登革热病毒中和抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及中和登革热病毒感染而不引起抗体依赖性登革热病毒感染增强作用的抗体及其抗原结合片段以及抗体及其抗原结合片段的混合物。本发明专利技术还涉及产生此类抗体和抗原结合片段的永生化Ｂ细胞以及结合此类抗体和抗原结合片段的表位。此外，本发明专利技术还涉及所述抗体、抗原结合片段和表位在筛选方法以及在登革热病毒感染的诊断和治疗中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】登革热病毒中和抗体及其用途本申请要求2008年10月13日提交的申请号为No. 61/104，911，专利技术名称为“登革热病毒中禾口抗体及其用途(Dengue virus neutralizing antibodies and Use Thereof)，， 的美国临时申请的优先权，其全部内容通过引用并入本申请。
技术介绍
登革热病毒(DENV)是严重威胁世界健康的人类病原体。估计这些病毒每年引起数十万例的登革热、登革出血热和登革热休克综合征。黄病毒属有四种密切相关的登革热病毒血清型DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4。这四种病毒通过埃及伊蚊(Aedes aegypti)——一种高度城市化的、成功抵抗所有试图对其进行杀灭和控制努力的蚊子—— 叮咬而在人与人之间传播。免疫接种被认为是控制登革热的唯一有效方法。为此，一些四价登革热候选疫苗已处于研发的最后阶段。首次感染一种登革热病毒血清型可诱导针对同源血清型的终生免疫。不过，这对不同血清型的感染没有交叉保护作用。实际上，由于存在抗体依赖性感染增强作用(ADE)， 针对一种血清型的已有的免疫力可增加不同血清型引起的登革热感染和登革出血热的风险。在ADE中，因先前登革热感染或由母亲被动转移来的抗体会形成感染性免疫复合物，后者结合携带Fc-受体的单核巨噬细胞系中的细胞，导致有效感染。因此，目前需要能够预防登革热病毒感染而不增加抗体依赖性感染增强作用的风险的材料和方法。
技术实现思路
本专利技术部分基于发现了中和登革热病毒感染而不引起抗体依赖性登革热病毒感染增强作用的抗体和抗体混合物(cocktails)。因此，在本专利技术的一个方面，本专利技术包括一种人抗体、抗体变体或其抗原结合片段，其中和登革热病毒，其中所述抗体、抗体变体或其抗原结合片段不引起抗体依赖性登革热病毒感染增强作用。在一个实施方式中，本专利技术包含人抗体、抗体变体或其抗原结合片段，其中和登革热病毒，其中所述抗体、抗体变体或其抗原结合片段的Fc区包含突变，且其中所述突变降低抗体与Fc受体的结合。在本专利技术的另一实施方式中，本专利技术包含药物组合物，其包含两种或更多种人抗体或其抗原结合片段。所述抗体或抗原结合片段通过结合每一登革热病毒血清型的至少两种不同的表位而中和登革热病毒血清型DENV-l、DENV-2、DENV-3和DENV-4。所述药物组合物的抗体不引起抗体依赖性登革热病毒感染增强作用。在另一实施方式中，本专利技术包含一种抗体或其抗原结合片段，其包含至少一种具有以下任一序列的互补决定区(CDR)序列SEQ ID NO :1-6、17-22、33-38、49-54、67-72、 83-88、99、100、105-110、121-123、124、125、135-139、149、153-158、169-174、185-188 或 189，其中所述抗体中和登革热病毒感染。在另一实施方式中，本专利技术包含一种抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含具有氨基酸序列SEQ ID NO: 13的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO: 14的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 29的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO 30的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 45的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO 46的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 61的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO 62的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 65的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO 62的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 79的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO 80的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 95的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO 96的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 95的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO 103的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :117 的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO :118的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 131的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO :132的轻链可变区；或具有氨基酸序列 SEQ ID NO 145的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO :146的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 151的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO :146的轻链可变区； 或具有氨基酸序列SEQ ID NO :165的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO :166的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :181的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO 182的轻链可变区；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :195的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO 196的轻链可变区，其中所述抗体中和登革热病毒感染。在另一实施方式中，本专利技术包含重组抗体、抗体变体或其抗原结合片段，其能中和登革热病毒。所述重组抗体、抗体变体或抗原结合片段不引起抗体依赖性登革热病毒感染增强作用。在另一方面，本专利技术包含核酸分子，其包含编码中和登革热病毒感染的本专利技术的抗体或抗体片段的多核苷酸。在另一方面，本专利技术包含表达本专利技术的抗体的细胞。在另一方面，本专利技术包含一种分离或纯化的免疫原性多肽，其包含结合本专利技术的抗体的表位。本专利技术还包含药物组合物，其包含本专利技术的抗体、抗体变体或抗原结合片段、本专利技术的核酸或本专利技术的免疫原性多肽，以及药用可接受的稀释剂或载体和任选存在的用于延长所述抗体或其抗原结合片段的半衰期的物质(agent)。在本专利技术的另一方面，本专利技术提供抑制或预防登革热病毒感染或登革热病毒相关疾病的方法或治疗登革热病毒感染或登革热病毒相关疾病的方法。所述方法包括给有需要的对象施用治疗有效量的至少一种本专利技术的抗体、抗体变体、抗原结合片段或药物组合物。在本专利技术的另一方面，本专利技术包含筛选能够诱导或揭示针对登革热病毒的免疫应答的多肽的方法，包括使用本专利技术的抗体、抗体片段或变体筛选多肽文库。在本专利技术的另一方面，本专利技术包含监测抗登革热病毒疫苗的质量的方法。所述方法包括使用本专利技术的抗体、抗体变体或其抗原结合片段来核实所述疫苗的抗原含有具有正确构象的特异性表位。在本专利技术的另一方面，本专利技术包含疫苗，其包含特异性结合本专利技术的抗体、抗体片段或变体的表位。本专利技术也包括本专利技术的抗体或其抗原结合片段、本专利技术的核酸、本专利技术的免疫原性多肽或本专利技术的药物组合物用于(i)制备治疗登革热病毒感染的药物，(ii)疫苗或 (iii)诊断登革热病毒感染中的用途。此外，本专利技术还包括本专利技术的抗体或其抗原结合片段用于通过核实疫苗的抗原含有具有正确构象的特异性表位而监测抗DENV疫苗的质量的用途。在另一方面，本专利技术包含表位，其特异性结合本专利技术的任一抗体或其抗原结合片段，所述表位用于(i)治疗，( )制备治疗登革热病毒感染的药物，(iii)作为疫苗或(iv) 筛选能够中和登革热病毒感染的配体。附图说明 图1 使用野生型抗登革热病毒抗体以各血清型登革热病毒在VERO细胞和K562 细胞上进行病毒中和和增强测试。登革本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种人抗体或其抗原结合片段，其中和登革热病毒，其中所述抗体不引起抗体依赖性登革热病毒感染增强作用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US61/104,9112008年10月13日1.一种人抗体或其抗原结合片段，其中和登革热病毒，其中所述抗体不引起抗体依赖性登革热病毒感染增强作用。2.一种人抗体或其抗原结合片段，其中和登革热病毒，其中所述抗体的Fc区包含突变，且其中所述突变降低所述抗体与Fc受体的结合。3.权利要求1或2的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体的Fc区包含CH2L4A突变、CH2 L5A突变或两者。4.权利要求1或2的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体或重组抗体。5.权利要求1或2的抗体，其中所述抗体中和两种、三种或四种登革热病毒血清型中的一种以上登革热病毒。6.一种药物组合物，其包含两种或更多种人抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段通过结合每一登革热病毒血清型的至少两种不同的表位而中和登革热病毒血清型DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4，且其中所述抗体不引起抗体依赖性登革热病毒感染增强作用。7.权利要求6的组合物，其包含三种或更多种中和登革热病毒血清型DENV-l、DENV-2、 DENV-3和DENV-4的人抗体或其抗原结合片段。8.权利要求6的组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段中的每一个均在Fc区包含突变，所述突变降低所述抗体与Fc受体的结合。9.权利要求6的组合物，其中每一所述抗体或其抗原结合片段的Fc区包含CH2L4A突变、CH2 L5A突变或两者。10.权利要求6的组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体或重组抗体。11.一种抗体或其抗原结合片段，其包含至少一种具有以下任一序列的互补决定区 (CDR)序列=SEQ ID NO :1-6、17-22、33-38、49-54、67-72、83-88、99、100、105-110、121-123、 124、125、135-139、149、153-158、169-174、185-188 或 189，其中所述抗体中和登革热病毒感染。12.权利要求1、2或11的抗体或其抗原结合片段，其包含选自以下一组中的重链 CDRl =SEQ ID NO :1、17、33、49、67、83、105、121、135、149、153、169 和 185 ；选自以下一组中的重链 CDR2 =SEQ ID NO :2、18、34、50、68、84、106、122、136、154、170 和 186 ；和选自以下一组中的重链 CDR3 =SEQ ID NO :3、19、35、51、69、85、107、123、137、155、171 和 187，其中所述抗体中和登革热病毒感染。13.权利要求1、2或11的抗体或其抗原结合片段，其包含选自以下一组中的轻链 CDRl =SEQ ID NO :4、20、36、52、70、86、99、108、138、156、172 和 188 ；选自以下一组中的轻链 CDR2 =SEQ ID NO :5、21、37、53、71、87、109、124、157和 173 ；和选自以下一组中的轻链CDR3 SEQ ID NO :6、22、38、54、72、88、100、110、125、139、158、174 和 189，其中所述抗体中和登革热病毒感染。14.权利要求12的抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含重链，所述重链具有序列为 SEQ ID NO :1 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO :2 的 CDRH2、序列为 SEQ ID NO :3 的 CDRH3 ；序列为 SEQ ID NO 17 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO 18 的 CDRH2 和序列为 SEQ ID NO :19 的 CDRH3 ；序列为 SEQ ID NO 33 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO :34 的 CDRH2 和序列为 SEQ ID NO 35 的 CDRH3 ；序列为 SEQ ID NO 49 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO 50 的 CDRH2 和序列为SEQ ID NO :51 的 CDRH3 ；序列为 SEQ ID NO 67 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO 68 的 CDRH2 和序列为 SEQ ID NO 69 的 CDRH3 ；序列为 SEQ ID NO 83 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO 84 的 CDRH2 和序列为 SEQ ID NO :85 的 CDRH3 ；序列为 SEQ ID NO :105 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO 106 的 CDRH2 和序列为 SEQ ID NO :107 的 CDRH3 ；序列为 SEQ ID NO :121 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO 122 的 CDRH2 和序列为 SEQ ID NO :123 的 CDRH3 ；序列为 SEQ ID NO :135 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO :136 的 CDRH2 和序列为 SEQ ID NO :137 的 CDRH3 ；序列为 SEQ ID NO 149 的 CDRH1、序列为 SEQ ID NO :136 的 CDRH2 和序列为 SEQ ID NO :137 的 CDRH3 ；序列为 SEQ ID NO 153 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO :154 的 CDRH2 和序列为 SEQ ID NO :155 的 CDRH3 ；序列为 SEQ ID NO :169 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO :170 的 CDRH2 和序列为 SEQ ID NO 171 的 CDRH3 ；和序列为 SEQ ID NO :185 的 CDRHl、序列为 SEQ ID NO :186 的 CDRH2 和序列为 SEQ ID NO 187 的 CDRH3。15.权利要求13的抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含轻链，所述轻链具有序列为 SEQ ID NO 4 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO 5 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO 6 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO 20 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO :21 的 CDRL2、序列为 SEQ ID N0:22 的 CDRL3; 序列为 SEQ ID NO 36 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO :37 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO :38 的 CDRL3;序列为 SEQ ID NO 52 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO :53 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO: 54 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO :70 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO :71 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO :72 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO :86 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO :87 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO 88 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO 99 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO 53 的 CDRL2、 序列为 SEQ ID NO 100 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO :108 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO :109 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO :110 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO 70 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO 124 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO :125 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO :138 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO :109 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO 139 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO :156 的 CDRL1、序列为 SEQ ID NO 157 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO 158 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO 172 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO :173 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO :174 的 CDRL3 ；和序列为 SEQ ID NO :188 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO :37 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO :189 的 CDRL3。16.权利要求14的抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含轻链，所述轻链具有序列为 SEQ ID NO 4 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO 5 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO 6 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO 20 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO 21 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO 22 的 CDRL3 ； 序列为 SEQ ID NO 36 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO 37 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO 38 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO 52 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO 53 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO 54 的 CDRL3 ；序列为 SEQ ID NO 70 的 CDRLl、序列为 SEQ ID NO :71 的 CDRL2、序列为 SEQ ID NO 72 的 CDRL3 ；序列为 SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·兰扎韦基亚，
申请(专利权)人：生物医学研究所，
类型：发明
国别省市：CH