本发明专利技术涉及结合血凝素并中和甲型流感病毒的至少两种不同组１亚型或至少两种不同组２亚型感染的抗体及其抗原结合片段。本发明专利技术还涉及编码这样的抗体及抗体片段的核酸、产生这样的抗体及抗体片段的永生Ｂ细胞和培养的单浆细胞以及结合这样的抗体及抗体片段表位。此外，本发明专利技术还涉及所述抗体、抗体片段和表位在筛选方法中以及在甲型流感病毒感染的诊断、治疗和预防中的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】中和抗甲型流感病毒抗体及其用途本专利申请要求分别于2008年7月25日和2009年5月27日提交的美国临时专利申请第61/083，838号和第61/181，582号的权益，上述专利申请公开的全文以引用的方式并入本文，如同在本文中记载一样。
技术介绍
对甲型流感病毒应答的中和抗体被认为对给定的病毒亚型是特异性的。存在16 种通过血凝素(HA)定义的甲型流感亚型。16种HA，即H1-H16可分为两组。组1由H1、H2、 H5、H6、H8、H9、Hll、H12、H13 和 H16 亚型组成，组 2 包括 H3、H4、H7、H10、H14 和 H15 亚型。 尽管所有的亚型都存在于鸟类中，但主要是H1、H2和H3在人类中引发疾病。H5、H7和H9亚型在人类中引起散发性严重感染并可能引起新的大流行病。Hl和H3病毒不断地进化形成新的变体，这种现象称为抗原漂移。由此，对以前的病毒应答而产生的抗体对于新的漂移病毒保护性很差或没有保护性。其结果是每年必须要制备新疫苗以用于抵抗预计要出现的Hl 和H3病毒，这个过程很昂贵且并不总是有效。这同样适用于H5流感疫苗的制备。事实上， 还不清楚基于越南或印度尼西亚甲型流感病毒分离体的现有H5疫苗是否能抵抗未来的流行性H5病毒。由于这些原因，非常期望拥有诱导能够中和所有甲型流感病毒亚型及其每年的变体(2006年，由Gerhard等人进行了综述)的广谱中和抗体的疫苗。此外，广谱中和异亚型抗体也可用在预防和治疗中。已经表征了识别甲型流感病毒的抗体。M2的抗体(只在被感染细胞上表达，而不在感染性病毒上表达的一种不变的小蛋白质)已经显示出一些体内保护效果，这可能是通过用NK细胞或胞毒性T细胞靶向感染的细胞并加以破坏来实现的。但是，HA是中和抗体的首要目标。其包含约500个氨基酸的大胞外域，其被宿主来源的酶裂解以产生通过二硫键连接的两个多肽。较大的N-末端片段(HAl，320至330个氨基酸)形成包含受体结合位点和大部分被病毒中和抗体识别的决定簇的膜远端的球状域。较小的C-末端部分(HA2，约180 个氨基酸)形成将球状域锚定在细胞或病毒膜的茎状结构。亚型之间的序列同源性程度在 HAl多肽(亚型之间34%-59%同源性)中小于HA2多肽(51%-80%的同源性)。最保守的区是裂解位点周围的序列，特别是HA2N-末端的11个氨基酸，其称为为融合肽，在所有的甲型流感病毒亚型中均是保守的。这个区的部分以表面环暴露于HA前体分子(HAO)，但是当HAO裂解为HA1/HA2时，则变得不可接近。总之，在不同的HA亚型中，特别是在HA1-HA2 连接区和在HA2区中都存在保守区。但是，这些区对于中和抗体可能是不易接近的。目前在确认中和一种以上甲型流感病毒亚型的抗体中只取得了有限的成功，并且其中和宽度狭窄且效力低。Okuno等人(1993)用流感病毒A/Okuda/57 (H2N2)免疫小鼠并分离了单克隆抗体(C179)，该单克隆抗体(C179)结合HA2中的保守构象表位，并在动物模型中体外和体内中和组1的H2、H1和H5亚型甲型流感病毒(Okuno等人，1993 ；Smirnov等人，2000 ；Smirnov 等人，1999)。最近，Gioia等人描述了接种了传统季节性流感疫苗的某些个体患者的血清中存在H5W病毒的中和抗体(Gioia等人，2008)。作者认为中和活性可能是由于神经氨酸酶 (Ni)的抗体。可是没有分离出单克隆抗体，也没有表征靶表位。目前尚不清楚血清抗体是否中和其它甲型流感病毒亚型。尽管经过了数十年的研究，但是还没有投入市场的广谱中和或抑制甲型流感病毒感染或缓解由甲型流感病毒引发的疾病的抗体。因此，需要鉴定抵御多种甲型流感病毒亚型的新抗体。
技术实现思路
本专利技术部分地基于从接种了季节性流感疫苗的个体分离结合HA并中和多于一种甲型流感病毒亚型感染的自然产生的人单克隆抗体以及本专利技术的抗体所结合的新表位。因此，在本专利技术的一个方面中，本专利技术包括一种中和多于一种选自组1或组2的甲型流感病毒亚型的感染的抗体或其抗原结合片段。在本专利技术的一实施方案中，本专利技术包括中和甲型流感病毒的至少两种不同组1亚型或至少两种不同组2亚型感染的抗体或其抗原结合片段。在本专利技术的另一实施方案中， 本专利技术包括一种抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个互补决定区(⑶幻序列，该序列与 SEQ ID NO:1-6、17-22、33-38、49-53、64-68、78-82、93-98、109-114、125-127或133-135 中的任一个有至少95%的序列同一性，其中所述抗体中和甲型流感病毒。在本专利技术的另一实施方案中，本专利技术包括选自以下序列的重链⑶Rl :SEQ ID NO 1、SEQ ID NO :17, SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :78、SEQ ID NO :93,SEQ ID NO :109、SEQ ID NO :125 和 SEQ ID NO :133 ；选自以下序列的重链 CDR2 :SEQ ID NO :2,SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :65、SEQ ID NO :79、SEQ ID NO :94, SEQ ID NO :110、SEQ ID NO :1 禾口 SEQ ID NO :134 ；以及选自以下序列的重链 CDR3 :SEQ ID N0:3、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO :35, SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :66, SEQ ID NO :80, SEQ ID NO :95、SEQ ID NO :111, SEQ ID NO :127 禾口 SEQ ID NO : 135，其中所述抗体中和甲型流感病毒。在本专利技术的另一实施方案中，本专利技术包括抗体或其抗原结合片段，其包括选自以下序列的轻链CDRl =SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :52, SEQ ID NO :81、SEQ ID NO :96 禾口 SEQ ID NO :112 ；选自以下序列的轻链 CDR2 :SEQ ID NO 5、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :67、SEQ ID NO :97 和 SEQ ID NO :113 ；和选自以下序列的轻链 CDR3 :SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :22, SEQ ID NO :38, SEQ ID NO :53, SEQ ID NO :68,SEQ ID NO :82、SEQ ID NO :98禾口SEQ ID NO :114，其中所述抗体中和甲型流感病 在本专利技术的另一实施方案中，本专利技术包括一种抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含含有SEQ ID N0:13的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID N0:14的氨基酸序列的轻链可变区；或含有SEQ ID NO :29的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO 30 的氨基酸序列的轻链可变区；或含有SEQ ID NO :45的氨本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种中和甲型流感病毒的至少两种不同组１亚型或至少两种不同组２亚型感染的人抗体或其抗原结合片段。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·兰扎韦基亚，
申请(专利权)人：生物医学研究所，
类型：发明
国别省市：CH
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