用于治疗和预防晶状体纤维化疾病的组合物和方法技术

本发明专利技术提供了用于治疗纤维化疾病的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及晶状体纤维化疾病领域，具体地说，本专利技术公开了用于抑制、治疗和/ 或预防纤维化、特别是晶状体纤维化疾病的组合物和方法。
技术介绍
为了描述本专利技术所属
的现有状态，在本说明书中引述了一些公开出版物和专利文件。这些引用文献中的每一篇都通过引用结合到本文中，如同全文公开的一样。成肌纤维细胞很可能是导致视力减退的晶状体纤维化疾病(例如后囊混浊(PCO) 和前囊下白内障(ASC))的病因。PCO是白内障手术的一种常见并发症。ASC和PCO中成肌纤维细胞的起源尚不清楚。目前，还没有可以用来有效地阻断晶状体纤维化疾病(例如 PC0)发展的方法。专利技术概述根据本专利技术，提供抑制纤维化疾病、特别是晶状体纤维化疾病的方法。在一个具体的实施方案中，这些方法包括给予需要这种治疗的患者的晶状体治疗有效量的组合物，该组合物包含与至少一种细胞毒性分子缀合的至少一种骨骼肌干细胞靶向分子和至少一种药学上可接受的载体。在另一个实施方案中，该晶状体纤维化疾病是后囊混浊或前囊下白内障。在又一个实施方案中，本专利技术的组合物是直接给予到晶状体或周围组织。根据本专利技术的另一方面，提供用于治疗晶状体纤维化疾病的组合物。在一个具体的实施方案中，这些组合物包含与至少一种细胞毒性分子缀合的至少一种骨骼肌干细胞靶向分子和至少一种药学上可接受的载体。附图简述图IA和图IB提供在鸡晶状体囊袋上的模拟白内障手术以诱导后囊混浊之后，分别在第0天和第2天晶状体中骨骼肌干细胞的影像图。图2A是来自在单独的补体或补体加上G8抗体中培养(1天)的后囊混浊诱导的晶状体的α-平滑肌肌动蛋白和β-肌动蛋白的蛋白质印迹图。图2Β是图2Α中蛋白质印迹的信号强度比的图。图3是G8和MyoD mRNA标记的小鼠晶状体细胞的影像图。图4提供位于晶状体上皮里面小境(niches)中的G8pos细胞亚群的影像图。在制备上皮外植体之前将晶状体固定在E15，保留了原位定位G8pos细胞。外植体用抗G8抗原的mAb (用罗丹明缀合的第二抗体标记过)标记，再对F-肌动蛋白(Alexa Fluor-488鬼笔毒环肽)和核(T0-PR0 -3，蓝色)共染色。在以χ-y面(x_y tile)数字地获取的单一光学平面中共焦成像(图4A)显示在图4B中，在较高的放大倍数下定位到晶状体上皮细胞之中归巢的小境的G8pos细胞(箭头)，尺寸条20 μ m。图4A中的插入图显示在培养物中在 TO时固定的外植体中，晶状体上皮相关的G8pos细胞也表达MyoD mRNA,能用与MyoD反义寡核苷酸序列缀合的用Cy3标记的DNA树状聚体(dendrimer)进行检测；细胞核用Hoechst 染料复染。为了进一步定位G8pos细胞小境，通过扫描共焦成像，创建了从顶部到基底获取的连续1微米光切面Z-垛叠(Z-stack)的正交切割(顶图，图4B)。在代表性光切面中沿着水平线制作正交切割(底图，图4B)。G8pos小境与晶状体上皮细胞的顶表面缔合(箭头， 图 4B)。图5显示在对上皮损伤应答时扩大并迁移到创伤边缘的G8pos前体细胞。进行模拟白内障手术以制备离体(ex vivo)受创伤上皮外植体，见图5A中的模型。从晶状体囊 (一种基底膜，BM)中去除纤维细胞团块，在晶状体上皮(LE)中产生了受创伤前沿，在此处它已毗连纤维细胞。在前囊中制造的切口使外植体变扁平，产生了受创伤切口边缘。在图 5B-5F中，通过用G8 mAb免疫标记，测定培养1小时时G8pos细胞对损伤的初始应答。用 Alexa Fluor 488-鬼笔毒环肽对F-肌动蛋白的染色勾画出晶状体上皮细胞的轮廓。通过模拟白内障手术造成的损伤诱导了 G8pos细胞群的出现和扩大(图5B，图5C)及其向创伤边缘即前沿(图5D-5E)和切口边缘(图5F)两者的迁移。在水平线(图5E，下图)的位置通过共焦Z-垛叠的正交切割(图5E，上图)显示沿着晶状体上皮细胞顶表面迁移到前沿的 GSpos细胞(箭头)。图5G-5I显示G8pos细胞的间充质表型通过G8和波形蛋白的双重标记予以证明，见图51中的叠加图。尺寸条20 μ m。图6提供示踪研究，显示对晶状体上皮损伤应答中的G8pos细胞是创伤时存在的 G8pos细胞的子代。晶状体上皮离体外植体中的G8pos细胞在TO时用G8 mAb和罗丹明缀合的第二抗体标记。将具有标记的G8细胞的外植体孵育并在损伤后追踪G8细胞M小时(图 6A-6F)或72小时(图6G-6I)，此时将其固定并再次用G8 mAb标记，这次用Alexa-Fluor 488缀合的第二抗体标记。图6A-6C和图6G-6I是扩大后的小境，图6D-6F是位于前沿的细胞。用带Alexa-Fluor 488标签的G8标记的所有细胞(图6B，图6E，图6H)也用示踪的带罗丹明标签的G8标记(图6A，图6D，图6G)，如在叠加图(图6C，图6F，图61)中所看见的一样。这些结果证明了参与晶状体上皮愈合的G8pos细胞来源于在损伤时就存在的G8pos 前体细胞并且不包括后来募集至G8谱系的细胞。尺寸条20 μ m。图7显示G8pos细胞是成肌纤维细胞前体。培养6天的受创伤晶状体上皮(图 7A-7C)对G8抗原(图7A)和α -SMA(图7Β)进行双重标记，见图7C的叠加图。在G8pos 细胞的集落内存在有从G8pos细胞到成肌纤维细胞的进程(progression)几乎不表达到不表达α -SMA的G8pos细胞(白色箭头)，表达α -SMA但尚未组构成应激纤维的G8pos细胞(箭头)，含有应激纤维的带α -SMA的G8pos细胞(空心箭头)，和丢失了 G8抗原的成肌纤维细胞(虚箭头)。在上述的同一进程中，让外植体也在允许G8pos细胞迁移到坚硬培养皿上的条件下生长，这促进了 G8细胞在3天之内向成肌纤维细胞的分化(图7D-7F)。 尺寸条20 μ m。图7G、图7H显示G8pos细胞在培养第1天在上皮外植体中被清除，即通过用G8 mAb标记它们并用补体C溶解它们。图7G提供在G8+C(与C相比)中的溶解细胞的锥虫蓝摄取标记区域(闭环区域)，这被在消除后第1天的细胞损失所证实。图7H显示在培养第1天、再培养5天和对α -SMA和β -肌动蛋白免疫转印的暴露于G8+C、单独的G8、 单独的C或未处理(U)的上皮外植体。G8细胞的消除阻断了 α-SMA的表达。图8Α是在石蜡中包埋、切片和用苏木精和伊红染色的成年小鼠眼的影像图。图8Β 和图8C中的箭头表示在荧光显微照片中在较高的放大倍数下显示的区域。在图8Β和图8C中，用G8抗体标记的细胞用箭头显示。细胞核也被染色。图9A-9D是分别针对G8抗原、α平滑肌肌动蛋白(SMA)、肌球蛋白和MyoD蛋白的存在染色的横纹肌肉瘤细胞的影像图。专利技术详述据推测晶状体由单一细胞类型——上皮细胞组成。因此，可以假设在晶状体中的成肌纤维细胞是由晶状体上皮细胞经历上皮-间充质转换过程发育而来。这种转分化可以通过α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达来鉴定。本文提供一种针对晶状体纤维化疾病的模型，该模型中，培养的鸡胚晶状体重演了囊混浊后晶状体纤维化病变的主要特征，即增殖、跨后囊迁移和间充质标记的表达。这个模型用来鉴定负责引起纤维化的细胞。具体地本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种抑制晶状体纤维化疾病的方法，所述方法包括给予有需要的患者的晶状体治疗有效量的至少一种骨骼肌干细胞靶向分子和至少一种细胞毒性分子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·S·门科，
申请(专利权)人：兰肯瑙医学研究所，
类型：发明
国别省市：US