可用于检测汉赛巴尔通体的１７－ｋＤａ多肽的重组片段和合成肽制造技术

本发明专利技术内容描述了汉赛巴尔通体的重组和合成多肽以及用于检测对汉赛巴尔通体特异的抗体的相关方法和试剂盒。１７－ｋＤａ多肽、方法和试剂盒可用于检测最近的和／或正在发生的汉赛巴尔通体感染，它们可以用于诊断猫抓病（ＣＳＤ）。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体上涉及用于检测哺乳动物包括人中的传染原的诊断测定领域。本文公开的具体实施方案包括17-kDa蛋白的新型重组片段和合成多肽，它们可用于汉赛巴尔通 # (Bartonella henselae)的中。
技术介绍
汉赛巴尔通体是猫抓病(CSD)的病原体(Bass等，1997 ； Bran ley等，1996 ； Chomel, 2000)并且也可以导致免疫低下患者中的杆菌性血管瘤病(BA) (Arvand等，1998 ； Asharaf 和 Letha，2002 ；Birtles 等，1991 ；Chomel, 1996)。CSD 常见于被受感染的家猫抓伤或咬伤的儿童和年轻人(Chomel，2000)并且其特征是发热和近卫淋巴结病(regional lymphadenopathy)。正常情况下，该病在约三(3)个月内自行消退。然而，在免疫低下患者中，巴尔通体感染经常表现为更加严重且威胁生命的疾患，包括BA、心内膜炎、脑病和肺病 (Margileth 和 Baehren，1998 ；Regnery 和 Tappero，1995)。BA 的特征是皮肤和皮下血管病变，其中细菌侵袭内皮细胞导致血管瘤。BA最初描述于感染人免疫缺陷病毒的患者中并且已经延伸至包括患有累及不同器官诸如骨、肝和脾的增生性血管病变的患者(Regnery和 Tappero,1995)。汉赛巴尔通体通过分子和血清学检测进行鉴定(Eskow等，2001)。通过PCR扩增对细菌基因进行分子鉴定仅适用于具有适当设备、专家和质量控制规程的实验室。PCR可用于早期感染期间的检测，其中细菌仍然存在于外周血流中。通过PCR的分子检测被推荐用于手术切除的感染的心脏瓣膜，但对于外周血样品不太灵敏，其原因是病原体生物可利用度低。血清学目前是用于确定巴尔通体感染的最常用的诊断测试(Houpikian和 Raoult, 2002, 2003 ；Sander 等，2001)。通过培养对此难养生物(fastidiousorganism)进行细菌分离很困难，因为过长的孵育期导致低灵敏度，尤其对于接受抗生素治疗的患者(Agan 和 Dolan, 2002 ；La Scola 和 Raoult,1999)。免疫荧光测定(IFA)是用于检测汉赛巴尔通体接触的最常用的血清学测试。其是高度主观的测试，并且因此易于由那些执行测试的人作出错误的解释。在不同实验室中观察的差异性的灵敏度常常导致血清学结果解释的变化(Amerein等，1996 ；Bergmans等， 1997 ；Fournier 等，2002)。缺少关于表征汉赛巴尔通体的抗原的信息已经极大地阻碍了开发用于检测汉赛巴尔通体的灵敏的和特异的测定。美国专利号5，736，347描述了 17_kDa蛋白的鉴定 (Anderson等，1995 ；Sweger等，2000)，所述蛋白代表汉赛巴尔通体中据信在人中诱发抗体应答的少数已表征的抗原之一。然而，‘347专利未能提供全长17-kDa蛋白的灵敏度和特异性。仅进行了 PCR斑点印迹杂交和IFA检测测定，因此不能肯定地确定17-kDa蛋白可能是 ELISA测定中的良好的检测抗原，尤其对于IgM。因此，17-kDa蛋白是否能够用作检测IgM 应答的抗原远未明确，更不用说17-kDa蛋白上负责免疫原应答的一个或多个结构域。因此，对于改进的用于检测汉赛巴尔通体的测定和方法一直存在需求。本专利技术解决了现有技术的不足之处并且提供了出人意料的发现，即17-kDa蛋白C-末端上的长度跨越 10个氨基酸的单个结构域，对于结合获自感染汉赛巴尔通体的患者的IFA血清阳性的血清中存在的抗体是必不可少的。
技术实现思路
本专利技术提供了可用于检测汉赛巴尔通体的汉赛巴尔通体的多肽片段。本专利技术提供了重组和合成多肽以及在检测对汉赛巴尔通体特异的抗体中使用它们的方法。所述多肽、 方法和试剂盒可用于检测最近的和/或正在发生的汉赛巴尔通体感染，它们可以用于诊断猫抓病(CSD)。在一个方面，本专利技术提供了一种具有如SEQ ID NO :22中所示的氨基酸序列的合成多肽，其中所述合成多肽当在ELISA测定中进行测定时与来自感染汉赛巴尔通体的患者的 IFA血清阳性的血清反应且不与IFA血清阴性的血清反应。SEQ ID NO :22的多肽含有10 个氨基酸的区段(即，EKLEKSDVRL)，该区段被认为对于SEQ ID NO 22多肽与来自感染汉赛巴尔通体的患者的IFA血清阳性的血清反应但不与IFA血清阴性的血清反应是必不可少的 (但非足够的)。在另一个方面，本专利技术提供了合成多肽，其中所述合成多肽包含氨基酸置换、缺失或添加。所述置换可以是保守氨基酸置换。所述置换、缺失或添加可以涉及单个氨基酸或多个氨基酸。优选的实施方案包括具有氨基酸置换、缺失或添加的SEQ ID N0:22。更优选地，本专利技术提供合成多肽的氨基酸修饰(即，SEQ ID NO :24、25、26、27、28、29、30、31和32)。在另一个方面，本专利技术提供了具有选自由SEQ ID NO 24, SEQ ID N0:25和SEQ ID NO 26组成的组的氨基酸序列的合成多肽。在另一个方面，本专利技术提供了具有如SEQ ID NO :27所示的氨基酸序列的合成多肽。在另一个方面，本专利技术提供了具有如SEQ ID NO :32所示的氨基酸序列的合成多肽。在另一个方面，本专利技术提供了具有选自由SEQ ID NO :30和SEQ ID NO 31组成的组的氨基酸序列的合成多肽。还在另一个方面，本专利技术提供了一种包含如SEQ ID NO :10中所示的氨基酸序列的重组多肽，其中所述重组多肽当在ELISA测定中进行测定时与来自感染汉赛巴尔通体的患者的IFA血清阳性的血清反应且不与IFA血清阴性的血清反应。在另一个方面，本专利技术提供了重组多肽，其中所述重组多肽包含氨基酸置换、缺失或添加。所述置换可以是保守氨基酸置换。所述置换、缺失或添加可以涉及单个氨基酸或多个氨基酸。优选的实施方案包括具有氨基酸置换、缺失或添加的SEQ ID NO=IO0更优选地，本专利技术提供重组多肽的氨基酸修饰(即，SEQ ID NO :42、43、44和45)。在另一个方面，本专利技术提供了具有选自由SEQ ID NO 42和SEQ ID NO 43组成的组的氨基酸序列的重组多肽。在另一个方面，本专利技术提供了具有如SEQ ID NO :44中所示的氨基酸序列的重组多肽。在另一个方面，本专利技术提供了具有如SEQ ID NO :45中所示的氨基酸序列的重组多肽。还在另一个方面，本专利技术提供了包含具有如SEQ ID NO 9中所示的核苷酸序列的分离的多核苷酸的载体。所述载体还包含与所述分离的多核苷酸可操作地连接的DNA转录启动子。在另一个方面，所述载体选自由pET、pENTR和pCR 8/GW/T0P0 组成的组，且所述启动子选自由Iac启动子、trp启动子和tac启动子组成的组。在另一个方面，本专利技术提供了包含载体的宿主细胞，所述载体包含具有如SEQ ID N0:9中所示的核苷酸序列的分离的多核苷酸。优选地，所述宿主细胞是大肠杆菌 (E.coli)。示例性的大肠杆菌包括 NovaBlue、BL21(DE3)或 BL21pLsS本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种具有如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２中所示的氨基酸序列的合成多肽，其中所述合成多肽当在ＥＬＩＳＡ测定中进行测定时与来自感染汉赛巴尔通体（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａｈｅｎｓｅｌａｅ）的患者的ＩＦＡ血清阳性的血清反应且不与ＩＦＡ血清阴性的血清反应。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·黄，
申请(专利权)人：医学诊断实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：US