本发明专利技术提供了一种反相色谱介质，其选自式［Ｘ－Ｃ６Ｈ４－（Ｏ）ｍ－（ＣＨ２）ｎ］ｑ－Ｚ表示的介质和所述式的疏水性封端的介质，其中ｎ为１至４的数，ｍ为０或１，当ｍ为１时，Ｘ选自基团Ｈ、苯基和具有１至６个碳原子的烷基，当ｍ为０时，Ｘ选自苯氧基和具有１至６个碳原子的烷氧基，Ｚ为硅胶或亲水性聚合物色谱载体的骨架，ｑ为等于连接至所述硅胶或亲水性聚合物色谱载体的骨架的配体的数量的数，条件是，当所述式的反相色谱介质未被疏水性基团封端时，ｍ＝１时Ｘ不为Ｈ。这些新的色谱物质是如下制备的：使（ａ）色谱介质载体，其选自（１）在硅胶骨架的表面上具有羟基的硅胶载体或（２）在聚合物骨架的表面上具有羟基、胺或亚胺基团的亲水性聚合物载体，与（ｂ）式［Ｘ－Ｃ６Ｈ４－（Ｏ）ｍ－（ＣＨ２）ｎ］ｐ－Ｓｉ（Ｙ）４－ｐ的反应物进行反应，其中ｐ为１至３的数，Ｙ为氯、溴、碘和在烷氧基部分具有１至４个碳原子的烷氧基，ｍ、ｎ和Ｘ如上所定义，以及任选地，使所得介质与疏水性封端反应物反应。所得色谱介质具有连接至硅胶或亲水性聚合物载体的骨架的这些配体，这种色谱介质提供了在含水的流动相中分析物分离的能力。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新的色谱介质及其用于分离和纯化小分子的用途。更具体地，本专利技术公开了一种新的疏水性色谱介质，其通过将含有C-O-C键的苯氧基烷基、烷氧基-苯基或苯氧基苯基类型的配体键合至固体载体而制备。该介质还可以具有疏水性封端。在本专利技术中提供的新的色谱介质特别有用于分离各种基于疏水性和η-H相互作用的分子。此外，该新的介质可以通过仅使用高含水量的流动相来分离高水溶性的化合物。
技术介绍
反相HPLC介质广泛地应用于分离多种基本化合物如药物、农用化学品和肽及小分子蛋白质。多种直径、孔径、孔体积、表面积和硬度定义明确的、结构上合适的球形硅胶颗粒和聚合物颗粒适合于分析型和制备型的HPLC。此外，广泛地使用经极性配体和非极性配体修饰的、在化学上不同的硅胶基固定相介质和聚合物载体介质。公知的是除了所使用的配体的化学性质如氰基、氨基、二醇、和C4，C8或C18和苯基配体之外，剩余SiOH基团的分布在分离过程中也具有重要的作用。一般而言，大多数色谱介质都基于聚合物颗粒或硅胶颗粒，其具有不规则的至球形颗粒的形状、不同的粒径和孔径。最常见的色谱介质是通过将一系列链长为1-30个碳原子的烷基键合至聚合物或硅胶颗粒而制备的。十八烷基(C18)最常见的，接着是C8和C4结合的硅胶。下一步研究是使用封端，其中较小的试剂(TMS，三甲基甲硅烷基氯化物)用来对未反应的Si-OH基团进行封端。键合的程度随硅胶的类型变化，其反映在碳载量(carbon loading)中，如从表面覆盖的百分比可见的，表面覆盖的百分比大致为固定相比例的指导， 并因此大致为柱的整体保持性的指导。在反相色谱中使用含水有机流动相，分离是基于分析物在流动相和固定相之间的分配，并受到分析物的极性和疏水性的控制。洗脱液的强度受到有机改性剂(通常是甲醇、 乙腈或THF)比例的控制。由于各改性剂与分析物和介质的配体的相互作用会是不同的，任何分析物化合物的选择性或相对保留取决于各分子的极性和流动相的洗脱强度。常见的是在流动相中使用多种以及变化量的溶剂以从柱中洗脱感兴趣的化合物。然而，对于使用色谱单元操作进行制备的方法应用，出于安全性和经济的原因，将会高度优选能够使用尽可能少量的有机溶剂来洗脱小分子。然而，不可能使用现有的色谱介质，因为大多数分离的发生是基于在流动相中的分配，而不是基于分析物与配体之间的强力的相互作用。我们已经发现通过在介质中存在一些配体，我们能够实现更好的分离，因为其提供了多种相互作用位点，包括疏水性范德华相互作用、π-π相互作用和氢键。尽管出于经济或效率目的，洗脱液的有机组分的通常优选为甲醇或乙腈，但是出于多种原因，理想的洗脱溶剂将会是水。许多不同的反相介质已知在市场上可以从许多制造商包括Mallinckrodt Baker, Inc.获得，但是除非有特定的相互作用，否则相似类型的柱之间的选择性差异通常少于改变洗脱溶剂所引起的差异。本专利技术的一个目的是显示本文记载的新反相介质不仅表现出独特的分离而且仅4使用水作为流动相洗脱感兴趣的化合物。此外，该介质可以用于使用高含水量的流动相分离水溶性分析物。专利技术概述本专利技术提供了一种反相色谱介质，其选自下式表示的介质 p-Si (Y) 4_p其中ρ为1至3的数，优选为1，Y为氯、溴、碘或在烷氧基中具有1至4个碳原子的烷氧基，优选为氯，m、η和X如上所定义，其中下式的配体[X-C6H4-(O)m-(CH2) J-经由硅胶骨架上的羟基或经由亲水性聚合物骨架上的羟基、胺或亚胺基团连接至硅胶或亲水性聚合物载体的骨架，从而提供下式的反相色谱介质[X-C6H4-(O)m-(CH2)Jq-Z其中η为1至4、优选2至4的数，并更优选3或4，再更优选3，m为0或1，优选 1，当m为1时，X选自基团H、苯基和具有1至6个碳原子、优选1至4个碳原子和更优选2 至4个碳原子的烷基，其中X优选为H，当m为0时，X选自苯氧基和具有1至6个碳原子、 优选1至4个碳原子、更优选1至2个碳原子且再更优选1个碳原子的烷氧基，其中X优选为甲氧基，Z为硅胶色谱载体或亲水性聚合物色谱载体的骨架，q为等于连接至所述硅胶色谱载体或亲水性聚合物色谱载体的骨架的配体的数量的数，条件是，当所述式的反相色谱介质未被疏水性基团封端时，m= 1时X不为H。反应物以硅胶或亲水性聚合物载体与反应物为约20 1至约2 1、优选约13 1至约5 1和更优选7 1的重量比与硅胶载体或亲水性聚合物载体反应。如果期望上述式的反相色谱介质具有疏水性封端，那么这种介质可以与任何合适的疏水性封端反应物反应，使封端反应物与硅胶骨架上任何剩余的硅烷醇基团或者与亲水性聚合物色谱载体的骨架上的任何剩余的羟基、胺或亚胺基团发生反应。已经发现，所得具有连接至硅胶或亲水性聚合物载体的骨架的这些配体的色谱介质提供了在含水的流动相中分离分析物的能力。此外，当所述色谱介质已经被疏水性封端5时，所得封端的介质与亲水性封端的介质相比具有增加的在水性介质中的稳定性，以及增加的与配体或封端基团的疏水性相互作用从而增加保留性质。此外，并且出人意料的是，该疏水性封端的介质允许在高含水量的流动相中进行分离。附图的简要说明本专利技术通过附图所示的本专利技术实施方案进行解释，但是并不局限于此，在各附图中附图说明图1为分离对乙酰氨基酚(acetaminophen)的应用例1的分离色谱图；图2为分离咖啡因的应用例2的分离色谱图；图3为分离碘克沙醇(iodixanol)的应用例3的分离色谱图；图4为分离碘克沙醇的应用例4的分离色谱图；图5为分离含有尿嘧啶、苯酚、m-DETA和联苯的混合物的应用例5的分离色谱图； 和图6为分离碘克沙醇的对比应用例的分离色谱图。专利技术详述本专利技术提供了一种反相色谱介质，其选自下式表示的介质 p_Si (Y) 4_p其中ρ为1至3的数，优选为1，Y为氯、溴、碘或在烷氧基部分具有1至4个碳原子的烷氧基，优选为氯，m、η和X如上所定义，其中下式的配体氨基]-2-羟基-丙基]氨基]-N，N' -二(2，3_ 二羟基丙基)-2，4，6_三碘-苯-1，3-二甲酰胺，而不使用任何有机介质，因此碘克沙醇可以使用水作为唯一的洗脱液而分离。类似地，介质，尤其是本专利技术的具有苯氧基丙基配体的介质，能够使用水作为流动相洗脱对乙酰氨基酚。将对乙酰氨基酚装载到填充有本专利技术介质的柱上，并且用水洗脱，如应用例1中所示的尖锐峰。根据本专利技术的一个实施方案，一种反相介质通过使3-苯氧基丙基三氯硅烷 (C9H11Cl3OSi, CAS No. 60333-76-8)与球状硅胶(40-60微米，120 A )在甲苯/甲醇混合物中在室温反应约16-20小时而制备。在本专利技术的另一实施方案中，50g硅胶在250ml甲苯(含5ml甲醇)中浆化，并向其中加入7. 5g苯氧基丙基三氯硅烷，室温反应约6小时。该浆料用甲醇洗涤，并在85°C干燥。表面覆盖(基于％ C)为179yg/m2。将所得介质填充入分析柱6X250mm)和半制备型柱(10X250mm)中，并测试在不同条件下多种小分子的分离。用于本专利技术介质的硅胶或亲水性聚合物载体可以为任何合适的羟基化的硅胶或合适的亲水性聚合物。用于介质的硅胶(silica gel)载体可以为不规则的或球形的，粒径通常在约本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．反相色谱介质，其选自下式表示的介质：［Ｘ－Ｃ６Ｈ４－（Ｏ）ｍ－（ＣＨ２）ｎ］ｑ－Ｚ和所述式的疏水性封端的介质，其中ｎ为１至４的数，ｍ为０或１，当ｍ为１时，Ｘ选自基团Ｈ、具有１至６个碳原子的烷基和苯基，当ｍ为０时，Ｘ选自具有１至６个碳原子的烷氧基和苯氧基，Ｚ为硅胶色谱载体或亲水性聚合物色谱载体的骨架，ｑ为等于连接至所述硅胶色谱载体或亲水性聚合物色谱载体的骨架的配体的数量的数，条件是，当所述式的反相色谱介质未被疏水性基团封端时，ｍ＝１时Ｘ不为Ｈ。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：南度·德奥卡，
申请(专利权)人：安万托特性材料股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US
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