本发明专利技术提供了选自下面［１］到［４］的蛋白：［１］具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所显示的氨基酸序列的蛋白；［２］具有在ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所显示的氨基酸序列中缺失、取代或添加至少一个氨基酸残基所产生的氨基酸序列、并具有果糖基肽氧化酶活性的蛋白；［３］具有与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所显示的氨基酸序列具有８０％以上同源性的氨基酸序列、并具有果糖基肽氧化酶活性的蛋白；以及［４］通过使用大肠埃希氏杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＸＬ１－Ｂｌｕｅ ＭＲＦ’菌株（在保藏号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１０２６下保藏）所携带的表达质粒产生的具有果糖基肽氧化酶活性的蛋白。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有果糖基肽氧化酶活性的新蛋白、编码所述蛋白的DNA、用于生产所述蛋白的方法、使用所述蛋白测量糖化蛋白的方法以及包含所述蛋白的用于测量糖化蛋白的试剂。
技术介绍
糖化蛋白包含在生物样品例如体液和毛发中，体液包括血液等。血液中存在的糖化蛋白的浓度取决于溶解在血清中的糖、例如葡萄糖的浓度，并且最近，在临床诊断领域中，测量血液中的糖化蛋白——血红蛋白Alc的浓度(非专利文献1)，被用于诊断和监测糖尿病。作为测量这种血红蛋白Alc的方法，已经知道的有使用高效液相色谱(HPLC)的仪器分析方法(非专利文献幻、使用抗原-抗体反应的免疫分析法(例如非专利文献幻等，但是在近年中，已经开发了酶分析法，例如，已经开发了使用蛋白酶和果糖基肽氧化酶的方法 (专利文献1)。酶分析法能够适用于通用自动化分析仪，并且因为操作也简单，它们的开发越来越多。在酶分析法中使用的果糖基肽氧化酶，是一种催化在分子氧的存在下通过氧化切开酮糖衍生物中的C-N键而产生邻酮醛糖(α-酮基醛)、肽和过氧化氢的反应的酶，所述酮糖衍生物由葡萄糖的半缩醛与肽的N-端氨基之间的反应产生的葡萄糖胺的Amadori重排所产生。在如附图说明图1中所示的酶分析法的情形中，一种方法是已知的，其中首先用蛋白酶降解血红蛋白Alc，并从血红蛋白的β-链的N-端产生α-果糖基缬氨酰组氨酸(在后文中称为α-FVH)；接下来，使果糖基肽氧化酶作用于所产生的α-FVH，将产生的过氧化氢在过氧化物酶存在下应用于氧化缩合以产生醌色素，并且使用分光光度计通过比色法测定产生的量(专利文献1)。然而，作为蛋白酶处理的副产物，形成了 ε -果糖基赖氨酸和含有它的糖化肽，并且已经指出，当果糖基肽氧化酶作用于它们时，存在着血红蛋白Alc的测量值可能高于真实值的风险(专利文献2)。已经从细菌、真菌和植物发现果糖基肽氧化酶。例如源自于Achaetomiella 属、毛壳属(Chaetomium)(专利文献幻、弯孢霉属(Curvularia)(专利文献幻、蔷薇科 (Rosaceae)、葡萄科(Vitaceae)、伞形科(Apiaceae)(专利文献 4)、姜科(Zingiberaceae) (专利文献幻等的果糖基肽氧化酶是已知的。然而，到目前为止报道的果糖基肽氧化酶具有缺点，例如(1)针对α -糖化二肽(α -果糖基缬氨酰组氨酸)的活性与针对α -糖化氨基酸 (例如α-果糖基缬氨酸)的活性相比不一定高；(2)如上所述，除了 N-端α-糖化二肽之外，它也作用于其中糖连接到赖氨酸的 ε -氨基上的ε -糖化氨基酸(ε -果糖基赖氨酸)，并增加血红蛋白Alc测量中的测量值； 以及(3)在使用酶的测量方法的情形中，酶在测量或储存过程中变得不稳定。为了克服这些缺点，已经报道了由于在果糖基肽氧化酶中人工导入突变而对 ε -果糖基赖氨酸的反应性降低的酶(专利文献4)、也是由于导入突变而耐热性增加的酶 (非专利文献4)等。然而，以高水平同时克服上面提到的(1)至C3)的缺点的酶的存在，仍是未知的。非专利文献1 :Clinical Chemistry and Laboratory Medicine 第 36 卷， p. 299-308(1998).非专利文献2 :Chromatogr. Sci.，第 10 卷，p. 659 (1979).非专利文献3 日本临床检查自动化学会杂志，第18卷，第4号，p. 620(1993).非专利文献4:Appl. Microbiol. Biotechnol.，第 78卷，第5号，p. 775-781 (2008).专利文献1 特开2001-95598号公报。专利文献2 国际公布WO 2004/104203号单行本。专利文献3 特开2003-2；35585号公报.专利文献4:国际公布WO 2004/038033号单行本。专利文献5 国际公布WO 2004/038034号单行本。
技术实现思路
有鉴于上面提到的问题，完成了本专利技术。本专利技术的目的是提供对α-糖化二肽 (α-果糖基缬氨酰组氨酸)具有高特异性并具有非常稳定的果糖基肽氧化酶活性的蛋白。 此外，本专利技术的另一个目的是提供编码该蛋白的DNA、含有该DNA的重组DNA、用该重组DNA 转化的转化体、使用该转化体等生产具有果糖基肽氧化酶活性的蛋白的方法，以及使用该蛋白测量糖化蛋白的方法和包含该蛋白的用于测量糖化蛋白的试剂。本专利技术涉及下列(1)到(17)(1)下列到任一项中的蛋白包含SEQ ID NO=I所显示的氨基酸序列的蛋白；包含在SEQ ID NO :1所显示的氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸缺失、取代或添加的氨基酸序列、并具有果糖基肽氧化酶活性的蛋白；包含与SEQ ID NO 1所显示的氨基酸序列具有80%或更高同源性的氨基酸序列、并具有果糖基肽氧化酶活性的蛋白；以及由在保藏号FERM ΒΡ-11026下保藏的大肠埃希氏杆菌(Escherichia coll) XLl-Blue MRF'菌株所携带的表达质粒编码的具有果糖基肽氧化酶活性的蛋白；(2) (1)的蛋白，其包含SEQ ID NO 3所显示的氨基酸序列；(3)下列到任一项的 DNA 编码(1)的蛋白的DNA;包含SEQ ID NO 2所显示的核苷酸序列的DNA ；以及在严紧条件下与包含与SEQ ID NO 2所显示的核苷酸序列的互补核苷酸序列的DNA杂交的DNA，其中DNA编码具有果糖基肽氧化酶活性的蛋白；(4) (3)的DNA，其编码包含SEQ ID NO 3所显示的氨基酸序列的蛋白；(5) (3)的DNA，其包含SEQ ID NO 4所显示的核苷酸序列；(6) 一种重组DNA，其包含(3)到(5)任一项的DNA ；(7) 一种转化体，其包含(6)的重组DNA ；(8) 一种用于生产⑴或(2)的蛋白的方法，其中将(7)的转化体在培养基中进行培养，蛋白产生并积累在培养物中，并从培养物收集蛋白；(9) 一种用于测量样品中的糖化蛋白的方法，其中方法包含将样品与蛋白酶反应以形成糖化肽，然后将形成的糖化肽与(1)或(2)的蛋白反应，并测量由糖化肽与蛋白之间的反应所形成的物质或在糖化肽与蛋白之间的反应中所消耗的物质；(10) (9)的测量方法，其中糖化蛋白是糖化血红蛋白；(11) (10)的测量方法，其中糖化血红蛋白是血红蛋白Alc ；(12) 一种用于测量糖化蛋白的试剂，其包含蛋白酶和⑴或(2)的蛋白；(13) (12)的试剂，其还包含用于测量由⑴或(2)的蛋白与从糖化蛋白形成的糖化肽之间的反应所形成的产物的试剂；(14) (13)的试剂，其中产物是过氧化氢；(15) (12)到(14)任一项的试剂，其中糖化蛋白是糖化血红蛋白；(16) (15)的试剂，其中糖化血红蛋白是血红蛋白Alc ；以及(17)在保藏号FERM BP_11(^6下保藏的大肠埃希氏杆菌(Escherichia coll) XLl-Blue MRF，菌株。本专利技术提供了对α -糖化二肽(α _果糖基缬氨酰组氨酸)具有高特异性并具有非常稳定的果糖基肽氧化酶活性的蛋白、编码该蛋白的DNA、用于生产该蛋白的方法，以及使用该蛋白测量糖化蛋白的方法和包含该蛋白的用于测量糖化蛋白的试剂。附图简述图1显示了血红蛋白本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．下列［１］到［４］任一项中的蛋白：［１］包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所显示的氨基酸序列的蛋白；［２］包含在ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所显示的氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸缺失、取代或添加的氨基酸序列、并具有果糖基肽氧化酶活性的蛋白；［３］包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所显示的氨基酸序列具有８０％以上同源性的氨基酸序列、并具有果糖基肽氧化酶活性的蛋白；以及［４］由在保藏号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１０２６下保藏的大肠埃希氏杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＸＬ１－Ｂｌｕｅ ＭＲＦ’菌株所携带的表达质粒编码的具有果糖基肽氧化酶活性的蛋白。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：相阪和夫，
申请(专利权)人：协和梅迪克斯株式会社，
类型：发明
国别省市：JP
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