本发明专利技术提供了一种启动效率高、序列较短启动子，即PMagpd启动子。由SEQIDNO:1所示核苷酸序列或对SEQIDNO:1所示核苷酸序列进行一个或多个核苷酸的取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQIDNO:1相同的作为启动子能力的核苷酸序列组成。该启动子启动效率高，启动基因范围广，可启动任何基因的在真菌内的组成型表达。且该启动子片段小，利于构建。适于实验室和工业应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种启动子，包括含有此启动子的结构和载体，并涉及此启动子的制备方法。
技术介绍
昆虫病原丝状真菌可通过侵染昆虫使其致死，因此，已作为防治昆虫的有效的生物农药。但野生昆虫病原真菌毒力低，致死昆虫时间长。通过基因工程的手段，超表达某些外源或内源毒力基因，可以大大提高病原真菌毒力。但目前昆虫病原真菌中常用的启动基因表达的启动子大都是来自其他动植物病原真菌，目前应用最广泛的是构巢曲霉三磷酸甘油醛脱氢酶基因启动子(PgpdA)，是多种真菌中外源及内源基因的组成性表达首选的启动子，如人类病原真菌，植物病原真菌及昆虫病原真菌。但是PgpdA的启动效率表现不尽人意。而且，PgpdA长2. 21Λ，片段较大，不利于基因工程中载体构建。寻找真菌内源的高效率的组成型启动子，一方面可为昆虫病原真菌基因工程研究提供工具，同时也为利用该启动子构建具有高效杀虫活性的昆虫病原真菌奠定基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种启动效率高，易构建的启动子，即PMagpd启动子。本专利技术的另一目的在于提供含有上述启动子的表达载体。本专利技术的再一目的在于提供含有上述启动子的转化载体。本专利技术的再一目的在于提供含有上述启动子的宿主或宿主细胞。本专利技术的目的是通过如下措施实现的一种启动子，为SEQ ID NO 1所示核苷酸序列或为对SEQ ID NO=I所示核苷酸序列进行一个或多个核苷酸的取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ IDNO 1相同的作为启动子能力的核苷酸序列。一种启动子，为能在高度严格条件下与SEQ ID NO 1所示核苷酸序列杂交的核苷酸序列，或为能在高度严格条件下与对SEQ ID NO :1所示核苷酸序列进行一个或多个核酸的取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO :1相同的作为启动子能力的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。上述启动子，包括表1所述的DNA序列，在所述启动子的位置如表1所述。表1中所示DNA序列是PMagpd启动子中的一些保守序列和反向或正向重复序列，这些序列一般来说是不可取代或缺失，它们的组合发挥着启动效力。表权利要求1.一种启动子，其特征在于为SEQ ID NO :1所示核苷酸序列或为SEQ ID N0:1所示核苷酸序列进行一个或多个核苷酸的取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID N0:1相同的作为启动子能力的核苷酸序列。2.一种启动子，其特征在于为能在高度严格条件下与SEQ ID NO :1所示核苷酸序列杂交的核苷酸序列，或为能在高度严格条件下与对SEQ ID NO :1所示核苷酸序列进行一个或多个核酸的取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO :1相同的作为启动子能力的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。3.根据权利要求1或2所述启动子，其特征在于所述启动子来源于蝗绿僵菌的Magpd 基因上游序列。4.含权利要求1、2或3所述启动子的表达载体。5.一种转化载体，含有权利要求1、2或3所述的启动子。6.一种转化过的宿主或宿主细胞，含有权利要求1或2所述的启动子、或权利要求4所述的表达载体、或权利要求5所述的转化载体。7.如权利要求6所述的转化过的宿主或宿主细胞，所述宿主或宿主细胞是真菌或真菌细胞。8.如权利要求6所述的转化过的宿主或宿主细胞，所述宿主或宿主细胞是昆虫病原丝状真菌。9.如权利要求6所述的转化过的宿主或宿主细胞，所述宿主或宿主细胞是蝗绿僵菌。10.根据权利要求1-3任一项所述启动子的制备方法，包括如下步骤(1)培养蝗绿僵菌(Metarzhiziumacridum)菌株 CQMal02。(2)从菌株中提取基因组DNA。(3)用序列如SEQID NO. 2和SEQ ID NO. 3的引物从基因组DNA中扩增所述启动子序列。11.根据权利要求10所述启动子的制备方法，包括如下步骤(1)将蝗绿僵菌(Metarzhiziumacridum)菌株，在1/4SDAY液体培养基(葡萄糖IOg/ L，蛋白胨2. 5g/L，酵母浸膏5. Og/L, pH值调至6. 0)，28°C 250rpm振荡培养3天(2)用真菌基因DNA提取试剂盒提取基因组DNA。(3)根据蝗绿僵菌基因组序列(Genbank登录号ANDI00000000)，获取了Magpd基因组序歹Ij (Genbank登录号EFY84384. 1)，用引物MgpdF和MgpdR引物，其序列见SEQ ID NO. 2禾口 SEQ ID NO. 3所示，扩增Magpd基因上游的所述启动子序列。12.上述权利要求5所述的转化载体或权利要求6-9任一项所述宿主或宿主细胞的构建方法，包括以下步骤(1)将PMagpd启动子与目的基因可操作地连接；(2)构建含有PMagpd启动子与目的基因的表达载体；(3)将所述表达载体转化宿主，制得转化载体。全文摘要本专利技术提供了一种启动效率高、序列较短启动子，即PMagpd启动子。由SEQIDNO:1所示核苷酸序列或对SEQIDNO:1所示核苷酸序列进行一个或多个核苷酸的取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQIDNO:1相同的作为启动子能力的核苷酸序列组成。该启动子启动效率高，启动基因范围广，可启动任何基因的在真菌内的组成型表达。且该启动子片段小，利于构建。适于实验室和工业应用。文档编号C12N15/80GK102373207SQ20111035155公开日2012年3月14日 申请日期2011年11月9日 优先权日2011年11月9日专利技术者夏玉先, 曹月青, 焦润 申请人:重庆大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种启动子，其特征在于：为ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示核苷酸序列或为ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示核苷酸序列进行一个或多个核苷酸的取代、缺失或添加所获得的，具有与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１相同的作为启动子能力的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：曹月青，焦润，夏玉先，
申请(专利权)人：重庆大学，
类型：发明
国别省市：85
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