使用内标物质的测定方法技术

本发明专利技术的课题在于提供在测定对象物质为蛋白质或化合物的电泳法中使用内标物质的测定方法。本发明专利技术涉及基于电泳法的测定对象物质的测定方法，该测定方法的特征在于：将(1)在分子内具有3个以上阴离子基团的化合物以及该化合物的阴离子基团的1～3个被取代为阳离子基团的化合物的组合、或(2)在分子内具有3个以上阳离子基团的化合物以及该化合物的阳离子基团的1～3个被取代为阴离子基团的化合物的组合用作内标物质，对测定对象物质的峰进行鉴定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及使用内标物质的测定对象物质的测定方法。
技术介绍
在毛细管电泳法中，以往进行的是使用1种内标物质，将其峰作为先端标记，来确定测定对象物质的大致位置(专利文献1)。但是，仅使用1种内标物质的情况下，受测定条件或试样中的夹杂物的影响，内标物质与测定对象物质的峰的位置关系发生变动。因此，在精度良好地确定测定对象物质的位置的情况下，使用分子量标记。测定对象物质为DNA或RNA的情况下，也已知使用高分子量侧与低分子量侧的2 种分子量标记来进行测定的情况。这种情况下使用的分子量标记为DNA或RNA，以其碱基数为基础进行设定。S卩，在进行DNA或RNA的电泳的情况下，通过精确设定分子量标记的位置，可以根据与2个分子量标记的位置关系来求出分子量。但是，此处使用的分子量标记为利用嵌入剂进行了标识的DNA或RNA等，具有稳定性差、在使用血清试样的情况下与试样中的物质反应、背景提高、分子量标记的峰变宽等问题。另一方面，在测定对象物质为蛋白质或化合物的情况下，根据测定对象物质的分子量或电荷的不同，其迁移度不同，因而通常仅使用1种内标物质，其使用目的也是为了确定测定对象物质的大致位置。因此，在进行这样的蛋白质或化合物的测定的情况下，目前希望开发出不具有上述DNA或RNA在测定时的问题、能够精度良好地鉴定蛋白质或化合物的测定方法。特别是在微芯片电泳这样的使用微细毛细管进行电泳的情况下，由于微细，因而即使在相同条件下进行，若进行芯片的替换，则物质的移动时间也有时会发生变化。因此， 难以确定目的峰的情况也是常见的。进一步地，在这样的测定法的情况下，为了能够进行高灵敏度测定，必须要使用不会对测定带来影响且能够灵敏度良好地进行测定的内标物质。 因此，也希望开发出在上述这样的条件下对测定物质的峰进行鉴定的测定方法。现有技术文献专利文献专利文献1 日本特开平2007-24610号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术的课题在于提供在测定对象物质为蛋白质或化合物的电泳法中。用于解决课题的手段鉴于上述状况，本专利技术人对于测定对象物质为蛋白质或化合物的情况下的利用使用内标物质的毛细管电泳法进行的测定方法的开发进行了深入研究，结果发现，作为内标物质，通过使用在分子内具有3个以上阴离子基团的化合物与该化合物的阴离子基团的1 3个被取代为阳离子基团的化合物的组合、或在分子内具有3个以上的阳离子基团的化合物与该化合物的阳离子基团的1 3个被取代为阴离子基团的化合物的组合来作为内标物质，即使测定对象物质为蛋白质或化合物，也能够容易地确定测定对象物质的峰。即，在由负朝向正方向泳动的毛细管电泳法中，由于在分子内具有3个以上阴离子基团的化合物在较早的时间被检测到峰、在分子内具有阳离子基团的化合物在较晚的时间被检测到峰， 因而通过使用在分子内具有3个以上阴离子基团的化合物与使该化合物的阴离子基团或阳离子基团的1 3个呈相反电荷的物质，能够将测定对象物质调整在2个内标物质之间， 由此能够容易地鉴定测定对象物质的峰，从而完成了本专利技术。SP，本专利技术涉及“一种基于毛细管电泳法的测定对象物质的测定方法，该测定方法的特征在于将下述(1)或( 用作内标物质，对测定对象物质的峰进行鉴定(1)在分子内具有3个以上阴离子基团的化合物和该化合物的阴离子基团的1 3个被取代为阳离子基团的化合物的组合，(2)在分子内具有3个以上阳离子基团的化合物和该化合物的阳离子基团的1 3个被取代为阴离子基团的化合物的组合”。专利技术效果根据本专利技术，即使存在相邻的2个以上的峰，也能够容易地且精度良好地确定测定对象物质。另外，此处使用的标识物质不与试样中的物质发生反应，不会带来提高背景等的影响，因而即使在微量成分的分析中也能够精度良好地进行测定。附图说明图1为示出实施例1中的DNA标识抗体的制备方法的图。图2为示出实施例1中的毛细管芯片的布置的图。图3为示意性示出实施例1中的毛细管芯片的泳动用试样与试液的配置关系的图。图4为实施例1中利用本专利技术的方法测定AFP时的电泳图谱。图5为实施例1中利用本专利技术的方法测定PIVKA II时的电泳图谱。具体实施例方式作为本专利技术的含有阴离子基团的化合物，在其分子内阴离子基团通常具有3 10 个、优选具有5 8个、更优选具有5 6个、特别优选具有5个。上述这样的化合物在由负朝向正的方向进行电泳的情况下，由于泳动速度变快，因而通常在早于任何测定对象物质的时间被检测到峰，可以作为有用的内标物质来使用。作为上述阴离子基团，可以举出例如-HP(V、-N0”-ci(V、-c0(r、-s(V，其中优选-cocr、-s(V。-cocr由于反应性高，因而适于将阳离子基团导入；-SO3-由于可以提高荧光强度，因而在对上述本专利技术的含有阴离子基团的化合物进行荧光检测时优选具有该基团。需要说明的是，对于上述阴离子基团的具体例， 只要是在电泳时(溶解于电泳溶液中时)成为阴离子基团的物质即可，可以为与氢离子键合了的酸、或碱金属盐(例如锂盐、钠盐、钾盐、铷盐)、铵盐、有机铵盐(例如三甲基铵盐、三乙基铵盐、三丙基铵盐)等盐。作为本专利技术的含有阴离子基团的化合物的具体例，可以举出例如通式所示的化合物或其盐[式中，R1 R6各自独立地表示可以具有酰胺键的、具有-C00—或-SO3-作为取代基的或无取代的烷基；R7 Rki各自独立地表示烷基、炔基、芳基、烷氧基、芳氧基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、取代氨基、-coo—、-so”卤原子、氢原子、羟基、氰基或者硝基；R11表示氢原子、烷基、炔基或者芳基；η表示0 3的整数。其中，R1 R11中的3个基团为_C00_、-S03_，或者为具有这些基团作为取代基的基团。]。上述通式所示的化合物或其盐为在635nm附近具有激发波长的荧光物质，并且在毛细管电泳中泳动的情况下峰形状呈尖峰，成为利用荧光检测的毛细管电泳测定中特别有用的内标物质。对于通式中的作为R1 R6所示烷基的取代基的-C00—或_S03_以及R7 Riq 所示的-C00-或-SO3-来说，只要是在电泳时(溶解于电泳溶液中时)成为阴离子基团的物质即可，可以为与氢离子键合了的羧酸(-C00H)或磺酸(-SO3H)等酸；碱金属盐(例如锂盐、 钠盐、钾盐、铷盐)、铵盐、有机铵盐(例如三甲基铵盐、三乙基铵盐、三丙基铵盐)等盐。对于通式中的R1 R6所示的可以具有酰胺键的、具有_C00_或_S03_作为取代基的或无取代的烷基中的烷基来说，其可以为直链状、支链状或环状中的任意一种，优选为直链状，可以举出碳原子数通常为1 10、优选为1 6、更优选为1 5的基团，具体地说，可以举出例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、 异戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、正己基、异己基、仲己基、叔己基、新己基、正庚基、异庚基、 仲庚基、叔庚基、新庚基、正辛基、异辛基、仲辛基、叔辛基、新辛基、正壬基、异壬基、仲壬基、 叔壬基、新壬基、正癸基、异癸基、仲癸基、叔癸基、新癸基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、 环庚基、环辛基、环壬基、环癸基等，其中优选例如甲基、乙基、正丙基、正戊基等直链状的烷基。对于R1 R6所示的可以具有酰胺键的、具有-C00—或-SO3-作为取代基的或无取代的烷基中的烷基来说，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：山本直之，黑泽龙雄，
申请(专利权)人：和光纯药工业株式会社，
类型：发明
国别省市：