一种样品中的低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于，使样品与（ｉ）胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的组合、或（ｉｉ）胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶和胆固醇脱氢酶的组合在［ａ］聚氧乙烯－聚氧化烯烷基芳基醚；［ｂ］选自由聚氧乙烯－聚氧化烯缩合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支链烷基醚和聚氧乙烯－聚氧化烯支链烷基醚构成的组中的１种以上表面活性剂；［ｃ］选自由伯胺、仲胺、叔胺和季铵构成的组中的１种以上表面活性剂；和［ｄ］聚阴离子的存在下反应，并测定该反应生成的物质或消耗的物质。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及样品中所含的低密度脂蛋白(以下称为LDL)中的胆固醇(以下简称为LDL-C)的测定方法及测定用试剂盒。
技术介绍
LDL具有向外周细胞供给胆固醇的作用，是以冠状动脉硬化为代表的各种动脉硬化的直接因子。LDL-C的增加是动脉硬化疾病的主要危险因子之一，对其进行分类定量在临床上是有用的。现有的LDL-C的定量方法可以举出超速离心法、电泳法、利用Friedewald公式的计算方法等。超速离心法是利用脂蛋白的比重差，使用超速离心分离机分离LDL后，测定其胆固醇量的方法(非专利文献1)。但是，利用超速离心法的分离操作繁杂，而且在快速性、简便性等方面存在缺点。电泳法有利用脂蛋白的电荷差、以琼脂糖凝胶等作为支撑体进行分离的方法和利用脂蛋白的粒子尺寸差、以聚丙烯酰胺凝胶作为支撑体进行分离的方法等。但是，电泳法缺乏定量性，在简便性、经济性等方面存在问题。在利用Friedewald公式的计算方法中，由总胆固醇(以下简称为T_C)、高密度脂蛋白(以下称为HDL)中的胆固醇(以下简称为HDL-C)和总甘油三酯(以下简称为T-TG) 的测定值，按照以下的计算式算出LDL-C量(非专利文献2)。(LDL-C) = (T-C) - (HDL-C) - (T-TG)/5但是，该方法受到血清中的T-TG含量和饮食的影响，因此准确性存在问题。另外，近年来，还报道了不需要超速离心法等分离操作、可搭载于通用的自动分析仪装置上的LDL-C的定量方法。其中，作为定量LDL-C的方法，已知以下方法。一种被测试样中的LDL-C的定量方法，其中，包括在作用于LDL以外的脂蛋白的表面活性剂的存在下，使胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶发生作用，除去生成的过氧化氢，由此除去被测试样中的HDL、超低密度脂蛋白(以下称为VLDL)和乳糜微粒中的胆固醇的第一步骤；和接着定量被测试样中的残存胆固醇的第二步骤(专利文献1)。一种LDL-C的定量方法，其中，在血清中添加选自聚氧乙烯亚烷基苯基醚和聚氧乙烯亚烷基三苄基苯基醚的表面活性剂、以及胆固醇测定用酶试剂，使脂蛋白中的HDL中和VLDL中的胆固醇优先反应后，测定残留的胆固醇的反应量(专利文献2)。一种选择性地测定LDL-C的方法，其中，在生物试样中添加聚氧乙烯衍生物和聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、以及胆固醇测定用酶，选择性地测定脂蛋白中的LDL-C (专利文献3) ο一种LDL-C的测定方法，其特征在于，在二甲基-α -环糊精和/或聚-β -环糊精的存在下对生物试样进行测定(专利文献4)。一种试样中的LDL-C的定量方法，用于直接地、选择性地测定含有乳糜微粒、HDL、 LDL、VLDL中的任意1种以上的试样中的胆固醇，其中，在磷脂、含有类磷脂基的化合物的存在下定量试样中的LDL-C(专利文献5)。但是，还在寻求更简便且准确地测定样品中的LDL-C的方法和试剂盒。现有技术文献专利文献专利文献1 日本特开平10-38888号公报专利文献2 日本特开平9-313200号公报专利文献3 :W000/17388小册子专利文献4 日本特开平11-30617号公报专利文献5 日本特开2002-202314号公报非专利文献非专利文献1:7 F A > ^ F . 'J , F .丨J 寸一 f (Adv. Lipid Res.)、第 6 卷、 第1页、1968年非专利文献2 々丨J 二力卟S 7卜丨J 一(Clin. Chem.)、第18卷、第499页、1972年
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供用于简便且准确地测定样品中的LDL-C的方法、试剂及试齐U盒。本专利技术人对LDL-C的测定方法进行了专心研究，结果发现，通过在特定的表面活性剂和聚阴离子的存在下使样品与胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的组合、或胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶和胆固醇脱氢酶的组合反应，能够在不除去LDL以外的脂蛋白中的胆固醇、并且不进行脂蛋白的物理的级分分离操作的情况下简便且准确地测定样品中的LDL-C， 从而完成了本专利技术。即，本专利技术涉及以下(1) (31)。(1) 一种样品中的低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于，使样品与 (i)胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的组合、或(ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶和胆固醇脱氢酶的组合在 聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；选自由聚氧乙烯-聚氧化烯缩合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支链烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支链烷基醚构成的组中的1种以上表面活性剂；选自由伯胺、仲胺、叔胺和季铵构成的组中的1种以上表面活性剂；和聚阴离子的存在下反应，并测定该反应生成的物质或消耗的物质。(2) 一种样品中的低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于，使样品与 (i)胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的组合、或(ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶和胆固醇脱氢酶的组合在聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；聚氧乙烯-聚氧化烯缩合物；选自由伯胺、仲胺、叔胺和季铵构成的组中的1种以上表面活性剂；和聚阴离子的存在下反应，并测定该反应生成的物质或消耗的物质。(3) 一种样品中的低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于，使样品与 (i)胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的组合、或(ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶和胆固醇脱氢酶的组合在聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；聚氧乙烯-聚氧化烯缩合物；选自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支链烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支链烷基醚构成的组中的1种以上表面活性剂；选自由伯胺、仲胺、叔胺和季铵构成的组中的1种以上表面活性剂；和聚阴离子的存在下反应，并测定该反应生成的物质或消耗的物质。(4)如(1) (3)中任一项所述的测定方法，其中，季铵盐为三甲基烷基铵盐或苄基二甲基烷基铵盐。(5)如(1) (3)中任一项所述的测定方法，其中，叔胺为二甲基烷基胺。(6)如(1) (5)中任一项所述的测定方法，其中，生成的物质为过氧化氢。(7)如(6)所述的测定方法，其中，过氧化氢的测定使用过氧化氢测定用试剂进行。(8)如(1) (5)中任一项所述的测定方法，其中，生成的物质为还原型辅酶。(9)如(8)所述的测定方法，其中，还原型辅酶的测定使用还原型辅酶测定用试剂进行。(10) 一种样品中的低密度脂蛋白中的胆固醇测定用试剂，其特征在于，含有聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；选自由聚氧乙烯-聚氧化烯缩合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支链烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支链烷基醚构成的组中的1种以上表面活性剂；选自由伯胺、仲胺、叔胺和季铵构成的组中的1种以上表面活性剂；聚阴离子；及胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶。(11) 一种样品中的低密度脂蛋白中的胆固醇测定用试剂，其特征在于，含有聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；聚氧乙烯-聚氧化烯缩合物；选自由伯胺、仲胺、叔胺和季铵构成的组中的1种以上表面活性剂；聚阴离子；及胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶。(12) 一种样品中的低密度脂蛋白中的胆固醇测定用试剂，其特征在于，含有聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；聚氧乙烯-聚氧化烯缩合物；选自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支链烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支链烷基醚构成的组中的1种以上表面活性剂；选自由伯胺、仲胺、叔胺和季铵构成的组中的1种以上表面活性剂；聚阴离子；及胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶。(13)本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种样品中的低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于，使样品与（ｉ）胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的组合、或（ｉｉ）胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶和胆固醇脱氢酶的组合在［ａ］聚氧乙烯－聚氧化烯烷基芳基醚；［ｂ］选自由聚氧乙烯－聚氧化烯缩合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支链烷基醚和聚氧乙烯－聚氧化烯支链烷基醚构成的组中的１种以上表面活性剂；［ｃ］选自由伯胺、仲胺、叔胺和季铵构成的组中的１种以上表面活性剂；和［ｄ］聚阴离子的存在下反应，并测定该反应生成的物质或消耗的物质。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：村上智美，
申请(专利权)人：协和梅迪克斯株式会社，
类型：发明
国别省市：JP
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