本发明专利技术涉及AxI作为生物标志物用于检测受试者中的上皮-间质转化(EMT)的发生的用途。更具体而言，本发明专利技术涉及通过测量AxI的表达和/或活性而检测受试者中的上皮-间质转化(EMT)的发生的各种方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】采用Axl作为上皮-间质转化的生物标志物的方法本专利技术涉及用于检测上皮-间质转化(EMT) (epithelial-to-mesenchymaltransi tion)的发生的生物标志物以及诊断/预测方法。更具体而言，本专利技术涉及与AxI的表达和 /或活性有关的诊断、预测和疗法。
技术介绍
AxI为受体酪氨酸激酶亚家族的成员。尽管与其他受体酪氨酸激酶相似，但是AxI 蛋白显示出胞外区的独特结构，该结构中IgL和FNIII重复结构并列，并且还具有含胞内结构域的胞内区(其一部分为激酶结构域)。AxI通过结合生长因子(如维生素K依赖性蛋白生长停滞特异性基因6(Gas6))将信号从细胞外基质传导入细胞质。AxI的胞外结构域可被切割，并且可以释放65kDa的可溶性胞外结构域。切割增强了受体周转并生成部分激活的激酶(0' Bryan JP 等(1995) J Biol Chem. 270 (2) :551-557)。然而，被切割的结构域的功能是未知的。在专利文献WO 03/068983中描述了与人AxI基因和基因产物有关的结构信息。下列专利文献也涉及AxI或其他受体酪氨酸激酶US 5, 468, 634 ；US 6, 087, 144 ；US 5,538, 861 ；US 5,968, 508 ；US6, 211, 142 ；US 6, 235, 769 ；WO 99/49894 ；WO 00/76309 ；WO 01/16181 和 WO 01/32926。AxI参与细胞增殖的刺激。具体而言，AxI为慢性粒细胞白血病相关致癌基因，其与结肠癌和黑色素瘤也有关。AxI邻近位于19ql3. I_ql3. 2的bcl3致癌基因。AxI基因在脊椎动物物种之间是进化保守的，并且在间质细胞的发育过程中表达。与配体互相作用时，AxI开始自磷酸化，并且发生级联信号转导事件。已知 PI3K, AKT、src、Bad、14-3-3、PLC、ERK, S6K (有丝分裂原调节激酶)和STAT均参与该级联反应。具有富含y-羧基谷氨酸的区域(GLA结构域)，其允许Ca++依赖性结合至膜磷脂。是弱的有丝分裂原并且在OTH3T3成纤维细胞受到TNF诱导的细胞毒性或去除生长因子的压力时具有抗凋亡的效应。在NIH3T3中，Gas6与AxI的结合可以激活PI3K、AKT、 src 禾口 BacL已有研究表明AxI在肿瘤形成中起了很多不同的作用。AxI在包括内皮细胞迁移、 增殖和管生成在内的血管生成行为中是关键的调节子。人乳腺癌细胞在体内形成肿瘤也需要Axl，表明AxI调节的是对新生血管和肿瘤发生而言关键的过程(Holland S.等，Cancer Res2005 ；65 (20)，2005 年 10 月 15 日)。AxI受体酪氨酸激酶的活性与肿瘤转移正相关。更具体而言，已有研究表明AxI能增强AxI介导的侵染所需的MMP-9的表达。AxI通过NF-B κ和Brg-I的活化诱导ΜΜΡ-9的活性从而促进细胞侵染 CTai，K-Y 等，Oncogene (2008),27,4044-4055)。AxI在人胶质瘤细胞中过表达，并且可以用于预测患有多形性成胶质细胞瘤(GBM)患者的不良预后(Vajkoczy P.等，PNAS, April 11,2006, vol 103，no. 15， 5799-5804 ；Hutterer Μ.等，Clinical Cancer Res2008 ； 14 (I)Jan 1,2008) 与最小侵染性肺癌细胞株相比，AxI还在高侵染性肺癌细胞株中相对地过表达(Siieh，Y-S等，6Neoplasia, vol 7，no. 12，Dec 2005，1058-1064)。因此认为AxI在肿瘤侵染和发展中起到极为重要的作用。类似地，AxI在高侵染性乳腺癌细胞中过表达，而在低侵染性乳腺癌细胞中没有过表达。更具体而言，抑制AxI的信号传导(通过显性失活的AxI突变体、针对AxI的胞外结构域的抗体、或短发夹RNA基因抑制AxI)降低了高侵染性乳腺癌细胞的迁移和侵染性。小分子AxI抑制剂干扰了乳腺癌细胞的迁移和侵染。因此，AxI被认为是控制乳腺癌细胞迁移 /侵染的信号传导网络中的关键因素(aiang，Y-X等，Cancer Res 2008 ；68 (6), March 15， 2008)。在系膜细胞中发现具有致有丝分裂效应，指示其可能在肾血管球硬化症中起了一定的作用。已有证据表明fes6/AxI通路在肾小球肾炎中也起了一定作用(Yanagita M.等，The Journal of Clinical Investigation，2002，110 ( 239-246)。进一步的研究表明在动脉损伤模型中，Gas6促进内皮细胞的存活。已经表明，在血管平滑肌细胞中，血管紧张肽II通过其AT 1受体增加了 AxI的mRNA和蛋白受体(Melaragno M. G.等，Circ Res.， 1998，83 (7) :697-704)。已经证实AxI参与免疫系统中细胞粘附、细胞的增殖和动态平衡的调节(Lu Q.， 2001, Science 293(5528) :306-311)。AxI活化后，观测到以下现象凋亡的抑制、成纤维细胞和内皮细胞在“正常”细胞(非转化)存活方面的增多、血管平滑肌细胞(VSMC)的迁移 (AxI激酶的失活阻断了迁移)、血管壁中新内膜形成的增强(Melaragno M. G.等，Trends Cardiovasc Med.，1999，(Review) 9 (8) :250-253)以及参与动脉粥样硬化的病变形成和发展。本专利技术旨在提供与AxI有关的新的诊断、预测和治疗应用。特别是，本专利技术致力于提供检测上皮-间质转化(EMT)发生的方法，其在癌症(更具体为转移性和抗药性癌症) 的治疗中具有治疗意义。
技术实现思路
本专利技术的第一个方面涉及AxI作为生物标志物用于检测受试者中的上皮-间质转化(EMT)的发生的用途。本专利技术基于AxI表达与上皮-间质转化(EMT)的发生相关这一发现。据我们所知， 本专利技术第一次提出了这种相关性。有利的是，这一发现开辟了令人振奋的新机遇，其用于在癌症领域(更特别是转移性和抗药性癌症领域)中提供诊断、预测和治疗方法。本专利技术人已经证实了受体酪氨酸激酶AxI在侵染转移级联反应中作为必需的EMT 诱导效应物这一以前从未意识到的作用。结果表明EMT过程的激活导致AxI上调，这对恶性乳腺癌细胞的侵染力和自发转移以及抗药性表型而言是关键的。AxI表达与乳腺癌患者的死亡率(包括间期乳腺X光检测的肿瘤和临床鉴定的乳腺肿瘤)密切相关，表明了 AxI 激活与转移性疾病的发展之间的联系。本专利技术的第二个方面涉及检测样品中的上皮-间质转化(EMT)的发生的方法，所述方法包括以下步骤(i)从细胞、细胞群、动物模型或人中分离样品；(ii)与对照样品相比，确定样品中AxI的表达，其中相比于对照样品，AxI表达的上调指示上皮-间质转化(EMT)的发生。有利的是，AxI表达的确定提供了检测EMT事件发生的“永久性”标志物，而实际上 EMT事件发生自身是瞬时的。因此，AxI表达的检测提供了 EMT事件是否已经发生的独特而永久的指标。本申请本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：詹姆斯·布拉德利·洛伦斯，戴维·罗伯特·米克勒姆，拉尔斯·阿克斯莱，
申请(专利权)人：卑尔根技术交易股份公司，
类型：发明
国别省市：
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