亲合层析用填充剂制造技术

亲合层析用填充剂是含有包含交联性乙烯基单体和含环氧基的乙烯基单体的单体混合物的共聚物的多孔性母粒子，配体结合在所述多孔性母粒子上，所述多孔性母粒子具有使该多孔性母粒子所含的环氧基开环而得到的开环环氧基。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及亲合层析用填充剂，尤其是涉及结合有对于抗体纯化有用的特定配体的亲合层析用填充剂。
技术介绍
所谓亲合层析，是将与以分离和纯化作为目的的物质特异性结合的物质(配体) 固定在不溶性载体上，使用填充了这样获得的配体固定化载体的柱的层析，可用于例如，蛋白质、核酸等生物体相关物质的分离和纯化(日本特开平6481638号公报)。作为亲合层析用填充剂，以琼脂糖凝胶为代表的糖链的交联粒子得到广泛使用， 但是它存在着一旦高速流过含有分离和纯化对象分子的溶液，粒子就发生变形，柱压力增高，分离和纯化的时间效率差这样的问题。另一方面，作为能够以较高流速使用的亲合层析用填充剂，有AppliedBiosystems 公司制造的POROS (商品名)。该填充剂使用以疏水性的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物作为主要成分的母粒子。该填充剂存在着被认为主要由母粒子引起的发生非特异吸附的情况，而且，如果以高流速使用，就会有结合容量降低的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供至今还没有的即使是在高流速下的分离和纯化，也可以维持高配体结合容量的亲合层析用填充剂。本专利技术的一个方式涉及的亲合层析用填充剂是含有包含交联性乙烯基单体和含环氧基的乙烯基单体的单体混合物的共聚物的多孔性母粒子，配体与前述多孔性母粒子结合，前述多孔性母粒子具有通过使该多孔性母粒子所含的环氧基开环而得到的开环环氧基。在上述亲合层析用填充剂中，可以含有取代或非取代的2，3_ 二羟基丙基作为前述开环环氧基。上述亲合层析用填充剂中，前述配体可以是含有蛋白质A的免疫球蛋白结合结构域的蛋白质。此时，前述蛋白质A的免疫球蛋白结合结构域，可以是选自A结构域、B结构域、C 结构域、D结构域、E结构域、和Z结构域中的至少1种。上述亲合层析用填充剂中，前述配体可以是用下述通式(1)表示的免疫球蛋白结合蛋白质。R-R2.....(1)(式中，R表示含有4 20个组氨酸连续的部位的由4 300个氨基酸构成的氨基酸序列，R2表示至少含有一个蛋白质A的免疫球蛋白结合结构域的由50 500个氨基酸构成的氨基酸序列(在此，R2与R结合的末端是免疫球蛋白结合结构域的末端))。此时，上述通式(1)中，R-可以是下述通式(2)表示的基团。R1T-.....(2)(式中，R1表示含有4 20个组氨酸连续的部位的由4 100个氨基酸构成的氨基酸序列(在此，R1中，前述组氨酸连续部位的末端与r结合)，r表示包含TEV结构域的由7 200个氨基酸构成的任意的氨基酸序列)。而且，此时，前述配体是，上述通式(1)中，R表示的氨基酸序列和R2表示的氨基酸序列中的至少一个可以含有结构域t的配体，所述结构域t包含选自赖氨酸、精氨酸和半胱氨酸中的1种氨基酸且由1 50个氨基酸构成。此外，上述亲合层析用填充剂中，前述配体可以是下述通式C3)表示的免疫球蛋白结合蛋白质。R2-R.....(3)(式中，R表示含有4 20个组氨酸连续的部位的由4 300个氨基酸构成的氨基酸序列，R2表示至少含有1个蛋白质A的免疫球蛋白结合结构域的由50 500个氨基酸构成的氨基酸序列(在此，R2与R结合的末端是免疫球蛋白结合结构域的末端))。此时，上述通式(3)中，-R可以是下述通式⑷表示的基团。-r-R1.....(4)(式中，R1表示含有4 20个组氨酸连续的部位的由4 100个氨基酸构成的氨基酸序列(在此，R1中，前述组氨酸连续的部位的末端与r结合)，r表示包含TEV结构域的由7 200个氨基酸构成的任意的氨基酸序列)。而且，此时，前述配体可以是，上述通式(3)中，R表示的氨基酸序列和R2表示的氨基酸序列中的至少一个含有结构域t的配体，所述结构域t包含选自赖氨酸、精氨酸和半胱氨酸中的1种氨基酸且由1 50个氨基酸构成。本专利技术中，所谓“蛋白质”，是指具有肽结构单元的所有分子，它是包括了，例如，对天然型蛋白质的部分片段或天然型蛋白质的氨基酸序列进行了人工改变后的变异体的概念。而且，所谓“免疫球蛋白结合结构域”表示单独具有免疫球蛋白结合活性的多肽的功能单元，所谓“免疫球蛋白结合蛋白质”表示与免疫球蛋白具有特异的亲和性，且含有“免疫球蛋白结合结构域”的蛋白质。而且，本专利技术中，所谓“TEV结构域”，是指被TEV(烟草蚀刻病毒，Tobacco Etch Virus)蛋白酶识别的切断部位。根据上述亲合层析用填充剂，其是含有包含交联性乙烯基单体和含环氧基的乙烯基单体的单体混合物的共聚物的多孔性母粒子，配体与前述多孔性母粒子结合，前述多孔性母粒子具有通过使该多孔性母粒子所含的环氧基开环而得到的开环环氧基，因此在亲合层析中，即使在高流速下的分离和纯化中，也可以维持高配体结合容量，而这在以前是无法实现的。附图说明图1是表示本专利技术的合成例1中制备的免疫球蛋白结合蛋白质(SPAK、 SPAC, SPAKK, SPATK)的氨基酸序列的图。图2是表示本专利技术的合成例1中制备的免疫球蛋白结合蛋白质(SPAI、 SPA3K、SPA-His-C, SPA-His-Ν)的氨基酸序列的图。图3是说明分别插入于3种表达载体(pETM-11、pETM-10和pET29)中的编码本专利技术的合成例1中涉及的免疫球蛋白结合蛋白质的DNA片段的构成的图。具体实施例方式本专利技术的一个实施方式涉及的亲合层析用填充剂是含有包含交联性乙烯基单体和含环氧基的乙烯基单体的单体混合物的共聚物的多孔性母粒子，配体与多孔性母粒子结合，多孔性母粒子具有通过使该多孔性母粒子所含的环氧基开环而得到的开环环氧基。1.亲合层析用填充剂1. 1.多孔性母粒子1. 1. 1.构成本实施方式中涉及的亲合层析用填充剂(多孔性母粒子)优选主要由含有交联性乙烯基单体和含环氧基的乙烯基单体的单体混合物的共聚物构成。作为上述交联性乙烯基单体，合适的是芳香族聚乙烯基单体、脂肪族聚乙烯基单体，作为芳香族聚乙烯基单体，优选二乙烯基苯，并且作为脂肪族聚乙烯基单体，优选多元 (甲基)丙烯酸酯化合物。作为多元(甲基)丙烯酸酯化合物，可以列举乙二醇二(甲基) 丙烯酸酯、二乙二醇二(甲基)丙烯酸酯、三乙二醇二(甲基)丙烯酸酯、四乙二醇二(甲基)丙烯酸酯、丙二醇二(甲基)丙烯酸酯、二丙二醇二(甲基)丙烯酸酯、三丙二醇二(甲基)丙烯酸酯、四丙二醇二(甲基)丙烯酸酯、1，4_ 丁二醇二(甲基)丙烯酸酯、1，6_己二醇二(甲基)丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三(甲基)丙烯酸酯、季戊四醇四(甲基)丙烯酸酯等，特别优选三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、乙二醇二甲基丙烯酸酯、乙二醇二丙烯酸酯。上述含环氧基的乙烯基单体是分子中含有环氧基的乙烯基单体，可以列举，例如， (甲基)丙烯酸缩水甘油酯、α-(甲基)丙烯基-ω-缩水甘油基聚乙二醇等(甲基)丙烯酸酯类；乙烯基苄基缩水甘油醚等芳香族乙烯基化合物等，特别优选甲基丙烯酸缩水甘油酯、乙烯基苄基缩水甘油醚。作为本实施方式涉及的亲合层析用填充剂，优选使用含有优选20 50重量％的交联性乙烯基单体与50 80重量％的含环氧基的乙烯基单体的共聚物的多孔质有机聚合物粒子。在此，交联性乙烯基单体如果不到单体总量的20重量％，填充剂的强度就差，因此会存在高流速下，填充剂被破坏，柱压力上升的情况，另一方面，交联性乙烯基单体本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．亲合层析用填充剂，其是含有包含交联性乙烯基单体和含环氧基的乙烯基单体的单体混合物的共聚物的多孔性母粒子，配体与所述多孔性母粒子结合，所述多孔性母粒子具有通过使该多孔性母粒子所含的环氧基开环而获得的开环环氧基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：田守功二，
申请(专利权)人：JSR株式会社，
类型：发明
国别省市：JP