用于合成（Ａｉｂ８，３５）ｈＧＬＰ－１（７－３６）－ＮＨ２的方法技术

本发明专利技术涉及用于大规模合成（Ａｉｂ８，３５）ｈＧＬＰ－１（７－３６）－ＮＨ２（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２）（即Ｈｉｓ－Ａｉｂ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ａｉｂ－Ａｒｇ－ＮＨ２（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２））的方法，其包括固相Ｆｍｏｃ化学合成。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】,35</sup>)hGLP-1(7-36)-NH₂的方法
本专利技术涉及用于大规模合成(Aib8’35)hGLP-l(7-36)-NH2(SEQ ID NO 2)(即 His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-I Ie-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Aib-Arg-NH2 (SEQ ID NO :2))的新方法，其包含固相 Fmoc 化学合成(Fmoc-chemi stry)。
技术介绍
胰高血糖素样肽1(7-36)酰胺(GLP-I) (SEQ ID NO 1)通过组织特异性翻译后加工胰高血糖素前体——前胰高血糖素原在小肠L细胞中合成并响应于膳食释放到循环中。有观察显示GLP-I的治疗潜力，单次皮下剂量的GLP-I能完全正常化患有非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)病人的餐后葡萄糖水平(Gutniak，M. K.等，1994，Diabetes Care, 14 1039-44)。此效果被认为由胰岛素释放增加和胰高血糖素分泌降低来介导。然而，GLP-I代谢不稳定，体内具有仅1到2分钟的血浆半衰期。外部施加的GLP-I也很快被降解(Deacon， C. F.等，1995，Diabetes,44 :1126-1131).在PCT 公开编号 WO 00/34331 中公布了 (Aib8'35) hGLP-1 (7-36) -NH2 (SEQ ID NO: 2)，其比天然GLP-I更有活性和/或代谢上更稳定，所述公开的内容在此以其整体引入。然而，在 WO 00/34331 的 18-19 页提供的(Aib8'35)hGLP-1 (7-36)-NH2(SEQ ID NO :2)的合成描述不适用于肽的商业规模生产，因为在此使用的MBHM4-甲基二苯甲基胺)树脂需要用氢氟酸除去肽。除了对这种极端腐蚀性材料大规模使用的安全考虑之外，还需要特殊装置来保证其使用。一般基于氢氟酸裂解的方案需要大量投资来保证其对于工业化规模是安全和可放大的。因此，需要发展有效的大规模方法用于生产(Aib8’35)hGLP-1 (7-36)-NH2 (SEQ ID NO 2)。
技术实现思路
本专利技术提供了用于合成(Aib8’35)hGLP-1 (7-36)-NH2(SEQ ID NO :2)的新方法，其包括逐步固相Fmoc化学合成。一方面，本专利技术提供了用于合成(Aib8’35)hGLP-1 (7-36)-NH2(SEQ ID NO : 的方法，包括步骤(a)用侧链保护的精氨酸树脂，从(Aib8’35) hGLP-1 (8-35)-NH2 (SEQ ID NO :8)的 C 末端到N末端连续偶联Fmoc-氨基酸，其中在每一连续偶联步骤后从N末端去除Fmoc基团， 来产生侧链保护的 Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-G In-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Aib-Arg 树脂(SEQ ID NO 4)；(b)偶联侧链保护的 Boc-His-OH 与侧链保护的 Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-A sp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-IIe-Ala-Trp-Leu-Val-Ly s-Aib-Arg 树脂(SEQ ID NO :4)来产生侧链保护的 Boc-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-S er-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-VaI-Lys-Aib-Arg 树月旨(SEQ ID NO :5)。(c)用裂解混合物处理侧链保护的 Boc-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp -Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Aib-Arg树脂(SEQ ID NO 5)并从其中去除侧链保护基团和N末端保护基团，由此产生粗制的(Aib8'35)hGLP-1 (7-36)-NH2(SEQ ID NO :2)；及(d)分离并纯化粗制(Aib8’35)hGLP-1 (7-36)-NH2 (SEQ ID NO :2)来产生纯化的 (Aib8’35) hGLP-1 (7-36)-NH2 (SEQ ID NO :2)。本专利技术的前述方面的优选实施方案还包括步骤(a-D去保护能产生肽酰胺的Fmoc保护树脂来从树脂去除Fmoc基团；(a-2)附着侧链保护的Fmoc-Arg-OH到树脂上来产生侧链保护的Fmoc精氨酸树脂；及(a-3)从侧链保护的Fmoc精氨酸树脂去除Fmoc基团来产生侧链保护的精氨酸树脂；这些步骤在步骤(a)之前。本专利技术的前述方面的优选实施方案其特征在于在步骤(a-2)中所述的侧链保护的Fmoc-Arg-OH是Fmoc-Arg (Pbf) -OH ；所述侧链保护的Fmoc-精氨酸树脂是Fmoc-Arg (Pbf)树脂；所述侧链保护的精氨酸树脂是侧链保护的Arg (Pbf)树脂；所述通式(Aib8’35)hGLP-1 (8-35)-NH2 (SEQ ID NO :8)自 C 末端到 N 末端的 Fmoc 氨基酸是 Fmoc-Aib-OH, Fmoc-Lys (Boc) -OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp (Boc) -0H, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH， Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-0H， Fmoc-Ser(tBu)-0H， Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH， Fmoc-Thr (tBu) -OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Glu (OtBu) -OH,和 Fmoc-Aib-OH ；所述侧链保护的Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu -Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Aib-Arg树脂(SEQ ID NO 4) 是 Aib-Glu (OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．用于合成（Ａｉｂ８，３５）ｈＧＬＰ－１（７－３６）－ＮＨ２（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２）的方法，其包括逐步固相Ｆｍｏｃ－化学合成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：董正欣，
申请(专利权)人：益普生制造爱尔兰有限公司，
类型：发明
国别省市：IE