ABO、RhD血型定型检测卡的制备方法技术

本发明专利技术提供ABO、RhD血型定型检测卡的制备方法，选用葡聚糖凝胶较之使用聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶灵敏度准确性更高。应用生理盐水溶液作为凝胶悬浮介质，用于凝胶处理，在节约生产成本的同时，又达到维持凝胶稳定的效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供一种，是对现有制备方法的改进，属于医学检测

技术介绍
人类红细胞血型是同种异型抗原，是人类遗传多态性标志之一。输血前血型定型和交叉配血是人类安全输血的保证，血型相容性检测是确保安全输血的最重要条件之一。Rh血型系统是仅次于ABO血型系统的重要血型系统，也是红细胞血型系统中最为复杂的一个系统，目前国际输血协会(ISBT)已确认的Mi血型抗原有48个。其中D、C、c、 Ε、e五种抗原抗原性最强，而D抗原抗原性又最强。由于MiD血型不合所引起的输血反应最为常见。微柱凝胶免疫检测技术是20世纪90年代产生的一种免疫检测技术，其基本原理是利用分子筛技术，离心技术和特异性免疫反应技术原理，把血型血清学技术与凝胶分子筛技术有机结合起来，可灵敏地检测出可能存在的微弱血型抗原抗体反应，被认为是血型血清学检验的里程碑。目前已有类似方法提出申请(申请号为200910234608. X)，但是与本专利技术相比，其制备工艺不同，选用凝胶不同，并且在处理凝胶过程中本专利技术采用生理盐水进行处理，既能够达到是凝胶充分膨胀的作用，又能够节约生产成本。此外，在特异性抗体的选择配置过程中，本专利技术采用比较合理的溶液配比能够达到较好的检测结果。
技术实现思路
本专利技术提供一种ABO、MiD血型定型检测卡，具有灵敏度高、特异性好、质量稳定、 易于操作、易于标准化、能同时进行正反定型的ABO、RhD血型定型。本专利技术还提供了上述检测卡的制备方法，适用于工业化生产。本专利技术提供一种ABO、RhD血型定型检测卡，具有以下结构 一种ABO、RhD血型定型检测卡，其特征在于第一个微管中灌注抗A单克隆抗体微柱凝胶； 第二个微管中灌注抗B单克隆抗体微柱凝胶； 第三个微管中灌注抗D单克隆抗体微柱凝胶； 第四至第六个微管中灌注中性胶； 第四个微管作为阴性对照； 第五、第六微管作为反定型。本专利技术所述ABO、IihD血型定型检测卡的制备方法，包括以下步骤 凝胶制备将葡聚糖凝胶干粉用3 5倍体积的生理盐水凝胶悬浮溶液浸泡M 48小时，待凝胶充分膨胀后，用凝胶悬浮溶液洗涤5次，然后再用蒸馏水洗涤5次，除去凝胶破损碎片和聚集的凝胶颗粒以及凝胶中过多的盐离子；收集得到颗粒大小均勻的、且完整呈球形凝胶颗粒；选用生理盐水进行凝胶的制备具有如下优点1.既能够达到是凝胶充分膨胀的作用，又能够节约生产成本；2.浸泡M 48小时，能够使得凝胶充分溶胀，使得凝胶的膨胀率达到最佳，并减少凝胶的损失。特异性抗体配制取甘氨酸 1.5X10—3 g/ml、氯化钠 0. 85X10—3 g/ml、磷酸二氢钠 2. 4X 10_3 g/ml、磷酸二氢钠4. 8X10—3 g/ml、牛血清白蛋白0. 5 1% (每IOOml特异性抗体溶液中含有0. 5 Ig牛血清白蛋白)，以上试剂用蒸馏水溶解后，调PH为6. 6 6. 8，然后将其与抗A单克隆抗体混合，使得抗A单克隆抗体效价> 128 ；同样配方配制抗B单克隆抗体、抗D溶液单克隆抗体，使得抗B单克隆抗体效价> 128， 抗D单克隆抗体效价> 128；本专利技术配方进行抗体配置具有如下优点在节约生产成本的基础之上，能够使得抗体溶液达到最佳的反应条件，并且能够最大限度的保护抗体，使得抗体效价在1 2年内，仍然抗A效价> 128，抗B效价> 128，抗D 效价> 1280特异性凝胶配制分别取抗A单克隆抗体、抗B单克隆抗体和抗D单克隆抗体与已溶胀的葡聚糖凝胶按照1 1 6:1比例混合，间断搅拌均勻25 35分钟，即为半成品特异性胶；中性胶配制用生理氯化钠溶液与溶胀葡聚糖凝胶按照1 1 6 1混合，间断搅拌均勻 1 2小时，即得半成品的中性胶；本专利技术特异性凝胶配置，抗A、抗B和抗D特异性凝胶采用间断均勻25 35分钟，中性胶采用间断搅拌均勻1 2小时，能够使得抗体溶液与凝胶充分混勻，这样更加有利于检测时抗原抗体的充分反应，使得检测结果更加准确可信。半成品检定半成品检定主要进行特异性检测和抗体效价测定。分装按照每管M 沈μ 1凝胶液，进行分装。采取本专利技术使得特异性抗体具有如下特点1.具有较强的缓冲能力，有利于保持整个反应体系处于要求的缓冲范围，同时保证反应体系的离子强度；2.本专利技术具有独特的润滑系统，采用一定浓度的牛血清白蛋白，使得红细胞通过凝胶间隙时获得合适的润滑能力，并且比例适中，恰好使得无凝集的红细胞能够更加顺利的通过凝胶间隙，而凝集的红细胞团块则不能通过；3.本专利技术的另一关键在于反应介质的选择，经过反复试验最终选择颗粒大小适中的葡聚糖凝胶，而不是大多数厂家使用的聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶，使得检测准确性灵敏度更高。同时，应用生理盐水溶液作为凝胶悬浮介质，用于凝胶处理，在节约生产成本的同时，又达到维持凝胶稳定的效果。适当的葡聚糖凝胶浸泡时间，对于凝胶的充分膨胀非常重要。经过合理配比方式，使得凝胶能够满足制备ABO、RhD血型定型检测卡的需要，并且能够保证其产品质量。本专利技术的积极效果是选用葡聚糖凝胶较之使用聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶灵敏度准确性更高。应用生理盐水溶液作为凝胶悬浮介质，用于凝胶处理，在节约生产成本的同时， 又达到维持凝胶稳定的效果。适当的葡聚糖凝胶浸泡时间，对于葡聚糖凝胶的充分膨胀非常重要。附图说明图1:阳性反应图片；图2 可疑阳性反应图片； 图3:阴性反应图片； 图4 溶血反应图片； 图5 混合反应图片； 图6 实施例1卡式法检测结果； 图7 实施例1试管法检测结果； 图8 实施例2卡式法检测结果； 图9 实施例2试管法检测结果； 图10 实施例3卡式法检测结果； 图11 实施例3试管法检测结果。具体实施例方式以下通过具体实施例详细说明本专利技术的实施和所具有的有益效果。但不限定本专利技术权利要求保护的内容。实施例1 凝胶悬浮溶液的配制本专利技术所述凝胶悬浮溶液为生理盐水，配方如下氯化钠8. 5g ；加入蒸馏水溶解后，用蒸馏水定容1，000ml，使其终浓度为0. 85%。凝胶的制备选择颗粒大小适中的葡聚糖凝胶。将葡聚糖凝胶干粉，用3倍体积的步骤一中的凝胶悬浮溶液浸泡M小时，待凝胶充分膨胀后，用凝胶悬浮溶液洗涤5次，然后再用蒸馏水洗涤 5次。除去凝胶破损碎片和聚集的凝胶颗粒以及凝胶中过多的盐离子。收集得到颗粒大小均勻的、且完整呈球形凝胶颗粒。抗体的选择抗A单克隆抗体、抗B单克隆抗体，由长春博德生物技术有限责任公司生产，效价^ 128 ο抗D单克隆抗体，由BiotestAG生产，由长春生物制品研究所经销，效价彡128。特异性抗体溶液配方如下甘氨酸 1.5X10-3 g/ml、氯化钠 0.85X10-3 g/ml、磷酸二氢钠 2. 4X 10-3 g/ml、磷酸二氢钠4. 8X 10-3 g/ml、牛血清白蛋白0. 8% (每IOOml特异性抗体溶液中含有0. 8g牛血清白蛋白);5以上试剂用蒸馏水溶解后，调PH为6. 6。然后将其与抗A单克隆抗体混合，使得抗A效价彡128ο同样配方配制抗B单克隆抗体、抗D单克隆抗体溶液，使得抗B效价》128，抗D 效价> 1280特异性胶及中性胶的配制特异性胶配制分别取抗A单克隆抗体、抗B单克隆抗体和抗D单克隆抗体与已溶胀的葡聚糖凝胶按照1 1比例混合，间断搅拌均勻25本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ABO、RhD血型定型检测卡，其特征在于 第一个微管中灌注抗A单克隆抗体微柱凝胶； 第二个微管中灌注抗B单克隆抗体微柱凝胶； 第三个微管中灌注抗D单克隆抗体微柱凝胶； 第四至第六个微管中灌注中性胶；第四个微管作为阴性对照； 第五、第六微管作为反定型。2.根据权利要求1所述ABO、RhD血型定型检测卡的制备方法，包括以下步骤 凝胶制备将葡聚糖凝胶干粉用3 5倍体积的生理盐水凝胶悬浮溶液浸泡M 48小时，待凝胶充分膨胀后，用凝胶悬浮溶液洗涤5次，然后再用蒸馏水洗涤5次，除去凝胶破损碎片和聚集的凝胶颗粒以及凝胶中过多的盐离子；收集得到颗粒大小均勻的、且完整呈球形凝胶颗粒；特异性抗体配制取甘氨酸 1.5X10—3 g/ml、氯化钠 0. 85X10—3 g/ml、磷酸二氢钠 2. 4X 10_3 g/ml、磷酸二氢钠4. 8X ...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈维佳，王冬倩，赵继岩，贾天冰，万俊波，郭广英，冯立岗，陈云声，杨洪存，杨明，李凌波，刘春光，李秋生，庄贾明，孙启和，
申请(专利权)人：长春博迅生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：