本发明专利技术涉及一种蚓激酶干粉的制备方法，属于生物工程和酶制剂制备技术领域。一种蚓激酶干粉的制备方法，其主要特点是包括以下步骤：（1）清洗蚯蚓：（2）蚯蚓匀浆：（3）热变性：匀浆液放入50℃-55℃恒温水浴锅中，热变性0.8-1.2小时；（4）离心：变性后的匀浆液通过离心机5000-10000rpm离心8-10分钟，留上清液；（5）超滤：（6）真空冷冻干燥：超滤液进行真空冷冻干燥，冷冻时间2.5-3.5小时，冷冻温度-60℃以下，干燥真空度20pa以下，加热温度不超过50℃，干燥时间10-12小时，即可得到蚓激酶酶粉。本发明专利技术利用蛋白质在低盐浓度下溶解的方法，提取蚓激酶，与盐析沉淀蛋白质提取蚓激酶相比，酶活损失小，盐的用量小，提高了酶活，降低了成本。本发明专利技术利用蚓激酶的热稳定性，采用热变性法去除杂蛋白，进一步提高了蚓激酶的纯度，操作简单，效果明显，与对照相比酶活提高了1.7倍。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种，属于生物工程和酶制剂制备
技术介绍
蚓激酶的提取纯化通常是通过蚯蚓勻浆、盐析、离心、超滤、凝胶层析和离子交换层析等一系列步骤进行分离纯化，一般可以获得较高纯度的单个或数个组分的蚓激酶。 由于蚯蚓种类较多，故分离得到的蚓激酶的组分大小不一，有报道认为其分子量是18 42KD，pI3 5，具有激酶和纤溶酶活性的丝氨酸蛋白酶，并在热稳定性和酸稳定性上有许多相似之处。国内，工业上通常用硫酸铵盐析的方式提取蚓激酶，硫酸铵用量大，成本高，如果硫酸铵不进行回收或回收不当会造成原料浪费及环境污染，而且蚓激酶酶活不高。实验室采用的层析、离子交换、分子筛、凝胶电泳等手段从不同品系的蚯蚓中获得多种纤溶酶单纯组分，操作麻烦，流程长，且酶活力损失很大，比活力也不高，一般在200 900证/mg，不适合工业化生产。如何从蚯蚓中简单高效地提取蚓激酶，并进行工业化推广，是目前要解决的当务之急。中国专利CN1414095 A公开了一种用聚丙烯酸钠盐制备蚓激酶，蚓激酶活性 260Uk/mg,生产收率3. 5%左右。中国专利CN1089369C公开了一种用超滤、亲和层析、离子交换及分子筛等技术组合方式分到了 3种有纤溶活性的蚓激酶。后续操作繁琐，成本较高，不利于规模化推广生产。
技术实现思路
本专利技术的目的在于避免现有技术的不足提供一种蚓激酶干粉。本专利技术的又一目的在于提供一种。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为一种蚓激酶干粉，其特征是包括如下从蚯蚓中提取制备的一组蛋白水解酶，棕色粉末，味腥，有吸湿性，按干燥品计算，每 Img效价大于1200U尿激酶单位。一种，其主要特点是包括以下步骤(1)清洗蚯蚓用自来水浸泡蚯蚓，洗净蚯蚓体表泥污及蚯蚓体内排泄物，并浙干；(2)蚯蚓勻浆称取0.8-1. 2重量份浙干的蚯蚓，加入6-10重量份的0. 9%-2%的氯化钠盐水，在勻浆机中勻浆5分钟。勻浆液室温静zhi，放置3. 5-4. 5小时；(3)热变性勻浆液放入50°C-55°C恒温水浴锅中，热变性0. 8-1. 2小时；(4)离心变性后的勻浆液通过离心机5000-10000rpm离心8_10分钟，留上清液；(5)超滤上清液通过截留分子量7-9k的超滤膜，进行除盐及小分子；浓缩3.5-4. 5倍；(6)真空冷冻干燥超滤液进行真空冷冻干燥，冷冻时间2.5-3. 5小时，冷冻温度_60°C3以下，干燥真空度20pa以下，加热温度不超过50°C，干燥时间10-12小时，即可得到蚓激酶酶粉。本专利技术的有益效果如下(1)本专利技术利用蛋白质在低盐浓度下溶解的方法，提取蚓激酶，与盐析沉淀蛋白质提取蚓激酶相比，酶活损失小，盐的用量小，提高了酶活，降低了成本。本专利技术酶活1350U/mg，得率5%左右；(2)本专利技术利用蚓激酶的热稳定性，采用热变性法去除杂蛋白，进一步提高了蚓激酶的纯度，操作简单，效果明显，与对照相比酶活提高了 1.7倍；(3)本专利技术工艺简单，流程短，得率大，酶活较高，适合工业化推广生产。具体实施例方式以下对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例1 一种蚓激酶干粉，包括如下从蚯蚓中提取制备的一组蛋白水解酶，棕色粉末，味腥，有吸湿性，按干燥品计算，每Img效价大于1200U尿激酶单位。实施例2 —种，其特征是包括以下步骤(1)清洗蚯蚓用自来水浸泡蚯蚓，洗净蚯蚓体表泥污及蚯蚓体内排泄物，并浙干；(2)蚯蚓勻浆称取浙干的蚯蚓500g，加入4L0. 9%-2%的氯化钠盐水，在勻浆机中勻浆 5分钟。勻浆液室温静止，放置4小时；(3)离心勻浆液通过离心机5000-10000rpm离心10分钟，留上清液；(4)超滤上清液通过截留分子量池的超滤膜，进行除盐及小分子；4L上清液，超滤后体积为1L，浓缩4倍；(5)真空冷冻干燥超滤液进行真空冷冻干燥，冷冻时间3小时，冷冻温度-60°C以下， 干燥真空度20pa以下，加热温度不超过50°C，干燥时间12个小时，即可得到蚓激酶酶粉。 可得到蚓激酶酶粉48g，酶活测定，794UK/mgo实施例3 —种，其特征是包括以下步骤(1)清洗蚯蚓用自来水浸泡蚯蚓，洗净蚯蚓体表泥污及蚯蚓体内排泄物，并浙干；(2)蚯蚓勻浆称取浙干的蚯蚓500g，加入4L0. 9%-2%的氯化钠盐水，在勻浆机中勻浆 5分钟。勻浆液室温静止，放置4小时；(3)热变性勻浆液放入50°C-55°C恒温水浴锅中，热变性1小时；(4)离心变性后的勻浆液通过离心机5000-10000rpm离心10分钟，留上清液；(5)超滤上清液通过截留分子量池的超滤膜，进行除盐及小分子；4L上清液，超滤后体积为1L，浓缩4倍；(6)真空冷冻干燥超滤液进行真空冷冻干燥，冷冻时间3小时，冷冻温度-60°C以下， 干燥真空度20pa以下，加热温度不超过50°C，干燥时间12个小时，即可得到蚓激酶酶粉。 即可得到蚓激酶酶粉^g，酶活测定，1150UK/mgo实施例4 一种，以下步骤(1)清洗蚯蚓用自来水，浸泡蚯蚓，洗净蚯蚓体表泥污及蚯蚓体内排泄物；(2)蚯蚓勻浆称取浙干的蚯蚓500g，加入4L2%的氯化钠盐水，在勻浆机中勻浆5分钟。勻浆液室温静止，放置4小时；(3)热变性勻浆液放入55°C恒温水浴锅中，热变性1个小时；(4)离心变性后的勻浆液通过离心机IOOOOrpm离心10分钟，留上清液；(5)超滤上清液通过截留分子量池的超滤膜，进行除盐及小分子，4L上清液，超滤后体积为1L，浓缩4倍；(6)真空冷冻干燥超滤液进行真空冷冻干燥，冷冻时间3个小时，干燥真空度20pa以下，加热温度不超过35°C，干燥时间12个小时，得到蚓激酶酶粉25g，经酶活测定，1350UK/ mg0 表1不同实施例下产物的效价及得率以上所述仅为本专利技术的较佳实施例，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。权利要求1.一种蚓激酶干粉，其特征是包括如下从蚯蚓中提取制备的一组蛋白水解酶，棕色粉末，味腥，有吸湿性，按干燥品计算，每Img效价大于1200U尿激酶单位。2.一种，其特征是包括以下步骤(1)清洗蚯蚓用自来水浸泡蚯蚓，洗净蚯蚓体表泥污及蚯蚓体内排泄物，并浙干；(2)蚯蚓勻浆称取0.8-1. 2重量份浙干的蚯蚓，加入6-10重量份的0. 9%-2%的氯化钠盐水，在勻浆机中勻浆5分钟，勻浆液室温静止，放置3. 5-4. 5小时；(3)热变性勻浆液放入50°C-55°C恒温水浴锅中，热变性0. 8-1. 2小时；(4)离心变性后的勻浆液通过离心机5000-10000rpm离心8_10分钟，留上清液；(5)超滤上清液通过截留分子量7-9k的超滤膜，进行除盐及小分子；浓缩3.5-4. 5倍；(6)真空冷冻干燥超滤液进行真空冷冻干燥，冷冻时间2.5-3. 5小时，冷冻温度_60°C 以下，干燥真空度20pa以下，加热温度不超过50°C，干燥时间10-12小时，即可得到蚓激酶酶粉。全文摘要本专利技术涉及一种，属于生物工程和酶制剂制备
一种，其主要特点是包括以下步骤(1)清洗蚯蚓(2)蚯蚓匀浆(3)热变性匀浆液放入50℃-55℃恒温水浴锅中，热变性0.8-1.2小时；(4)离心变性后的匀本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：甘伯中，高维东，纪银莉，宋礼，何潇，张玉平，唐兴宇，
申请(专利权)人：甘肃华羚生物技术研究中心，甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：
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