调节禽类性别的方法技术

本发明专利技术涉及调节禽类性别的核酸及方法。具体而言，本发明专利技术涉及ｄｓＲＮＡ分子、特别是ｓｉＲＮＡ的卵内（ｉｎ　ｏｖｏ）输送，以增加雌性鸟类的产生。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于调节禽类性别的核酸和方法。具体而言，本专利技术涉及dsRNA分子、 特别是siRNA的卵内(in ovo)输送，以增加雌性鸟类的产生。
技术介绍
从开始驯养动物时起，人们已经通过经许多世代选择种畜(seed stock)而对家畜的表型特征进行修饰。这已经导致定量生产参数如机体大小和肌肉量的改善。近来的用于修饰家禽生产性状和/或提高对病原体抗性的革新集中于转基因的方法，然而，许多消费者对经遗传修饰的生物体会有担心。鸡生产者已在探寻有效且经济的方法以确定初生(day old)小鸡的性别。许多生产者已经使用肛门辨性(vent sexing)和羽毛辨性(feather sexing)，但是发现这些方法由于在分开雄性与雌性小鸡时需要大量的时间及人工成本因而在经济学有实质性的不利之处。探针的使用(US 5，508，165)也是昂贵的方法且在经济上不实用。小鸡肛门区域的光测知(light sensing) (US 4，417，663)是确定小鸡性别的另一方式，但是其也是昂贵且耗时的，因为必须对每只小鸡进行处理和操作。已经用到可以对小鸡进行羽毛辨性的专家， 但是这些专家成本很高且羽毛辨别也很耗时。需要用于修饰禽类性别而不导致鸟类基因组转化、但却可以进行高通量处理的核酸和方法。专利技术概述本专利技术人已经鉴别了核酸分子、特别是dsRNA分子，其可用于在卵内修饰禽类的性别。因此，在一方面，本专利技术提供了包含双链区的分离的和/或外源核酸分子，其在施用于禽卵时降低至少一种RNA分子和/或蛋白的水平，其中如果卵的胚胎是雄性，则其性别在施用所述分离的和/或外源核酸分子之后被改变为雌性，并且其中所述分离的和/或外源核酸分子不包含选自如下的序列CCAGUU⑶CAAGAAGAGCA(SEQ ID NO :254)GGAUGCUCAUUCAGGACAU(SEQ ID NO :369)CCCUGUAUCCUUACUAUAA(SEQ ID NO :474)GCCACUGA⑶CUUCCUCAA(SEQ ID NO :530)CCAGCAACAUACAU⑶CAA(SEQ ID NO :605)CCUGC⑶CACACAGAUACU(SEQ ID NO :747)GGAGUA⑶UGUACAGGUUG(SEQ ID NO :3432)GACUGGCUUGACAUGUAUG(SEQ ID NO :3433)AUGGCG⑶UCUCCAUCCCU(SEQ ID NO :3434)或其中任意一个的变体。在另一方面，本专利技术提供了分离的和/或外源核酸分子，其包含SEQ ID NO 11-3431所提供的一或多个核苷酸序列或者其中任意的一个或多个的变体，其中所述分离的和/或外源核酸分子不包含选自如下的序列CCAGUU⑶CAAGAAGAGCA(SEQ ID NO :254)GGAUGCUCAUUCAGGACAU(SEQ ID NO :369)CCCUGUAUCCUUACUAUAA(SEQ ID NO :474)GCCACUGA⑶CUUCCUCAA(SEQ ID NO :530)CCAGCAACAUACAU⑶CAA(SEQ ID NO :605)CCUGC⑶CACACAGAUACU(SEQ ID NO :747)GGAGUA⑶UGUACAGGUUG(SEQ ID NO :3432)GACUGGCUUGACAUGUAUG(SEQ ID NO :3433)AUGGCG⑶UCUCCAUCCCU(SEQ ID NO :3434)或其中任意一个的变体。在优选的实施方案中，所述核酸分子是dsRNA。更优选地，所述dsRNA是siRNA或者 shRNA。在优选的实施方案中，所述核酸分子降低禽卵中DMRTl基因、ASW基因或者 r-spondin基因所编码的蛋白的水平。在上述两方面的优选实施方案中，所述核酸不包含所述RNA分子或者编码其的 cDNA的全长开放读框。在相关的实施方案中，优选所述核酸不包含SEQ ID NO :2、4或6所提供的核苷酸序列、或者SEQ ID NO :2、4或6所提供的核苷酸序列其中每个T (胸腺嘧啶) 均被U (尿嘧啶)替换。正如技术人员的读者会意识到的，因为所述核酸是双链的，因此其也将包含本文提供的相关核苷酸序列的相应反向互补体。还提供了编码本专利技术的核酸分子或者其单链的载体。这种载体可用于宿主细胞或者无细胞表达系统中，以产生可用于本专利技术方法的核酸分子。在另一方面，本专利技术提供了包含本专利技术的外源核酸分子或者其单链、和/或本专利技术载体的宿主细胞。在另一方面，本专利技术提供了包含本专利技术的核酸分子或者其单链、本专利技术的载体、和 /或本专利技术的宿主细胞的组合物。再一方面，本专利技术提供了修饰禽类性别的方法，所述方法包括向禽卵施用至少一种本专利技术的核酸分子。优选地，所述核酸被施用于所述卵的非细胞部位。更优选地，所述非细胞部位是气囊、卵黄囊、羊膜腔或者绒膜尿囊液。在另外的优选实施方案中，所述卵不是电穿孔的。优选地，所述核酸不是通过施用编码该核酸分子的载体而输送的。优选地，所施用的核酸分子是dsRNA。优选地，所述核酸分子是通过注射施用的。所述核酸可方便地在本专利技术的组合物中施用。在优选的实施方案中，所述方法将所述卵的胚胎的性别从雄性修饰为雌性。所述禽类可以是鸟纲(Aves)的任何种。实例包括但不限于鸡、鸭、火鸡、鹅、矮脚鸡(bamtam)和鹌鹑。在特别优选的实施方案中，所述禽类是鸡。再一方面，本专利技术提供了用本专利技术方法所产生的禽类。另一方面，本专利技术提供了用本专利技术方法所产生的鸡。再一方面，本专利技术提供了包含本专利技术的核酸分子或其单链、本专利技术的载体、和/或本专利技术宿主细胞的禽类卵。另一方面，本专利技术提供了试剂盒，其包含本专利技术的核酸分子或其单链、本专利技术的载体、本专利技术的宿主细胞、和/或本专利技术的组合物。显然，本专利技术一个方面的优选特征和特性可用于本专利技术的许多其它方面。在整个说明书中，词语“包含”或其变体如“含有”或“包括”应理解为是指包含所述的元件(整体或步骤)、或者元件组(整体或步骤)，但是不排除任何其它元件(整体或步骤)、或者元件组(整体或步骤)。本专利技术在后文通过如下非限制性实施例及参考附图来进行描述。附图简述附图说明图1-选择的shRNA用于EGFP-Dmrtl基因融合表达的敲低(knockdown)。每个转染条件的平均荧光强度相对于PEGFP-Dmrtl而表示。误差棒表示对一式三份进行的每个单独实验所计算的标准误差。图2-在沉默后对DMRTl基因表达的qPCR分析。序列表解读SEQIDNO ；:1-部分鸡DMRTl蛋白质序列(Genbank AF123456) SEQIDNO ；:2-编码鸡DMRTl (Genbank AF123456)的部分核苷酸序列。SEQIDNO ；:3-鸡 WPKCI(ASff)(Genbank AF148455)。SEQIDNO ；:4-编码鸡 WPKCI (ASW) (Genbank AF148455)的核苷酸序列。SEQIDNO ；:5-鸡 r-spondin(Genbank XM_417760)。SEQIDNO ；:6-编码鸡 r-spondin (Genbank XM_417760)的核酸序列。SEQIDNO ；:7-鸡TO-I启动子的核苷酉I本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种包含双链区的分离的和／或外源的核酸分子，当施用于禽类卵时其降低至少一种ＲＮＡ分子和／或蛋白的水平，其中如果所述卵的胚胎是雄性的，则在施用所述分离的和／或外源的核酸分子之后其性别被转变为雌性，并且其中所述分离的和／或外源的核酸分子不包含选自如下的序列：ＣＣＡＧＵＵＧＵＣＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５４）ＧＧＡＵＧＣＵＣＡＵＵＣＡＧＧＡＣＡＵ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３６９）ＣＣＣＵＧＵＡＵＣＣＵＵＡＣＵＡＵＡＡ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４７４）ＧＣＣＡＣＵＧＡＧＵＣＵＵＣＣＵＣＡＡ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５３０）ＣＣＡＧＣＡＡＣＡＵＡＣＡＵＧＵＣＡＡ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６０５）ＣＣＵＧＣＧＵＣＡＣＡＣＡＧＡＵＡＣＵ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７４７）ＧＧＡＧＵＡＧＵＵＧＵＡＣＡＧＧＵＵＧ（ＳＥＱ　ＩＤＮＯ：３４３２）ＧＡＣＵＧＧＣＵＵＧＡＣＡＵＧＵＡＵＧ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３４３３）ＡＵＧＧＣＧＧＵＵＣＵＣＣＡＵＣＣＣＵ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３４３４）或其中任一的变体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·J·多兰，
申请(专利权)人：联邦科学技术研究组织，
类型：发明
国别省市：AU