【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
耐热的菌类(真菌类)广泛分布于自然界，在蔬菜、水果等农作物上繁殖，并污染 以这些农作物为原料的饮食品。然而，耐热的菌类与通常的其他菌类相比具有高的耐热性。 例如即使对酸性饮料进行加热灭菌处理，耐热菌类也可以生存、繁殖，从而成为造成发霉的 原因。因此，耐热菌类被作为引起重大事故的重要有害菌而被戒备。作为从加热灭菌处理后的饮食品中检测出来的污染事故的原因菌的主要的耐 热菌类，已知有属于丝衣霉(Byssochlamys)属、篮状菌(Talaromyces)属、新萨托菌 (Neosartorya)属、以及半内果菌(Hamigera)属的耐热菌类。与形成子囊孢子的其他耐热 菌类相比，属于上述4个属的菌类具有非常高的耐热性，加热灭菌后的生存可能性也较高。 另一方面，上述4个属之外的耐热菌类，由于可以在通常的灭菌条件下被杀灭，所以只要不 出现灭菌不良等的情况，造成污染事故的可能性是很低的。因此，为了防止饮食品以及这些 原材料中的耐热菌类引起的事故，检测和鉴别属于这4个属的耐热菌类是特别重要的。此外，在调查危害事故发生时的事故原因以及对策上，事故的原因菌的鉴定也是 必要的。因此，如果可以鉴别上述4个属的耐热菌类的话，就可以更加迅速地检测和鉴别事 故的原因菌。另一方面，作为现有的耐热菌类的检测和鉴别方法，有将被检测体在PDA培养基 等上培养然后进行检测和鉴别的方法。但是，此方法直到能够确认菌落需要大约7天。而 且，由于菌种的鉴定是基于菌的特征器官的形态进行的，所以直到能够确认形态学上的特 征又需要大约7天的培养。因此，如果用此方法，耐热菌...
【技术保护点】
１．一种检测选自丝衣霉（Ｂｙｓｓｏｃｈｌａｍｙｓ）属、篮状菌（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）属、新萨托菌（Ｎｅｏｓａｒｔｏｒｙａ）属、烟曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）以及半内果菌（Ｈａｍｉｇｅｒａ）属中的至少一种耐热菌类的方法，其是包括下述１）～４）中的至少一个工序的耐热菌类的检测方法，１）用下述（Ａ－Ｉ）或者（Ａ－ＩＩ）的核酸对属于丝衣霉（Ｂｙｓｓｏｃｈｌａｍｙｓ）属的菌类进行鉴定的工序，（Ａ－Ｉ）含有序列号２４或者２５记载的碱基序列或者其互补序列的核酸；（Ａ－ＩＩ）含有在序列号２４或者２５记载的碱基序列中使一个或者数个碱基缺失、置换或者添加而得到并且能够用于检测属于丝衣霉属的菌类的碱基序列或者其互补序列的核酸；２）用下述（Ｂ－Ｉ）或者（Ｂ－ＩＩ）的核酸对属于篮状菌（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）属的菌类进行鉴定的工序，（Ｂ－Ｉ）含有序列号２６～３１中任一个记载的碱基序列或者其互补序列的核酸；（Ｂ－ＩＩ）含有在序列号２６～３１中任一个记载的碱基序列中使一个或者数个碱基缺失、置换或者添加而得到并且能够用于检测属于篮状菌属的菌类的碱基序列或者其互补序列的核酸；３）用下述（Ｃ－Ｉ）...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】JP2008-1399992008年5月28日1.一种检测选自丝衣霉(Byssochlamys)属、篮状菌(Talaromyces)属、新萨托菌 (Neosartorya)属、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)以及半内果菌(Hamigera)属中的至 少一种耐热菌类的方法，其是包括下述1) 4)中的至少一个工序的耐热菌类的检测方法，1)用下述(A-I)或者(A-II)的核酸对属于丝衣霉(Byssochlamys)属的菌类进行鉴定 的工序，(A-I)含有序列号M或者25记载的碱基序列或者其互补序列的核酸；(A-II)含有在序列号M或者25记载的碱基序列中使一个或者数个碱基缺失、置换 或者添加而得到并且能够用于检测属于丝衣霉属的菌类的碱基序列或者其互补序列的核 酸；2)用下述(B-I)或者(B-II)的核酸对属于篮状菌(Talaromvces)属的菌类进行鉴定 的工序，(B-I)含有序列号沈 31中任一个记载的碱基序列或者其互补序列的核酸；(B-II)含有在序列号沈 31中任一个记载的碱基序列中使一个或者数个碱基缺失、 置换或者添加而得到并且能够用于检测属于篮状菌属的菌类的碱基序列或者其互补序列 的核酸；3)用下述(C-I)或者(C-II)的核酸对属于新萨托菌(Neosartorya)属的菌类以及/ 或者烟曲霉(Aspergillus fumigatus)进行鉴定的工序，(C-I)含有序列号32 34或者83 86中任一个所记载的碱基序列或者其互补序列 的核酸；(C-II)含有在序列号32 34或者83 86中任一个所记载的碱基序列中使一个或者 数个碱基缺失、置换或者添加而得到并且能够用于检测属于新萨托菌属的菌类以及/或者 烟曲霉的碱基序列或者其互补序列的核酸；4)用下述(D-I)或者(D-II)的核酸对属于半内果菌(HamiRera)属的菌类进行鉴定的工序，(D-I)含有序列号35记载的碱基序列或者其互补序列的核酸；(D-II)含有在序列号35记载的碱基序列中使一个或者数个碱基缺失、置换或者添加 而得到并且能够用于检测属于半内果菌属的菌类的碱基序列或者其互补序列的核酸。2.如权利要求1所述的耐热菌类的检测方法，其特征在于，为了进行鉴定，决定被检测菌的微管蛋白基因区或者^S rDNA的D1/D2区域以及 ITS区域的碱基序列，确认在该区域的碱基序列中是否含有所述的(A-I) (D-II)中任一 个的碱基序列。3.如权利要求1所述的耐热菌类的检测方法，其特征在于，为了进行鉴定，标记与所述(A-I) (D-II)中任一个核酸在严格条件下进行杂交的检 测用寡核苷酸，使得到的检测用寡核苷酸与从检测对象物中提取的核酸在严格条件下进行 杂交，测定经杂交的检测用寡核苷酸的标记。4.如权利要求1所述的耐热菌类的检测方法，其特征在于，为了进行鉴定，基因扩增由所述(A-I) (D-II)中任一个核酸中的一部分或者全部区 域构成的核酸，确认有无扩增产物。5.如权利要求4所述的耐热菌类的检测方法，其特征在于，采用聚合酶链反应(PCR)法进行所述扩增反应。6.如权利要求4所述的耐热菌类的检测方法，其特征在于，采用环介导等温扩增(LAMP)法进行所述扩增反应。7.如权利要求4 6中任一项所述的耐热菌类的检测方法，其特征在于，所述1) 4)的工序分别是下述1-1) 4-1)的工序，1-1)将能够与以下区域杂交的寡核苷酸用作核酸引物进行基因扩增反应的工序，其 中，所述区域为所述(A-I)或者(A-II)的核酸中的区域，且满足下述(1) (4)这4个条 件(1)含有属于丝衣霉(Bvssochlamvs)属的菌类所固有的基因的碱基序列以大约10个 碱基连续出现的区域，(2)寡核苷酸的GC含量在30% 80%，(3)寡核苷酸的自退火的可能性低，(4)寡核苷酸的Tm值在55°C 65°C ；2-1)将能够与以下区域杂交的寡核苷酸用作核酸引物进行基因扩增反应的工序，其 中，所述区域为所述(B-I)或者(B-...
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