人源化抗人干扰素－α抗体制造技术

本发明专利技术提供可用于人类治疗应用的人源化抗人ＩＦＮ－α单克隆抗体。优选的抗体是鼠抗体ＡＣＯ－１和ＡＣＯ－２的人源化形式及其变体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抗人干扰素α (IFN-α)的人源化抗体及其在治疗或预防人类患者的 多种疾病和紊乱中的应用。
技术介绍
基于许多不同的研究，干扰素a (IFN-a)是据信与大量自身免疫病有关的细胞 因子。尽管系统性红斑狼疮(SLE)患者通常没有可检测到的血清IFN-a水平，他们似乎具 有清楚的IFN-a基因标签。另外，通过用SLE患者血清处理DC诱导树突细胞(DC)成熟可 以被抗-IFN-α抗体抑制。也已证明具有SLE表型的新西兰黑(NZB)鼠中IFN-a/β受体 的敲除导致接近正常的表型(Santiago-Raber 等人·，J Exp Med. 2003 ； 197 (6) 777-88)。因此提示抗IFN-α抗体可以作为中和该细胞因子的活性的工具，单独或联合地 用于治疗这些自身免疫病。识别宽范围的不同IFN-a亚型的特异性鼠抗体(AC0-1至 AC0-6)如作为W020060086586公布的国际专利申请所述产生和表征。但是，鼠抗体不适合 用于人类，因为它们具有免疫原性，因此希望产生其中将鼠CDR移植到人支架抗体上的人 源化抗体。但是，人源化抗体与鼠亲本抗体相比通常具有功能缺陷，例如，较低的亲和力和 /或稳定性和/或不希望的免疫原性。人源化抗体的这些缺陷在有些情况下可能通过进行 一个或几个回复点突变来补偿。通常希望不进行或只进行极少的回复点突变，因为太多回 复突变的百分比倾向于导致不希望的低稳定性和/或不希望的程度的免疫原性。因此希望 提供具有希望的生物学性质如保持人源化抗-IFN-α抗体对大量IFN-α亚型的亲和力和 效价的安全且稳定的人源化抗-IFN-α抗体。因此本领域需要在例如稳定性、特异性、安全性、免疫原性等特征方面具有理想的 特征的人源化抗-IFN-α抗体。此外，本领域也需要有效的生产这样的抗体的方法。
技术实现思路
第一方面，本专利技术涉及特异性结合人干扰素-a (IFN-a)的人源化抗体或其抗 原结合片段，该人源化抗体是鼠抗体AC0-1或AC0-2或其组合的人源化形式，包含比根据 Kabat的鼠互补决定区(CDR)更少的供体氨基酸残基。另一方面，本专利技术进一步涉及特异性结合IFN-α的人源化抗体或其抗原结合片 段，其中所述抗体能够结合IFN-a亚型A、2、B2、C、F、G、H2、I、Jl、K、4a、4b和WA，但不结合 亚型1或D，并且其中所述抗体包含比根据Kabat的非人CDR更少的供体氨基酸残基。本专利技术进一步涉及获得这样的抗体的方法以及这样的抗体在治疗目的方面的应 用和包含这样的抗体的组合物。本专利技术的抗体可能适用于治疗各种炎性疾病。附图说明图1显示显示用于人源化(hz =人源化的)的鼠AC0-1VH㈧和VL⑶序列的分析，其中遮罩(mask)以阴影文本显示，Kabat⑶R以粗体显示，小鼠序列与人种系序列的差 异以下划线文本显示，潜在的体细胞超突变残基以下划线粗体文本显示，潜在的回复突变 残基以阴影下划线文本显示。AC0-1VH = SEQ ID NO 1 ；人种系VH1_46/JH4 = SEQ IDNO 2 ；hzACO-lVH = SEQ ID NO 3 ；AC0-1VL = SEQ ID NO 4 ；人种系 VKIII_L6/JK2 = SEQ ID NO 5 ；hzACO-lVL = SEQ ID NO :6。图2显示AC0-1和AC0-2VH(A)和VL(B)序列之间的比对，以及相应的小鼠种系序 列。AC0-2VH = SEQ ID NO 7 ；小鼠种系 J558. 33/D_/JH3_l = SEQ ID NO 8 ；AC0-2VL = SEQ ID NO 9 ；小鼠种系 ae4/JK4_l = SEQ ID NO :10。图3显示为引入hzACO-1内而选择的AC0-2残基的位置。图4显示在CPE试验中除对IFN- α D和IFN- α 1以外，hzACO-Ι对检测的所有干 扰素亚型的保护效果的抑制。图5显示通过报道基因(RG)分析，hzACO-Ι对12个IFN- α种的抑制。将每个抗 体浓度值标准化，并计算4次重复的平均值。数据表示为平均值+/_标准误差。采用 软件计算最佳拟合S形反应曲线。所有数据集的R2值均高于0. 98 (除了未进行曲线拟合 的IFN- α D以夕卜)ο图 6 显示使用 IFN- α A(A)或 IFN- α F (B)，hzACO-Ι 与具有 AC0-2-衍生突变 A93V 的hzACO-Ι变体的RG分析比较。数据计算如图5所述进行。图7显示在不含添加剂的情况下，hzACO-Ι和变体在pH 3. 5 (A)、4. 5 (B)和5. 5 (C)时的转变温度。图8显示通过X-射线结晶学确定的与0^-0 8结合的1!^0)-明油片段链(H，L) 的结构。图 9 显示对于 IFNARl 和 IFNAR2 的 IFN- α 8 结合表位(Quadt-Akabayov S. R.等 人.Protein Sci. 15，2656-2668，2006 和 RoismanL. C 等人.J. Mol. Biol. 353，271-281， 2005)，如IFN-α 8序列下方的彩色方框所示。灰色方框所示的残基在所有IFN-α亚型之 间部分保守，而黑色方框所示的残基完全保守。采用4人距离截值，IFN-α 8上的hzACO-1 结合表位以IFN-a 8氨基酸序列上方的“*”表示。图10显示小鼠ACO-ImAb与hzAC0_l及其两种变体在RG分析中的比较。一种变体 是携带完整CDRH2的人源化AC0-1 (命名为hzACO-l-kabat CDRH2)，而hzAC0_l如实施例2 所述用较短的CDRH2构建。另外，该图显示另外一种为与IFN-α s(hzAC0-lY32E，T30R)相 互作用而通过合理的设计优化的突变hzACO-Ι。如图所示，在抑制5种不同的代表性IFN- α 亚型方面比较这四种重组mAb变体。图11显示以人IgGl、IgG2和IgG4同种型表达的hzAC0_l的蛋白质稳定性研究。 在组氨酸缓冲液中孵育5周后通过HPLC测定聚集。图12显示51Cr释放试验，说明hzAC0_lIgG4、IFN- α及其不同组合在不同效应细 胞靶细胞比值(Ε Τ)下缺乏ADCC。细胞+单独的PBMC而没有IFN-α pr hzAC0_l确定 背景裂解，而Triton-X 100显示了最大裂解。包括Rituxan作为阳性对照，其在所有E T 比时均诱导可检测的细胞裂解。图13显示通过ELISA进行的补体结合研究。表达为IgG4的hzAC0_l当结合到 IFN-α时不能固定补体。作为阳性对照，hzACO-Ι与抗-IgG4pAb交叉结合，并且检测到清楚的C4与抗-IgG4的剂量依赖性结合。专利技术详述本专利技术部分基于具有适合治疗人类患者的性质的抗-IFN-α抗体，所述患者患有 IFN-α -相关病症或疾病，例如，狼疮疾病或紊乱，例如，SLE ；移植物抗宿主病；1型糖尿病， AIDS,自身免疫性甲状腺炎，牛皮癣，幼年型皮肌炎和舍格伦综合征。这些抗体一般基于鼠 AC0-1和/或AC0-2抗体的人源化形式。已经确定AC0-1和AC0-2能够阻断13种重组IFN- α亚型以及病本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人源化抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人干扰素－α（ＩＦＮ－α），该人源化抗体为鼠抗体ＡＣＯ－１或ＡＣＯ－２或其组合的人源化形式，包含比根据Ｋａｂａｔ的鼠互补决定区（ＣＤＲ）更少的供体氨基酸残基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·A·斯文森，
申请(专利权)人：阿哥斯医疗公司，
类型：发明
国别省市：US