辅助鉴定啮书虱的特异引物对及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种辅助鉴定啮书虱的特异引物对及其应用。本发明专利技术提供的特异引物对，由序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成。应用本发明专利技术的特异引物对可以从分子水平辅助鉴定啮书虱，不受标本个体发育状态及样品完整性的影响，具有高效、便捷、准确的优点。本发明专利技术解决了长期以来困扰储粮保护和口岸检疫部门的书虱种类鉴定问题。本发明专利技术可在粮食储藏部门和检疫部门广泛应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种辅助鉴定啮书虱的特异引物对及其应用。
技术介绍
书虱(booklice)又名纸虱、米虱，隶属于啮目(Psocoptera)、书虱科 (Liposcelidiae)、书虱属(Liposcelis)，是世界储粮保护中的常见害虫。书虱属害虫个体微小(成虫体长约1mm)，活动能力强，可随储粮调运及人为携带远距离传播，极易建立种群，抗性强而防治难度大，严重危害储粮安全。随着国际贸易及储粮调运的日益频繁，储粮害虫传播扩散风险日益增大。啮书虱L. corrodens (Heymons)在国外广泛分布，而在我国尚未见发生报道，存在较大的入侵风险。书虱属(Liposcelis)包括如下种啮书虱(L. corrodens)、无色书虱(L. decolor)、小眼书虱(L. paeta)、嗜卷书虱(L. bostrychophila)、嗜虫书虱 (L. entomophila)、暗褐书風(L. brunnea)、虚伪书風(L. mendax)、三色书風(L. tricolor)、 红书虱(L. rufa)和皮氏书虱(L. pearmani)等。传统的书虱种类鉴定多以成虫形态特征为依据，由于书虱个体微小，形态鉴定对专业技术要求很高，存在耗时长且难度大的缺陷。尤其对于非成虫发育阶段的个体(如卵、 幼虫和蛹)，形态鉴定难以做到。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种辅助鉴定啮书虱的特异引物对及其应用。本专利技术提供的辅助鉴定啮书虱(L. corrodens)的特异引物对，由序列表的序列1 所示DNA(上游引物)和序列表的序列2所示DNA(下游引物)组成。所述特异引物对可用于辅助鉴定啮书虱。所述特异引物对可用于制备辅助鉴定啮书虱的试剂盒。本专利技术还保护一种辅助鉴定啮书虱的试剂盒，包括所述特异引物对。本专利技术还保护一种辅助鉴定啮书虱的方法，包括如下步骤以待测书虱的基因组 DNA (或所述基因组DNA的稀释液)为模板，用所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到PCR 扩增产物待测书虱为候选的啮书虱，如果没有得到PCR扩增产物待测书虱为候选的非啮书Ml ο所述PCR扩增产物的大小具体可为24!3bp。所述PCR扩增的反应体系具体可为Q6ul) :2XTaq PCR Master Mix l!3ul，所述上游引物(IOuM) 0. 5ul，所述下游引物(IOuM) 0. 5ul，所述基因组DNA 2ul，ddH2010ul。所述PCR扩增的反应体系具体还可为:2XTaq PCR Master Mix l!3ul，所述上游引物(IOuM) 0. 5ul，所述下游引物(IOuM) 0. 5ul，所述基因组DNA的稀释液Iul，(MH2O llul。所述PCR扩增的反应参数具体可为95°C预变性:3min ；95°C变性30sec、50°C退火40sec、72°C延伸 Imin, 32 个循环；72°C 8min。所述待测书虱可为书虱属书虱，如啮书虱(L. corrodens)、无色书虱(L. decolor)、 小眼书虱(L. paeta)、嗜卷书虱(L. bostrychophila)、嗜虫书虱(L. entomophila)、暗褐书虱(L. brunnea)、虚伪书虱(L. mendax)、三色书虱(L. tricolor)、红书虱(L. rufa)或皮氏书 S, (L. pearmani)。本专利技术还保护一种从书虱中辅助鉴别啮书虱的方法，包括如下步骤以待测书虱的基因组DNA为模板，用所述特异引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物的待测书虱为候选的啮书虱。所述PCR扩增产物的大小具体可为24!3bp。所述PCR扩增的反应体系具体可为Q6ul) :2XTaq PCR Master Mix l!3ul，所述上游引物(IOuM) 0. 5ul，所述下游引物(IOuM) 0. 5ul，所述基因组DNA 2ul，ddH2010ul。所述PCR扩增的反应体系具体还可为:2XTaq PCR Master Mix l!3ul，所述上游引物(IOuM) 0. 5ul，所述下游引物(IOuM) 0. 5ul，所述基因组DNA的稀释液Iul，(MH2O llul。所述PCR扩增的反应参数具体可为95°C预变性:3min ；95°C变性30sec、50°C退火 40sec、72°C延伸 Imin, 32 个循环；72°C 8min。所述待测书虱可为书虱属书虱，如啮书虱(L. corrodens)、无色书虱(L. decolor)、 小眼书虱(L. paeta)、嗜卷书虱(L. bostrychophila)、嗜虫书虱(L. entomophila)、暗褐书虱(L. brunnea)、虚伪书虱(L. mendax)、三色书虱(L. tricolor)、红书虱(L. rufa)或皮氏书 S, (L. pearmani)。应用本专利技术提供的特异引物对辅助鉴定啮书虱具有如下优点(1)快速、准确和高效引物对特异针对啮书虱的基因组DNA中的片段，检测灵敏度高、耗时短、且可以实现高通量检测；(2)操作简便，经济易行传统形态鉴定方法一般需要玻片标本制作技能，对样品完整性等要求高，而特异引物分子鉴定方法可标准化，操作简便且所需费用较低，便于无专业分类学知识背景的工作人员操作与运用。应用本专利技术提供的特异引物对可以从分子水平辅助鉴定啮书虱，不受标本个体发育状态及样品完整性的影响，具有高效、便捷、准确的优点。本专利技术解决了长期以来困扰储粮保护和口岸检疫部门的书虱种类鉴定问题。本专利技术设计了用于鉴别啮书虱的特异引物对，并提供了一套鉴别啮书虱的方法，显著提高了啮书虱鉴定的效率和准确性，具有省时、 高效、直观等特点。该专利技术可在粮食储藏部门和检疫部门广泛应用。附图说明图1为本专利技术的特异引物对书虱属各种书虱进行PCR鉴定的凝胶电泳图谱。图2为应用本专利技术的特异引物对检测啮书虱的灵敏度的凝胶电泳图谱。具体实施方式 以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例中采用如下样本样本1 采集自丹麦的啮书虱(L. corrodens)；样本2 采集自捷克的啮书虱(L. corrodens)；样本3 采集自美国的啮书虱(L. corrodens)；样本4 采集自葡萄牙的啮书虱(L. corrodens)；样本5 采集自中国的无色书虱(L. decolor)；样本6 采集自捷克的无色书虱(L. decolor)；样本7 采集自美国的无色书虱(L. decolor)；样本8 采集自中国的小眼书虱(L. paeta)；样本9 采集自捷克的小眼书虱(L. paeta)；样本10 采集自美国的小眼书虱(L. paeta)；样本11 采集自中国的嗜卷书虱(L. bostrychophila)；样本12 采集自捷克的嗜卷书虱(L. bostrychophila)；样本13 采集自美国的嗜卷书虱(L. bostrychophila)；样本14 采集自中国的嗜虫书虱(L. entomophila)；样本15 采集自捷克的本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．辅助鉴定啮书虱的特异引物对，由序列表的序列１所示ＤＮＡ和序列表的序列２所示ＤＮＡ组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李志红，杨倩倩，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：11