷酸二氢盐溶液和磷酸盐溶液互相混合，调整磷酸二氢盐溶液和磷酸盐溶液的添加量，使其混合后的PH值在5. 5 7. 5范围后，得到的磷酸缓冲液。所述乙二胺四乙酸盐为乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钾中的一种；所述草酸盐为草酸钠、草酸钾中的一种。所述螃蟹体液储存液的保存条件为暂存于0°C 4°C冷藏室或在一 80°C _20°C 下长期保存。本专利技术相对于现有技术的有益效果是本专利技术的螃蟹体液提取方法操作简单、不需昂贵设备，采用本专利技术方法提取所得到的螃蟹体液蛋白质含量高、杂质少。具体实施例方式下面通过实施例对本专利技术做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本专利技术，并不限制本专利技术的范围。实施例一1、螃蟹体液抽取一手拿起将螃蟹活体，另一手将注射器针头插入螃蟹活体内，轻轻拉动注射筒芯杆，使螃蟹体液流入注射筒内，得抽取液；2、抗凝处理以乙二胺四乙酸二钠作为抗凝剂，在体液接收容器中预先加入1体积的 20 mmol/L乙二胺四乙酸二钠抗凝剂溶液；在螃蟹体液抽取完毕后，立即将抽取得到的1体积的抽取液加入接收容器内，充分混合均勻，此时乙二胺四乙酸二钠抗凝剂在螃蟹体液中的浓度为10 mmol/L ；3、过滤除杂处理用滤纸作为过滤介质滤除螃蟹体液中的泡沫和杂质，并用离心机在转速4000 rpm/min条件下离心5 min，使不溶物颗粒沉降，并去除沉淀物，得到澄清液；4、储存液处理向每升澄清液中加入100毫升浓度为100mmol/L，pH为6. 5的磷酸缓冲液，使螃蟹体液储存液中磷酸盐浓度为10 mmol/L，混合均勻后暂存于0°C冷藏室冷藏。实施例二1、螃蟹体液抽取一手拿起将螃蟹活体，另一手将注射器针头插入螃蟹活体内，轻轻拉动注射筒芯杆，使螃蟹体液流入注射筒内，得抽取液；2、抗凝处理以乙二胺四乙酸二钾作为抗凝剂，在体液接收容器中预先加入1体积的 20 mmol/L乙二胺四乙酸二钾抗凝剂溶液；在螃蟹体液抽取完毕后，立即将抽取得到的4体积的抽取液加入接收容器内，充分混合均勻，此时乙二胺四乙酸二钾抗凝剂在螃蟹体液中的浓度为4 mmol/L ；3、过滤除杂处理用绢布作为过滤介质滤除螃蟹体液中的泡沫和杂质，并用离心机在转速6000 rpm/min条件下离心2 min，使不溶物颗粒沉降，并去除沉淀物，得到澄清液；4、螃蟹体液储存液处理向每升澄清液中加入100毫升浓度为300mmol/L, pH为5. 5 的磷酸缓冲液，使螃蟹体液储存液中磷酸盐浓度为30 mmol/L，混合均勻后暂存于4°C冷藏室冷藏。实施例三1、螃蟹体液抽取一手拿起将螃蟹活体，另一手将注射器针头插入螃蟹活体内，轻轻拉动注射筒芯杆，使螃蟹体液流入注射筒内，得抽取液；2、抗凝处理以乙二胺四乙酸二钠作为抗凝剂，在体液接收容器中预先加入1体积的 40 mmol/L乙二胺四乙酸二钠抗凝剂溶液；在螃蟹体液抽取完毕后，立即将抽取得到的1体积的抽取液加入接收容器内，充分混合均勻，此时乙二胺四乙酸二钠抗凝剂在螃蟹体液中的浓度为20 mmol/L ；3、过滤除杂处理用滤纸作为过滤介质滤除螃蟹体液中的泡沫和杂质，并用离心机在转速8000 rpm/min条件下离心8 min,使不溶物颗粒沉降，并去除沉淀物，得到澄清液；4、螃蟹体液储存液处理向每升澄清液中加入100毫升浓度为200mmol/L, pH为6. 0 磷酸缓冲液，使螃蟹体液储存液中磷酸盐浓度为20 mmol/L，混合均勻后暂存于2°C冷藏室冷藏。实施例四1、螃蟹体液抽取一手拿起将螃蟹活体，另一手将注射器针头插入螃蟹活体内，轻轻拉动注射筒芯杆，使螃蟹体液流入注射筒内，得抽取液；2、抗凝处理以乙二胺四乙酸二钾作为抗凝剂，在体液接收容器中预先加入1体积的 40 mmol/L乙二胺四乙酸二钾抗凝剂溶液；在螃蟹体液抽取完毕后，立即将抽取得到的1. 5 体积的抽取液加入接收容器内，充分混合均勻，此时乙二胺四乙酸二钾抗凝剂在螃蟹体液中的浓度为16 mmol/L ；3、过滤除杂处理用棉花作为过滤介质滤除螃蟹体液中的泡沫和杂质，并用离心机在转速5000 rpm/min条件下离心10 min，使不溶物颗粒沉降，并去除沉淀物，得到澄清液；4、螃蟹体液储存液处理向每升澄清液中加入100毫升浓度为500mmol/L, pH为7. 5 的磷酸缓冲液，使螃蟹体液储存液中磷酸盐浓度为50 mmol/L,混合均勻后于_40°C条件下保存备用。实施例五1、螃蟹体液抽取一手拿起将螃蟹活体，另一手将注射器针头插入螃蟹活体内，轻轻拉动注射筒芯杆，使螃蟹体液流入注射筒内，得抽取液；2、抗凝处理以草酸钾作为抗凝剂，在体液接收容器中预先加入1体积的10mmol/L草酸钾抗凝剂溶液；在螃蟹体液抽取完毕后，立即将抽取得到的1体积的抽取液加入接收容器内，充分混合均勻，此本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林华娟，秦小明，章超桦，姜沛宏，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：