一种肺靶向性的免疫纳米脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域。涉及一种具有肺靶向性的免疫脂质体及其制备方法。本发明专利技术的免疫脂质体，由肺表面活性蛋白A多克隆抗体、药物活性成分和纳米脂质体组成，以地塞米松磷酸钠等糖皮质激素为药物活性成分，以纳米脂质体为载体，以SP-A多抗为特异性肺组织靶向剂。本发明专利技术的免疫纳米脂质体具有明确肺靶向性，且高效、稳定的实现药物活性成分对肺部的靶向输送，使肺脏中DXM峰浓度较常规制剂提高5.08倍，12h药时曲线下面积提高40.21倍。能减少糖皮质激素用药剂量、提高对肺部疾病的疗效，同时减少全身不良反应，具有新的临床实用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
涉及一种肺靶向性的免疫脂质体，尤其涉及一种具有肺靶向性的地塞米松免疫纳米脂质体及其制备方法。
技术介绍
现有技术公开了糖皮质激素类药物具有很强的抗炎作用与免疫抑制作用，已被广泛应用于全身各系统炎症性和免疫性疾病的治疗。此类药物也广泛应用于呼吸系统疾病的治疗，如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、间质性肺疾病、肺血管炎、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征等。许多疾病，如支气管哮喘、结节病等，需长期应用激素治疗。但糖皮质激素类药物又是一类不良反应十分明显的药物，长期应用或大剂量应用常可导致一系列不良反应，如高血压、血糖升高、消化性溃疡、胃肠道出血、Cushing综合征、骨质疏松、骨无菌性坏死、骨折、伤口愈合延迟、诱发或加重感染、儿童生长迟缓等，严重时可致残或危及生命。正是由于这种“双刃剑”效应严重影响了糖皮质激素类药物的临床疗效及治疗的依从性。因此，如何扬长避短，趋利避害，最大限度地发挥此类药物的治疗效应，同时尽可能地减少其不良反应，已成为临床及基础研究中亟待解决的重要课题。近年来，纳米靶向技术的发展为这一医学难题的解决带来了希望。纳米技术已广泛应用于材料学、电子学、生物医药等多个领域并获得突破性进展。研究显示，当微粒尺寸进入纳米量级时，由于量子尺寸效应和表面效应，纳米粒子呈现出新奇的物理化学和生物学特性，如纳米技术可增加药物的溶解度，提高其生物利用度，增加药物的靶向作用，从而达到减少药物用量、增强疗效、减少副作用的目的。纳米靶向载体正成为纳米技术与药物控释技术研究的热点，其具有根据生理和智能需要来调控药物的释放，在纳米尺寸形成释药系统的特征。根据刺激信号的不同，释药系统可分为化学、物理和生物信号刺激响应性药物释放系统。生物靶向是利用抗体、细胞膜表面受体或特定基因片段的专一性作用，将配位子结合在纳米载体上，与目标细胞表面的抗原性识别器发生特异性结合，使药物或目的基因能准确送到病变组织细胞，在对病变组织细胞取得疗效的同时，又避免对正常细胞的伤害。研究还表明，II型肺泡上皮细胞是肺脏药物递送的重要靶点之一。II型肺泡上皮细胞是肺组织所特有的具有增殖和分泌功能的细胞，约占肺实质细胞总数的16%。II型细胞能合成表面活性物质，储存在板层小体中，再分泌至肺泡表面发挥生理作用。肺泡表面活性物质主要成份是约90 %的脂质和10 %的蛋白，其中蛋白成份为特异性肺表面活性蛋白 (surfactant protein，SP)，按其发现先后命名为 SP-A、SP-B、SP-C、SP-D。其中 SP-A 是由 248个氨基酸组成的亲水性糖蛋白，是最早发现且在II型肺泡上皮细胞中强烈表达、信号最为丰富的蛋白。研究发现，II型上皮细胞除具有合成和分泌SP-A的功能以外，其细胞表面同时还具有高亲和力、特异性的SP-A受体。SP-A在肺外表达量极少，在肺内则为高浓度表达，表现为肺特异性。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术存在的不足，提供一种具有肺靶向性的免疫脂质体，尤其涉及一种具有肺靶向性的地塞米松免疫脂质体。本专利技术的另一目的是提供所述免疫脂质体的制备方法。本专利技术提供的一种具有肺靶向性的地塞米松免疫脂质体，由肺表面活性蛋白A多抗、治疗药物和纳米脂质体组成。本专利技术基于所述的肺表面活性蛋白A的特性，以地塞米松磷酸钠(DXM)为治疗药物，以纳米脂质体为载体，以肺表面活性蛋白A多克隆抗体为特异性肺组织靶向剂，制备一种高效、稳定、具有明确肺靶向性的免疫纳米脂质体。本专利技术中，所述的纳米脂质体以磷脂、胆固醇和脂质体辅料等为材料制成。本专利技术中，所述的磷脂可以是大豆卵磷脂(SPC)、蛋黄卵磷脂(EPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)等。本专利技术中，所述的脂质体辅料包括二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-PEG2000 )、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-吡啶基-联巯基-丙酸酯 (DSPE-PEG2000-PDP)等。本专利技术中，肺表面活性蛋白A多抗与磷脂比例为1 IOyg多抗1μπι01 磷脂。磷脂与胆固醇的摩尔比为1.5 4:1 ； 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇 2000(DSPE-PEG2000)占脂质摩尔量的4% 15%。本专利技术中，所述的治疗药物还可以选自氢化可的松、泼尼松龙或甲泼尼龙。治疗药物与纳米脂质体中磷脂的比值为Img (治疗药物)1 20 μ mol (磷脂)。本专利技术中，地塞米松纳米脂质体形态呈球形，大小基本均一(如附图说明图1所示)。本专利技术中，地塞米松纳米脂质体平均粒径为1 士 38nm。本专利技术中，地塞米松纳米脂质体对地塞米松磷酸钠的包封率为92. 23 士 3. 34%。本专利技术中，地塞米松纳米脂质体稳定性考察结果显示脂质体混悬液于4°C放置4 周后，脂质体对地塞米松磷酸钠的包封率无显著性变化(P > 0.05)，样品放置稳定(如表1 所示)。本专利技术的肺靶向性的地塞米松免疫纳米脂质体能通过药物的靶向输送，减少用药剂量，提高对肺部疾病的疗效，同时又减少全身不良反应，具有新的临床实用价值。本专利技术提供了肺靶向性的地塞米松免疫纳米脂质体的制备方法，其特征在于，其包括步骤1、制备地塞米松纳米脂质体(NLP )采用薄膜分散法制备地塞米松纳米脂质体。称取磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂或二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-PEG2000 )(磷脂与胆固醇的摩尔比为1.5 4:1 ； DSPE-PEG2000占脂质摩尔量的4% 15% )，以三氯甲烷(或三氯甲烷/甲醇)溶解，置于圆底烧瓶水浴(温度应高于磷脂的相变温度)，80 120r ^irT1 减压旋转蒸发除去有机溶剂，烧瓶壁上形成一层均勻透明薄膜。37 真空干燥过夜。称取处方量地塞米松磷酸钠(或氢化可的松、泼尼松龙、甲泼尼龙等)，DXM与磷脂的比值为Img DXM: 1 20 μ mol磷脂。以与有机溶剂等容积的生理盐水溶解，置于成膜圆底烧瓶中，水浴，80 120r .min-1旋转池水化干燥脂质膜。将制备的悬液室温静置池。使用脂质体挤出器将悬液依次经400nm、200nm、100nm聚碳酸脂膜挤出，经每个层级滤膜往返10 15次挤出，即得地塞米松纳米脂质体悬液；取脂质体悬液，置于截留分子量为IOKD的超滤管中， 5000 IOOOOr · mirT1离心30min以上，去除未包封的游离地塞米松磷酸钠。2、地塞米松纳米脂质体的表征地塞米松纳米脂质体形态呈球形，大小基本均一(如图1所示)； 地塞米松纳米脂质体平均粒径为1 士 38nm;地塞米松纳米脂质体包封率地塞米松纳米脂质体对地塞米松磷酸钠的包封率为 92. 23 士 3. 34% ；地塞米松纳米脂质体稳定性考察结果显示，脂质体混悬液于4 放置4周后，脂质体对地塞米松磷酸钠的包封率无显著性变化(/7 > 0.05)，样品放置稳定(如表1所示)。表1 地塞米松纳米脂质体稳定性试验放置时间/周包封率(%)092. 23 ±3. 34189. 35 ± 4. 93287.19 ± 5. 24485. 58 ± 4. 233、制备肺表面活性蛋白A多抗偶联地塞米松免疫纳米脂质体(SPA -NLP) 选用N-琥珀酰亚胺-吡啶基-联巯基-丙酸酯(S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李惠萍，陈学远，
申请(专利权)人：同济大学附属上海市肺科医院，
类型：发明
国别省市：