通过抑制肿瘤抑制基因的天然反义转录物治疗肿瘤抑制基因相关性疾病制造技术

本发明专利技术涉及特别通过靶中肿瘤抑制基因的天然反义多核苷酸从而调节肿瘤抑制基因的表达和／或功能的反义寡核苷酸。本发明专利技术还涉及鉴定这些反义寡核苷酸以及它们在治疗与肿瘤抑制基因的表达相关的疾病和障碍中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过抑制肿瘤抑制基因的天然反义转录物治疗肿瘤抑制基因相关性疾病交叉引用本申请要求2008年12月4日申请的美国临时申请号61/119,973、2009年3月4日申请的美国临时申请号61/157,249、2009年4月3日申请的美国临时申请号61/166,381和2009年2月23日申请的美国临时申请号61/154,594的权益，这些申请通过引用其全部内容结合到本申请。专利
本专利技术的实施方案包括调节肿瘤抑制基因的表达和/或功能的寡核苷酸和相关分子。专利技术背景DNA-RNA和RNA-RNA杂交对核酸功能的许多方面起重要作用，包括DNA复制、转录和翻译。杂交对于检测具体核酸或改变核酸表达的各种技术也很重要。反义核苷酸，例如，通过杂交至靶RNA而破坏基因表达，从而干扰RNA剪接、转录、翻译和复制。反义DNA还具有DNA-RNA杂交体作为核糖核酸酶H消化底物的特征，这种活性存在于大多数的细胞类型中。反义分子可以被运送进入细胞(例如寡脱氧核苷酸(ODNs))，或者他们可由内源基因表达为RNA分子。FDA最近批准了一种反义药物―VITRAVENETM(用于治疗巨细胞病毒视网膜炎)，说明反义分子有治疗实用性。专利技术概述该概述部分概括介绍本专利技术，简要说明本专利技术的性质及实质。应理解的是概述部分不能用来解释或限制权利要求的范围或含义。在一个实施方案中，本专利技术提供通过使用反义寡核苷酸靶向天然反义转录物的任何区域从而抑制天然反义转录物的作用，导致相应的有义基因上调的方法。本文还考虑到抑制天然反义转录物可以通过siRNA、核酶和小分子来实现，这些也被认为属于本专利技术的范围内。一个实施方案提供体内或体外调节患者细胞或组织里肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达的方法，其包括使所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与一种多核苷酸的反向互补序列具有至少50％的序列同一性，所述多核苷酸包含以下核苷酸序列内的5-30个连续核苷酸：SEQIDNO:4的核苷酸1-1675、或者SEQIDNO:5的核苷酸1-518、或者SEQIDNO:6的核苷酸1-759、或者SEQIDNO:6a的核苷酸1-25892、或者SEQIDNO:6b的核苷酸1-279、或者SEQIDNO:7的核苷酸1-1982、或者SEQIDNO:8的核苷酸1-789或者SEQIDNO:9的核苷酸1-467(图5)，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达。在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸靶向肿瘤抑制基因多核苷酸的天然反义序列，例如SEQIDNO:4、5、6、6a、6b、7、8或9的核苷酸以及它们的任何变体、等位基因、同系物、突变体、衍生物、片段和互补序列。反义寡核苷酸的实例为SEQIDNO:10-30(图6-9)。另一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括：使所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与肿瘤抑制基因多核苷酸的反义序列的反向互补序列具有至少50％的序列同一性，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达。另一个实施方案提供了在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括：使所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与肿瘤抑制基因反义多核苷酸的反义寡核苷酸具有至少50％的序列同一性，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达。在优选的实施方案中，组合物包含一种或多种结合至有义和/或反义肿瘤抑制基因多核苷酸的反义寡核苷酸。在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸包含一种或多种修饰的或置换的核苷酸。在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸包含一种或多种修饰的键。在再一个实施方案中，修饰的核苷酸包含修饰的碱基，其包含硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、肽核酸、2’-O-甲基、氟代或碳、亚甲基或其它锁定核酸(LNA)分子。优选修饰的核苷酸是锁定核酸分子，包括α-L-LNA。在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸通过皮下、肌内、静脉或腹膜内给予患者。在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸以药学组合物给药。治疗方案包括给予患者至少一次反义化合物；但是，可修改该治疗方案以包括在一段时间内多次给药。该治疗可以结合一种或多种其它类型的疗法。在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸包裹于脂质体中或结合于载体分子(例如胆固醇、TAT肽)。一个实施方案提供一种体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括：使所述细胞或组织与至少一种5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述至少一种寡核苷酸与肿瘤抑制基因多核苷酸的天然反义序列的反向互补序列具有至少50％的序列同一性，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达。一个实施方案提供一种体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括：使所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与肿瘤抑制基因多核苷酸的反义寡核苷酸具有至少50％的序列同一性，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达。另一个实施方案提供了体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括使所述细胞或组织与至少一种靶向肿瘤抑制基因多核苷酸的天然反义序列的区域的反义寡核苷酸接触；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达。在一个实施方案中，相对于对照，在体内或体外增加肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达。在另一个实施方案中，至少一种反义寡核苷酸靶向肿瘤抑制基因多核苷酸的天然反义序列。在一个实施方案中，至少一种反义寡核苷酸靶向包含肿瘤抑制基因多核苷酸的编码和/或非编码核酸序列的核酸序列。在一个实施方案中，至少一种反义寡核苷酸靶向肿瘤抑制基因多核苷酸的重叠和/或非重叠序列。在一个具体的实施方案中，至少一种反义寡核苷酸包含的一种或多种修饰选自：至少一种修饰的糖部分、至少一种修饰的核苷间键合、至少一种修饰的核苷酸和它们的组合。在一个相关的实施方案中，一种或多种修饰包含的至少一种修饰的糖部分选自：2’-O-甲氧乙基修饰的糖部分、2’-甲氧基修饰的糖部分、2’-O-烷基修饰的糖部分、二环糖部分和它们的组合。在另一个实施方案中，一种或多种修饰包含的至少一种修饰的核苷间键合选自：硫代磷酸酯、2'-O-甲氧乙基(MOE)、2'-氟代、烷基膦酸酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代膦酸酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、氨基乙酸酯(acetamidate)、羧甲酯和它们的组合。在一个实施方案中，一种或多种修饰包含的至少一种修饰的核苷酸选自：肽核酸(PNA)、锁定核酸(LNA)、阿拉伯糖核酸(FANA)、类似物、衍生物和它们的组合。在另一个实施方案中，至少一种寡核苷酸包含SEQIDNO:10-30所示的至少一种寡核苷酸序列。本专利技术还提供一种体内或体外调节哺乳动物细胞或组织中的肿瘤抑制基因的功能和本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和／或表达的方法，所述方法包括：使所述细胞或组织与至少一种５－３０个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述至少一种寡核苷酸与一种多核苷酸的反向互补序列具有至少５０％的序列同一性，所述多核苷酸包含以下核苷酸序列内的５－３０个核苷酸：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４的核苷酸１－１６７５、或者ＳＥＱＩＤ　ＮＯ：５的核苷酸１－５１８、或者ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６的核苷酸１－７５９、或者ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６ａ的核苷酸１－２５８９２、或者ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６ｂ的核苷酸１－２７９、或者ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７的核苷酸１－１９８２、或者ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８的核苷酸１－７８９、或者ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９的核苷酸１－４６７（图５）；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和／或表达。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 61/119973 2008年12月4日1.一种寡核苷酸，其靶向肿瘤抑制基因的天然反义转录物，其用于预防或者治疗肿瘤抑制基因相关性疾病或者病症，其中所述寡核苷酸向上调节肿瘤抑制基因的表达；所述天然反义转录物具有任一种SEQIDNOs:4-9所示的核酸序列；并且其中所述寡核苷酸选自SEQIDNOs:10-15、19、21-22、25-27和30。2.权利要求1的寡核苷酸，其中所述疾病或者病症选自：凋亡减少或增加相关性疾病；组织/细胞老化；癌症，包括表1所列的癌症；自身免疫性疾病；包括AIDS在内的免疫缺陷病；衰老；神经变性疾病或障碍，例如阿尔茨海默氏病、运动失调性毛细血管扩张症、帕金森氏病、肌萎缩性脊髓侧索硬化、亨廷顿氏病等；过度增生性疾病，例如瘢痕瘤；类风湿性关节炎；冠心病；局部缺血性细胞死亡；淋巴增生性障碍；动脉粥样硬化；骨质疏松症；骨髓增生异常综合征；毒素诱发性疾病；病毒感染；伤口愈合；考登氏病(CD)；Lhermitte-Duclos病(LDD)；Bannayan-Zonana综合征(BZS，也称为Bannayan-Riley-Ruvalcaba综合征、Ruvalcaba-Myhre-Smith综合征和Riley-Smith综合征)；移植；凋亡相关性疾病或障碍；代谢疾病或病症，例如糖尿病；肾病或障碍；心肌梗塞/心力衰竭；局部缺血；脓毒症；其中特别的造血性炎症细胞过量的炎性疾病；增殖性疾病或者其中有治疗方案范例通过增加凋亡治疗炎症性疾病的疾病或障碍；并且其中所述疾病或者...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·科拉德，
申请(专利权)人：欧科库尔纳有限责任公司，
类型：发明
国别省市：US