产生富含分泌型免疫球蛋白的乳组分的方法技术

本发明专利技术涉及通过对含有Ｓ－ＩｇＡ的乳进行分级而产生富含分泌型ＩｇＡ（Ｓ－ＩｇＡ）的组合物的方法。该组合物可特别用于在有以下治疗需要的个体中治疗和／或预防诸如胃肠道、泌尿生殖道、呼吸道、鼻腔或者口腔的粘膜表面的感染和／或炎症、治疗和／或预防肥胖症及相关疾病或者治疗和／或预防食物过敏症。简单而言，本发明专利技术提供使用一个或者多个微孔膜过滤步骤而产生富含分泌型免疫球蛋白Ａ的乳组分的方法。本方法的优选流程涉及脱脂、微孔过滤和通过多个渗滤循环的超滤浓缩。本发明专利技术的方法，除获得了意料不到的高收率之外，还在可量测性、已有乳制品工厂中的应用以及影响Ｓ－ＩｇＡ质量和稳定性的方法参数的可控性方面，提供了特别感兴趣的优势。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及通过对含有S-IgA的乳进行分级而产生富含分泌型IgA(S-IgA)的组 合物的方法。例如，通过将所述组合物合并入药品、食物产品或者美容产品，可将该组合物 特别用于在有以下治疗需要的人或者动物体中，治疗和/或预防诸如胃肠道、泌尿生殖道、 呼吸道、鼻腔或者口腔的粘膜表面的感染和/或炎症、治疗和/或预防肥胖症及相关疾病或 者治疗和/或预防食物过敏症中的一个或者多个。本专利技术特别涉及产生该乳组分的方法， 所述方法包括脱脂、过滤和浓缩步骤。本专利技术还涉及可通过本方法获得的乳组分、含有该乳 组分的产品以及所述产品的用途。
技术介绍
抗体在科学和医学上有很多应用。产生针对靶标的新抗体是非常容易的。对于大 多数应用，抗体由所谓的杂交瘤细胞系产生，所述杂交瘤细胞系来自产生抗体的B细胞与 永生化细胞系的融合。可容易地培养这些杂交瘤细胞并且可以从培养上清收获抗体。产生 抗体的另一个方法是从免疫的动物的血清中收获。家畜繁殖技术是普遍的并且家畜圈养相 对便宜。在几十年前，在家畜的乳腺分泌产物中产生免疫原特异性的抗体已经被证实是可 行的。最初，最佳结果是在初乳中获得的，即分娩幼崽后的雌性产生的最初的乳液。初乳阶 段后，雌性产生的乳在本文被称为成熟乳。初乳是非常特有的产物，其来自乳腺的不同生理 和功能状态。在反刍动物中，初乳和成熟乳之间的主要成分差别在于非常高含量的初乳免 疫球蛋白，其80%-90%是IgG类。成熟乳中的抗体水平基本上低于初乳中所能达到的水平 约 1 个数量级(Hodgkinson et al.，WO 98/54226 ；Hastings，美国专利第 5，017, 372 号)。 因此，最初大部分临床和临床前研究中使用的乳来源的抗原特异性的抗体实际上是初乳来 源的并且主要属于 IgG 类(Tollemar et al.，Bone Marrow Transpl. 23 :283-290(1999)； Bostwick et al.，美国专利第 5，773，000 号；Cordle et al.，美国专利第 5，260，057 号)。免疫球蛋白A(IgA)是在粘膜免疫中起关键作用的抗体。在分泌物中发现IgA处 于特定形式，被称为S-IgA，其包含通过所谓的J链连接的IgA单体的二聚体，并且还包含 分子量约为435kDa的所谓的分泌组分。在IgA的分泌形式中，IgA是粘液分泌物中主要的 免疫球蛋白，所述粘液分泌物包括眼泪、唾液、人初乳/成熟乳、胃肠液、阴道液和来自前列 腺和呼吸上皮的分泌物。因此，它们可见于来自胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道和口腔/鼻腔 的粘膜部位，并且作用于防止病原体定居。分泌型IgA可以经受诸如消化道和呼吸道的恶 劣环境，从而提供针对在机体分泌物中繁殖的微生物的保护。这些性质使S-IgA成为在用 于改善和/或保持健康，特别是治疗和/或预防诸如胃肠粘膜和呼吸道粘膜以及皮肤粘膜 的粘膜表面的感染和/或炎症的产品应用中优选的免疫球蛋白。这些产品的实例包括肠配 方，例如婴儿配方、临床营养、功能性食物和保健食品；药物制剂、皮肤制剂和喷雾制剂。因 此，投入大量的努力在反刍动物乳中产生增高水平的(分泌型)IgA是不足为奇的。US 6，974，573讨论了通过粘膜通道或者气道使家畜对于抗原超免疫并且随后将 该抗原通过乳腺或者乳腺上淋巴结给予的方法。US 6，974，573讨论了直接使用这样获得的乳或者进一步加工用于纯化抗原特异性(IgA)抗体。对诸如乳的复合组合物进行过滤分级来生产富含免疫球蛋白的组分在本领域已 有描述，但是绝大多数这类现有技术公开内容涉及IgG分离，由于IgG是牛乳分泌产物中的 主要免疫球蛋白，所以这也是不足为奇的。US 2004/0167320讨论了使用改进的切向流过滤 方法从复合混合物中分离目的分子的方法和装置。根据US 2004/0167320所述，合适的目 的分子包括免疫球蛋白。该美国专利申请包括用渗滤从原乳中纯化IgGl的实例，其中详细 描述了所述方法的条件和参数。然而，从乳中分离更大的S-IgA免疫球蛋白还未被公开。US 2003/0059512讨论了分离乳和乳产物的方法和装置，其涉及一个或者多个交 叉流过滤步骤。特别是，US 2003/0059512提示将脱脂乳分离为富含酪蛋白的保留物组分和 缺少酪蛋白的透过物组分，使所透过物流经随后的交叉流过滤单元，所述交叉流过滤单元 适于形成富含诸如白蛋白和免疫球蛋白的大分子的保留物组分，随后例如使用层析法或者 交叉流过滤法分离并纯化该保留物组分，从而形成白蛋白和免疫球蛋白。US 2003/0059512 没有包括任何关于制备富含IgA的乳组分的具体信息或实施例，更未涉及S-IgA。US 4，644，056讨论了通过加工初乳或者乳来制备乳或者初乳免疫球蛋白溶液的 方法。按照该文件，初乳被酸化到PH值为4. 0-5. 5并且在平均孔径为0. 1-0. 2 μ m的过滤 单元中进行交叉流过滤，随后通过在分离限为5-80kDa的另一过滤单元中进一步交叉流过 滤的手段将低分子量组分去除。该文实施例讨论了使用该过滤单元的酸化初乳的渗滤，产 生了主要含有IgG的溶液，尽管使用免疫电泳法也发现了溶液中IgA、S-IgA和IgM的存在。 然而，US 4，644，056公开的方法根本不足以用于从(非初乳或者成熟的)乳中高收率地有 效制备富含S-IgA的组分。基于在IgA和IgG之间以及S-IgA和IgG之间存在分子量和形状上的巨大差异的 事实，将现有技术中IgG分离方法应用于分离S-IgA根本不能直接适用，在需要高效操作和 足够的收率，即使该方法适于工业规模生产时就更不可能。从上文可以清楚知道，现有技术 并不能满足可用于有效产生富含S-IgA的(非初乳)乳组分的方法的需要。本专利技术的目的 是提供这样的方法。专利技术概述本专利技术人已经成功开发了满足上述需要的方法。简单而言，本专利技术提供使用一个 或者多个微孔膜过滤步骤来产生富含分泌型免疫球蛋白A的乳组分的方法。因此，按照本 专利技术方法获得的浓缩乳组分适于合并入药剂、食品产品或者美容产品中，而且也考虑到其 他下游工序。本方法的优选流程涉及脱脂、微孔过滤和通过多个渗滤循环的超滤浓缩。本 专利技术人发现，本专利技术方法在这些操作之前不需要将乳酸化。本方法不需要任何类型涉及对 免疫球蛋白有害的高温的操作。正如在下文的实施例中将详细说明的，本方法容易地允许收率高达最初存在于乳 中的S-IgA的75 %及更高，尤其可高达85 %。本领域技术人员应当理解，在优选方面中，本 专利技术涉及加工具有高抗原特异性S-IgA含量的乳，例如按照上文所述的粘膜超免疫家畜的 方法中获得的乳。本专利技术的方法，除获得了意想不到的高收率之外，在可量测性、已有乳制品工厂中 的应用以及影响S-IgA质量和稳定性的方法参数的可控性方面，还提供了特别有益的优 势。附图说明图1 按照本专利技术的一个实施方案产生分泌型IgA(S-IgA)乳组分的完整方法的流 程图，包括乳脱脂装置⑴、第一贮存箱⑷、微孔过滤单元(6)、第二贮存箱(10)、超滤单元 (11)、喷雾干燥装置(12)和水源(8)。在流程图中，(2)表示UF透过物流，(3)表示MF保 留物流，(7)表示MF透过物流本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．产生富含分泌型ＩｇＡ（Ｓ－ＩｇＡ）的乳组分的方法，所述方法包括：通过在低于５５℃的温度下从乳中分离脂肪而将一定量的ｐＨ超过５．５的原乳的脂肪含量降低到低于０．５ｗｔ％的值；使用平均孔径范围为０．１－０．４５μｍ的多孔膜将所述ｐＨ超过５．５的低脂肪乳进行微孔过滤，产生含有Ｓ－ＩｇＡ的透过物和富含酪蛋白的保留物；以及浓缩所述微孔过滤透过物，产生富含Ｓ－ＩｇＡ的乳组分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：查尔斯·玛丽亚·休伯特·赫恩斯戈恩斯，
申请(专利权)人：温氏健康有限公司，
类型：发明
国别省市：BS