利用非天然核苷酸扩增ＤＮＡ的过程制造技术

这个公开的发明专利技术讲述通过模板和引物与ＤＮＡ聚合酶和非标准核苷酸的三磷酸的相互作用来扩增寡核苷酸的过程，这里的非标准核苷酸可以形成碱基配对并且具有标准的沃森－克里克几何结构，但是，非标准核苷酸碱基对之间的氢键模式不同于标准的碱基对Ａ：Ｔ和Ｇ：Ｃ之间的氢键模式。因此，本发明专利技术涉及核苷酸类似物及其衍生物，当它们被嵌入到ＤＮＡ和ＲＮＡ中时，增加可复制的核苷酸数目超出天然ＤＮＡ和ＲＮＡ中的四种核苷酸。本发明专利技术还涉及到聚合酶将非标准核苷酸的三磷酸类似物和衍生物嵌入寡核苷酸中，更具体地说，聚合酶和非标准核苷酸的三磷酸支持聚合酶链反应（ＰＣＲ），包括ＰＣＲ产品中含有多个非标准核苷酸单位。本发明专利技术中提供的例子表明这一过程使用６－氨基－５－硝基－３－（１′－β－Ｄ－２′－脱氧呋喃型）－２（１氢）－吡啶酮来实施非标准“小碱基”的给－给－受（ｐｙＤＤＡ）氢键模式，和２－氨基－８－（１′－β－Ｄ－２′－脱氧呋喃型）－咪唑［１，２－α］－１，３，５－三嗪－４（８氢）－烷来实施“大碱基”的受－受－给（ｐｕＡＡＤ）氢键模式。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

【技术保护点】
一个扩增寡核苷酸序列的过程，这一过程包括上述的寡核苷酸序列与一个正向的嵌合引物和一个反向的嵌合引物在水溶液中的接触，这其中，正向嵌合引物的核苷酸序列与被扩增的寡核苷酸３′－端一个区域的序列是互补的，反向嵌合引物的核苷酸序列与被扩增的寡核苷酸５′－端一个区域的序列是相同的，同时正向和反向嵌合引物与被扩增的寡核苷酸接触的序列的５′－端均含有一个独特的寡核苷酸标记序列，该标记序列中包含至少一个非标准的核苷酸，该非标准的核苷酸的碱基选自图１中所示的碱基结构，将上述被扩增的寡核苷酸与正向和反向嵌合引物组成的混合物与酶和三磷酸核苷作用，此处的酶包括ＤＮＡ聚合酶，ＲＮＡ聚合酶，和逆转录酶，该酶能够接受和复制含有非标准核苷酸的嵌合引物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：史蒂文·埃尔伯特·奔纳，
申请(专利权)人：史蒂文·埃尔伯特·奔纳，
类型：发明
国别省市：US