本发明专利技术涉及丝氨酸蛋白酶酶原的嵌合衍生物，其含有用于提高所述衍生物的半衰期的因子Ｘ的激活肽或其片段。优选地，所述嵌合衍生物是蛋白Ｃ和因子Ｘ衍生物。本发明专利技术也涉及用于预防或治疗凝血功能障碍的所述衍生物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及因子X的激活肽及其在提高丝氨酸蛋白酶衍生物(特别是蛋白C、因子 IX和因子X衍生物)的半衰期和回收率中的用途，以及这些衍生物在蛋白C、因子IX和因子X相关病症(特别是凝血功能障碍)的预防或治疗中的用途。
技术介绍
凝血是在响应血管损伤而发生的主要和复杂的过程。它包括形成凝块以停止出血和开始修复受损血管其壁由含有血小板和血纤维蛋白的凝块覆盖。该过程几乎在损伤后立即开始。凝血过程包括两种类型的组分称为血小板的细胞组分和称为凝血因子的蛋白组分。血小板立即在损伤部位形成栓塞；这称为初级止血。同时发生次级止血称为凝血因子或凝固因子的血浆蛋白作出复杂级联响应，以形成强化血小板栓塞的血纤维蛋白丝。次级止血的凝血级联被分成两种途径，称为内源性途径或接触激活途径，和外源性途径，也称为组织因子途径。许多凝血因子以及辅因子和调节因子参与其中以恰当地维持该过程。例如，蛋白C是用于调节凝血的主要机制(称为“抗凝血剂途径”)的关键因子。 蛋白C的活性形式(激活的蛋白C)是丝氨酸蛋白酶，其在与另一种辅因子(蛋白幻结合时降解对凝血酶的大量产生必要的凝血级联的两种因子因子Va和Villa。这些因子的破坏负向调节所形成的凝血酶的量，导致抗凝血效应。特别是已知这种蛋白具有多效生物活性不仅具有抗血栓形成活性(Taylor等人，1987 ；Gruber等人，1990 ；Chesebro等人， 1992 ；Hanson 等人，1993 ；Arnl jots 等人，1994 ；Sakamoto 等人，1994，Jang 等人，1995，Kurz 等人，1997 ；Gresele 等人，1998 ；Mizutani 等人，2000 ；Bernard 等人，2001)，还具有抗炎活性(EmSOn，2000)、抗细胞凋亡活性(Joyce等人，2001)和促溶血纤活性(Comp等人，1981 ； Rezaie,2001)。因子IX(以下称为FIX)是凝血的一个关键丝氨酸蛋白酶。这种蛋白的缺失引起出血病症，称为B型血友病。在凝血期间，激活的FIX(FIXa)与其激活辅因子，因子VIIIa(以下称为FVIIIa)，结合，将其特定底物因子X(FX，以下称为FX)转换为其激活的衍生物，激活的因子X(以下称为FXa)。因子X是凝血级联的另一个关键因子。FX的激活形式(FXa)是能够在与其辅因子 (凝血因子Va)结合时将凝血酶原活化成凝血酶的唯一的丝氨酸蛋白酶。此外，长期被认为是被动旁观者的因子X目前表现为经由其两种主要受体(蛋白酶激活受体-I(PAR-I)和 PAR-2)的激活作用于各种各样细胞类型的直接参与者。最近的发现提示，PAR-2在纤维-增殖性疾病(例如纤维化、组织重建和癌症)中起着重要作用，并指因子X为协调凝血和疾病进展之间的分界的重要介质(Borensztajn等人，2008)。蛋白C、因子IX和因子X分别是肝脏中合成的62kDa、55kDa和59kDa的糖蛋白。在其分泌进入血浆前，其多肽链经过几次翻译后熟化以变成功能性酶原。两种酶原蛋白C和因子X由肽链裂解得到的氨基端轻链和羧基端重链组成，其中轻链和重链由二硫桥连接。酶原因子IX是单链糖蛋白。如同大多数丝氨酸蛋白酶前体一样，蛋白C、因子IX和因子X是缺乏催化活性的酶原。其激活是其重链中蛋白酶促裂解的结果。在蛋白C中，这种裂解发生在重链的N末端， 从而释放12个氨基酸的“激活”肽。在因子X中，这种裂解发生在酶原的Arg 193和Ile 194残基之间，从而也释放52个氨基酸的“激活”肽。在因子IX中，发生两个裂解，也从前体分子的内部区域释放分子量近似等于IlkDa的激活肽。血液凝因必须很好地控制以避免出血或凝血的任何危险。因此，凝血过程的失调导致严重的病症，例如出血(增加的出血危险)和血栓症(增加的凝血危险)。因增加的凝血危险导致的病理包括严重的病症，例如静脉或动脉血栓形成，特别是影响大口径血管的血栓形成、心肌梗死、血栓形成性疾病、肺栓塞、血管成形术或溶栓治疗后的冠状动脉再梗塞，以及患有影响蛋白C基因或凝血调节蛋白基因的遗传异常的患者的凝血异常。给予病人抗凝血剂以终止血栓形成(凝血不适当地存在于血管中)。这用于易感者中深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗死和中风的初级和次级预防。出血是在血栓栓塞(thromoboembolic) 并发症的预防和治疗中口服使用抗凝剂的最严重的并发症。用华法令或肝素抗凝血的个体如果出血或需要手术时通常分别用特定的解毒药例如维生素K或鱼精蛋白治疗。不幸的是，华法令、肝素、维生素K和鱼精蛋白的治疗活性伴随不良的副作用，这使其使用复杂化。 相反，还没有用于逆转低分子量肝素(LMWH)或靶向因子fe(fXa)的新型口服抗凝血剂的抗凝血效应的特异性的和有效的解毒剂(参考综述，Harenberg, 2008, Bauer, 2008, Khoo等人，2009)。当使用这些新的抗凝疗法时，可能观察到大出血。因此，及时采取适当的机械的和系统的行动以控制出血是必要的。这包括停止抗凝血治疗以及，如有可能，使用可得到的特定逆转剂逆转抗凝血效应。目前需要针对这些抗凝血剂的特异性解毒药。另一方面，出血型的病理学特别地包括A或B型血友病(分别缺乏因子VIII和 IX)。这些严重疾病常常由于用于治疗的中和抗因子VIII或IX的同种抗体的“抑制剂”的存在而复杂化。目前有着改善这些病症的治疗的需要。第一种治疗策略是绕过凝血级联和调节的缺陷步骤。用于改善目前治疗的另一种策略是改善所使用化合物(主要是在血浆中易被中和的蛋白质)的半衰期。用于改善治疗的另一种途径是重建自动放大系统或逆控制。用于高凝性病症(例如蛋白C缺失)的治疗是蛋白C、激活的蛋白C、蛋白C衍生物……。目前用于血友病的治疗是对于A和B型血友病分别施用因子VIII或IX。这些治疗是昂贵的，特别是因为由于化合物的短半衰期而需要反复注射，而且这些治疗具有局限性，如抑制剂或中和抗通常用于治疗A和B型血友病的因子VIII或IX的同种抗体的的开发。此外，已观察到施用重组蛋白质(特别是因子IX)来治疗B型血友病， 由于较之施用血浆来源的产物具有更低的回收率而受到阻碍。已经提出潜在方法作为新的治疗策略。特别是，WO 03035861专利申请描述了蛋白C和因子X的凝血酶可酶解的嵌合衍生物。然而，这些化合物的短的半衰期限制了其在凝血功能障碍中的使用。本专利技术提出一种新的方法解决该技术问题。专利技术简述本专利技术涉及多肽PP，其包含SEQ ID NO 2的33到52位的氨基酸序列(因子X的激活肽)，其中39或49位的天冬酰胺是N-糖基化的。本专利技术也涉及所述多肽用于提高循环蛋白例如丝氨酸蛋白酶酶原，如因子IX、因子X、蛋白C，的半衰期和回收率的用途。本专利技术也涉及融合蛋白FP，其含有-第一多肽PP和-第二多肽，其包含SEQID NO 4的7到16位的氨基酸序列。本专利技术涉及因子X或蛋白C的嵌合的凝血酶可裂解衍生物，其中所述蛋白质的天然激活肽被融合蛋白FP取代。本专利技术涉及因子X或蛋白C的凝血酶可裂解衍生物，其中所述蛋白质的天然激活肽被融合蛋白FP取代。本专利技术还涉及因子X或蛋白C的嵌合的凝血酶可裂解衍生物，其含有激活因子X 或蛋白C或其功能保守的变体和融合蛋白FP。本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种多肽，其包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２的３３到５２位的氨基酸序列，其中在３９位或４９位的天冬酰胺是Ｎ－糖基化的。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：奥利弗·克里斯托夫，
申请(专利权)人：国家健康与医学研究院，
类型：发明
国别省市：FR
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