用胎盘细胞群治疗骨缺损的方法和组合物技术

本发明专利技术提供了成骨胎盘贴壁细胞（ＯＰＡＣ），使用ＯＰＡＣ和ＯＰＡＣ群的方法，以及培养、增殖、扩增或分化ＯＰＡＣ的方法。本发明专利技术进一步提供了使用ＯＰＡＣ配制适合对个体施用的可植入或可注射的组合物的方法。本发明专利技术更进一步提供的是，提供了用ＯＰＡＣ和包含ＯＰＡＣ的组合物治疗骨缺损的方法。本发明专利技术也提供了在多发性骨髓瘤的治疗和控制中使用ＯＰＡＣ的方法，例如，在患有多发性骨髓瘤的个体中对多发性骨髓瘤的一种或多种症状降低其进展、停止其进展、或改善其，该方法包含对个体施用大量ＯＰＡＣ。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供了成骨贴壁胎盘细胞(OPAC)的分离群的使用方法，和在例如多发性骨髓瘤的治疗中和在降低、停止或反转与多发性骨髓瘤相关或由其引起的骨量损失的治疗中使用OPAC的方法。2.
技术介绍
多发性骨髓瘤(也称作匪、骨髓瘤、浆细胞骨髓瘤、或Kahler' s疾病)是一类浆细胞癌症，浆细胞是产生抗体的免疫系统细胞。多发性骨髓瘤的症状包括骨痛、感染、 肾衰竭、贫血和骨损伤。该疾病被认为是不可治愈的，而且仅有几种治疗例如来那度胺 (REVLIMID )可供使用且显示希望。因而，对多发性骨髓瘤的新治疗存在需求。3.专利技术概述本专利技术提供了分离的成骨胎盘贴壁细胞(OPAC)、OPAC群和包含OPAC的细胞群，其中OPAC存在于绒毛膜中并从中分离。在某些实施方案中，OPAC不是从绒毛膜裙分离的(无绒毛的)。OPAC显示一种或多种干细胞或多能细胞特征(例如，显示干细胞或多能细胞的相关标记，在培养中在未分化状态复制至少10-20次，分化成代表三个胚层至少之一的成体细胞等)，而且可以附着到组织培养底物上(例如，组织培养塑料制品例如组织培养皿或多孔板表面)。本专利技术进一步提供了在骨缺损的治疗和骨相关癌症例如多发性骨髓瘤的治疗中使用OPAC的方法，以及使用OPAC来降低、停止或反转与多发性骨髓瘤相关或由其引起的骨量损失的方法。在一方面，本专利技术提供了分离的0PAC，即分离的成骨胎盘贴壁细胞，其附着在组织培养塑料制品上，是成骨的，而且是从不具有绒毛膜裙的绒毛膜分离的(无绒毛的)。OPAC 不是本领域已知和了解的滋养层、细胞滋养层、胚胎干细胞、或胚胎生殖细胞。在一个实施方案中，OPAC是分离的⑶200_或⑶200dim细胞，例如从绒毛膜但不是从绒毛膜裙分离的那些(无绒毛的)。在一个具体的实施方案中，OPAC是成骨的。在一个具体的实施方案中，OPAC是骨保护素(OPG)分泌阳性的，这通过例如流式细胞术检测。骨保护素是成骨细胞分泌的诱饵受体，其与破骨细胞分化因子(ODF)特异性结合并抑制破骨细胞成熟。因此，OPAC促进骨形成并降低破骨细胞介导的骨量损失。在另一个具体的实施方案中，OPAC不表达RANKL(核因子κ B配体的受体活化剂；参见例如，GenBank登录号 ΑΑΒ86811. 1)，这通过例如定量RT-PCR检测。RANKL是激活破骨细胞的蛋白，破骨细胞参与骨吸收。因此，OPAC不促进骨吸收。在另一个具体的实施方案中，OPAC是⑶200_或⑶200dim， 且⑶105+的。在另一个具体的实施方案中，OPAC是α-平滑肌肌动蛋白(参见例如，GenBank 登录号ΝΡ_001604)表达阴性、RANKL阴性、或NG2 (神经/神经胶质细胞2硫酸软骨素蛋白聚糖)表达阳性的，这通过例如抗体染色确定。在某些实施方案中，与CD200+(非dim)组织培养塑料制品贴壁胎盘干细胞(NG2在其中的染色是集中的)相比，所述NG2在OPAC中的染色是弥漫的。在另一个具体的实施方案中，OPAC是α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL 阴性、NG2的表达阳性且骨保护素分泌阳性的。在另一个具体的实施方案中，OPAC显示可诱导的碱性磷酸酶活性，这通过例如比色测定确定。在一个更加具体的实施方案中，OPAC是 ⑶200_或⑶200dim，⑶105+的，这通过流式细胞术检测，而且α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200_或⑶200dim，⑶105+的，而且α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性，并显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个具体的实施方案中，OPAC是SSEA3+或SSEA4+的。在一个更加具体的实施方案中，OPAC是SSEA3+且SSEA4+的。在另一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200_、 ⑶105+、SSEA3+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200_、⑶105+、SSEA4+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL 阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200_、⑶105+、SSEA3+、SSEA4+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在某些实施方案中，当胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时，0PAC、 OPAC群或包含OPAC的细胞群在所述群中促进矿化基质的形成。本专利技术也提供了包含OPAC的细胞群，其中该细胞群是⑶200_或⑶200dim的。因此，在一个实施方案中，本专利技术提供了包含OPAC的分离的细胞群，其中所述细胞群不是从绒毛膜裙分离的(无绒毛的)，而且其中所述细胞群是⑶200_或⑶200-的。在一个具体的实施方案中，该细胞群基本由OPAC组成。在一个具体的实施方案中，所述细胞群是成骨的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是⑶200_且⑶105+的，这通过流式细胞术检测。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是⑶200dim且⑶105+的，这通过流式细胞术检测。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、NG2的表达阳性、或骨保护素分泌阳性的。在某些实施方案中，与⑶200+(非dim)组织培养塑料制品贴壁胎盘干细胞(NG2在其中的染色是集中的)相比，所述NG2在OPAC中的染色是弥漫的。在另一个实施方案中，所述细胞群是RANKL表达阴性的，这通过例如定量RT-PCR检测。 在另一个实施方案中，所述细胞群是α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、NG2的表达阳性且骨保护素分泌阳性的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在一个更加具体的实施方案中，所述群是⑶200—、⑶105+或⑶200dim、⑶105+的，而且满足α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性中的一项或多项。在一个更加具体的实施方案中，所述细胞群是⑶200_、⑶105+或⑶200dim、⑶105+的；是α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL 阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性的；并显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是SSEA3+或SSEA4+的。在又一个实施方案中，所述群细胞是SSEA3+且SSEA4+的。在又一个实施方案中，所述细胞群是⑶200_、 ⑶105+或⑶200dim、⑶105+的、SSEA3+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个更加具体的实施方案中，所述细胞群是⑶200—或⑶200dim的，是⑶105+且SSEA4+的，而且同时α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．治疗患有多发性骨髓瘤的个体的方法，其包括对所述个体施用分离的成骨胎盘贴壁细胞（ＯＰＡＣ），其中所述ＯＰＡＣ是从绒毛膜获得的，而且附着到组织培养塑料制品上，而且其中所述ＯＰＡＣ是ＣＤ２００阴性的或是ＣＤ２００ｄｉｍ的，且ＣＤ１０５阳性的，而且其中所述施用可检测地降低、停止所述多发性骨髓瘤的一种或多种症状的进展或改善所述多发性骨髓瘤的一种或多种症状。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US61/090,8982008年8月22日1.治疗患有多发性骨髓瘤的个体的方法，其包括对所述个体施用分离的成骨胎盘贴壁细胞(OPAC)，其中所述OPAC是从绒毛膜获得的，而且附着到组织培养塑料制品上，而且其中所述OPAC是⑶200阴性的或是⑶200^的，且⑶105阳性的，而且其中所述施用可检测地降低、停止所述多发性骨髓瘤的一种或多种症状的进展或改善所述多发性骨髓瘤的一种或多种症状。2.如权利要求1所述的方法，其中所述OPAC是SSEA3+或SSEA4+的。3.如权利要求1所述的方法，其中所述OPAC是SSEA3+且SSEA4+的。4.如权利要求1所述的方法，其中当所述OPAC和所述⑶200+胎盘干细胞在生长培养基中培养时，与相等数目的⑶200+ 贴壁胎盘干细胞相比，所述OPAC以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BMP3 (骨形态发生蛋白3)、CDHl 1、COLIOAl、C0L14A1、C0L15A1 ,DMPl (牙本质基质酸性磷蛋白1)、DSPP (牙本质涎磷蛋白)、ENAM(釉蛋白)、FGFR2 (成纤维细胞生长因子受体2) ,MMPlO (基质金属蛋白酶10 (基质分解素2))、TGFB3、和/或TGFBRl中的一个或多个，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当所述OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时，与相等数目的CD200+贴壁胎盘干细胞相比，所述OPAC以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AMBN(成釉蛋白(釉基质蛋白))、BMP2 (骨形态发生蛋白2、、CALCR(降钙素受体)、 CDH11、COL11A1、COL14A1、COL15A1、C0L2A1、CSF2、CSF3、DMP1、DSPP、ENAM、FGF3、GDF10 (生长分化因子10)、IGFl (胰岛素样生长因子1)、ITGAl (整联蛋白，α 1 (CD49))、ITGA2 (整联蛋白，0 2(0>498))、匪 10、匪 8(基质金属蛋白酶8(中性粒细胞胶原酶))、匪 9、06 六(血小板源生长因子A)、SMADl、TGFB3、TGFBRl和/或TGFBR2 (转化生长因子β，受体2)中的一个或多个，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述OPAC在可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括⑶Hll、C0L14A1、C0L15A1、 DMP1、DSPP、ENAM、MMP10、TGFB3和/或TGFBRl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当所述OPAC和所述胎盘干细胞在生长培养基中培养时，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AHSG(a-2-HS-糖蛋白)、ALPL(碱性磷酸酶，肝脏 /骨/肾脏)、EGF (表皮生长因子)、FLTl (fins相关的酪氨酸激酶1 (血管内皮生长因子/ 血管通透性因子受体))、IGF2、ITGA2、ITGAM(整联蛋白，α M(补体成分3受体3亚基))、 SCARBl (清道夫受体B类，成员1)、S0X9 (SRY (性别决定区Y)-盒9)、TNF、TffISTl (扭曲同系物1 ；以前称作睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂3，尖头并指趾畸形3)、VCAM1 (血管细胞粘附分子1)和/或VDR(维生素D(l，25-二羟基维生素受体)中的一个或多个， 或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当所述OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BGN(双糖链蛋白多糖)、C0L11A1、C0MP (软骨寡聚基质蛋白)、FGF1和/或VCAMl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达VCAMl，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和所述干细胞在生长培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 BMP4、CALCR、CD36、CDHl 1、COL12A1、COL14A1、COL15A1、C0L3A1、C0L5A1、DMP1、DSPP、FLT1、 MSX1、PDGFA、TGFB3、TGFBR1和/或TUFTl (釉丛蛋白1)中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和干细胞在成骨培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AMBN、 CALCR、COL14A1、COL15A1、CSF3、DMP1、DSPP、ITGA1、ITGA2、MMP10、MMP9、MSX1、PDGFA、TGFB1、 TGFB3、TGFBRl和/或TGFBR2中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较高水平表达一个或多个基因， 其中所述一个或多个基因包括 CALCR、COL14A1、COL15A1、DMP1、DSPP、MSX1、PDGFA、TGFB3 和 /或TGFBRl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和间充质干细胞在生长培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 ALPL, BGLAP (骨 Y -羧基谷氨酸(gla)蛋白)、IGF2、ITGA2、ITGAM、SCARBl 和 / 或 SOXl 中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和所述干细胞在成骨培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 AHSG, ALPL, BGLAP, BGN、BMP3、BMP5、CD36、C0L10A1、COLlIAl、C0L12A1、C0L2A1、C0L4A3、 COMP, EGF、FGFU FGFR2、IGF2、MMP8、PHEX(磷酸盐调节的肽链内切酶同系物，X连锁)、 RUNX2 (runt-相关转录因子2)、SCARB 1、SOXl、VCAMl和/或VEGFB中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；或不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达一个或多个基因， 其中所述一个或多个基因包括ALPL、BGLAP、IGF2、SCARBl和/或S0X9中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。5.如权利要求1所述的方法，其中所述OPAC 与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 BMP4、BMP6、CD36、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、 C0L5A1、CSF2、CTSK、FGF2、FGFRl、FLTl、ITGAl、MINPPl、MMP9、MSXl、PDGFA,SERPINH1、TGFB3 和TGFBRl中的一个或多个，其中所述OPAC和所述间充质干细胞经历了相等数目的传代；或与相等数目的成纤维细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一3个或多个基因包括 BMP4、BMP6、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、C0L5A1、FLTl、 IGF1R、ITGAl、MINPPl、PDGFA、SERPINH1、SMAD3、TGFBl、TGFB2、TGFB3、TGFBRl、TNF、TUFTl、 VCAMl和VEGFA中的一个或多个，而且其中所述成纤维细胞经历了相等数目的传代。6.如权利要求1所述的方法，其中所述OPAC分泌一种或多种蛋白核心蛋白聚糖、表皮调节素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL_2Ra、IL-17RC、IL-27、潜在的 TGF-β 结合蛋白 1 (LTBP)、 NCAM-I、Smad4、TFPI、TGF- β R1/ALK5 或 ΤΙΜΡ-2。7.如权利要求1所述的方法，其中所述OPAC分泌蛋白核心蛋白聚糖、表皮调节素、 IGFBP-3、IGFBP-6、IL_2Ra、IL-17RC、IL-27、潜在的 TGF-β 结合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-U Smad4、TFPI, TGF- β R1/ALK5 禾口 ΤΙΜΡ—2。8.如权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种症状是骨痛、骨细胞损害、贫血、或肾衰竭。9.如权利要求1所述的方法，包括对所述个体施用至少lX1080PAC/kg。10.分离的成骨胎盘贴壁细胞(OPAC)，其中所述细胞是从绒毛膜获得的，而且附着到组织培养塑料制品上，而且其中所述细胞是⑶200阴性的或是⑶200dim的，且是⑶105阳性的。11.如权利要求9所述的分离的细胞，其是SSEA3+或SSEA4+的。12.如权利要求9所述的分离的细胞，其是SSEA3+且SSEA4+的。13.如权利要求9所述的分离的细胞，其中所述细胞生产骨保护素。14.如权利要求9所述的分离的细胞，其中所述细胞额外地是α-平滑肌肌动蛋白表达阴性、RANKL表达阴性、NG2表达阳性、骨保护素表达阳性的，或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。15.如权利要求13所述的分离的细胞，其中所述细胞额外地是α-平滑肌肌动蛋白表达阴性、RANKL表达阴性、NG2表达阳性、骨保护素表达阳性的，并显示可诱导的碱性磷酸酶活性。...

【专利技术属性】
技术研发人员：萨沙·道恩·阿布拉门逊，
申请(专利权)人：人类起源公司，
类型：发明
国别省市：US