本发明专利技术涉及一种从魔芋飞粉中制备神经酰胺的方法，其特征在于包括如下操作步骤：a)神经酰胺的粗提：以魔芋飞粉为原料，用乙醇溶液提取，然后用石油醚萃取；b)硅胶柱层析纯化：将硅胶湿法装柱，湿法上样，用石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱；c)中压C18键合硅胶ODS柱层析纯化：湿法装柱，湿法上样；用乙醇-水为洗脱剂进行梯度洗脱，干燥得纯度95％以上神经酰胺。该工艺生产成本低，适合工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
魔芋(konjac)属于被子植物门、单子叶植物纲、天南星科，是具有球茎的多年生草本植物。据统计，我国有魔芋属植物沈种，其中14种为我国特有，目前魔芋总产量占全世界的三分之一，且每年都在不断增加。魔芋为喜阴、喜湿、怕热、不耐寒、怕渍水的作物，生长环境要求特殊，全世界范围内适宜种植的区域极为有限。在我国，其主要分布于湖南、四川、 湖北、云南、贵州、台湾等地。湖北省恩施州夏无酷暑、冬少严寒、土壤微酸性且富含硒元素， 自然条件得天独厚，是种植魔芋的理想地之一。全州总种植规模达到60万亩，其中商品基地45万亩，种芋基地15万亩，年实现种植产值25亿元，魔芋精(微、纯)粉以及饮料、食品涂料、可溶可食薄膜总加工产值达75亿元，年销售各类魔芋产品在25，000吨以上。目前， 我国的魔芋精粉加工方法大体上可分为干法和湿法，魔芋飞粉是魔芋精粉生产过程中产生的副产物，占加工前魔芋粉质量的35% 45%。由于魔芋飞粉含有异味以及抗营养因子， 且葡甘聚糖的含量低，制约了其在食品、医药等领域的应用，仅湖北省每年就有约85%的魔芋飞粉未被利用。然而，魔芋飞粉中含有大量的有效成分，大约含有50%的总糖、20%的蛋白质、 0. 5%的脂肪、2. 5%的纤维素、7%的矿物质以及0. 15% 0. 20%的神经酰胺。神经酰胺， 即N-脂酰神经鞘胺醇，是鞘磷脂的重要组成单位，是生物体内一类重要的功能物质，也是生物体内重要的脂质第二信使。神经酰胺具有抗肿瘤、诱导人结肠癌细胞凋亡、诱导人鼻咽癌细胞凋亡、抗肝毒性、降血脂、降血糖等药理作用，以及减肥、对皮肤有保湿、抗衰老、美白等作用，广泛应用于医药、保健品以及日用品中。神经酰胺制品有天然和化学合成两类，在医药领域主用是天然的神经酰胺。以前， 一些发达国家主要从牛脑中提取丰富的神经酰胺，但是自1986年“疯牛病”发生以来，动物性神经酰胺的安全性广受质疑，动物来源的神经酰胺制品已被植物性神经酰胺制品所取代。天然神经酰胺主要从大豆、大米、小麦、酵母、魔芋等植物中提取，但是米糠和小麦中的神经酰胺含量仅0. 01 % 0. 02 %，魔芋精粉中的含量约为0. 026 %，而魔芋飞粉中的神经酰胺的含量为0. 15% 0. 20%，是神经酰胺提取的重要原料，具有很高的开发前景。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是提供。本专利技术，其特征在于包括如下操作步骤(a)神经酰胺的粗提以魔芋飞粉为原料，用乙醇溶液提取，提取完毕后过滤，浓缩，回收乙醇，然后将浓缩液用石油醚萃取2次，合并石油醚相，回收石油醚得棕色的神经酰胺浸膏，即神经酰胺样品I;(b)硅胶柱层析纯化将硅胶湿法装柱，并用初始洗脱剂平衡层析柱；神经酰胺样品I用初始洗脱剂溶解，湿法上样；用石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，分步收集流出液，用TLC检测流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得神经酰胺样品 II ；(c)中压C18键合硅胶ODS柱层析纯化将C18键合硅胶湿法装柱，用加压装置进行压缩，并用初始洗脱剂平衡层析柱；将上述的神经酰胺样品II用初始洗脱剂进行溶解，湿法上样；用乙醇-水为洗脱剂进行梯度洗脱，分步收集流出液，用TLC检测流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得神经酰胺样品III ；经HPLC-ELSD检测，神经酰胺样品 III的纯度可以到达95%以上。本专利技术，其特征在于包括如下操作步骤(a)神经酰胺的粗提以魔芋飞粉为原料，用浓度为75% 95%乙醇溶液提取，料液比为固液比魔芋飞粉乙醇溶液1 3 5，提取的温度为60 80°C，提取时间为1 2h ；提取完毕后过滤，浓缩，回收乙醇，然后将浓缩液用60 90°C馏分石油醚萃取2次，搅拌时间为0.5 1.5h，静置时间为0.5h，料液比为体积比浓缩液石油醚1 2 4，合并石油醚相，回收石油醚得棕色的神经酰胺浸膏，即神经酰胺样品I ；(b)硅胶柱层析纯化将300 400目硅胶活化，活化温度为105 110°C，活化时间为1 ai ；硅胶湿法装柱后，用初始洗脱剂平衡层析柱；神经酰胺样品I用初始洗脱剂溶解，湿法上样；上样量为1 5g粗品/IOOg硅胶；，然后用石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱剂石油醚-乙酸乙酯的体积比分别为95 5、85 15,75 25,60 40、 40 60，其中95 5和85 15两种洗脱剂使用量各为1BV，后三种洗脱剂的使用量各为 2BV,分步收集流出液，洗脱速度为2 4BV/h，用TLC检测流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得神经酰胺样品II ；(c)中压Cw键合硅胶ODS柱层析纯化称取适量的Cw键合硅胶用初始流动相进行浸泡，并且搅拌，待硅胶中没有气泡时，湿法装入中压色谱柱中；然后用加压装置进行压缩， 使压缩后的C18键合硅胶柱在正常流速下的工作压力为5 20bar，并用初始洗脱剂平衡层析柱；将上述的神经酰胺样品II用初始洗脱剂进行溶解，湿法上样，上样量为0. 1 0. 5g 样品/IOOgCw键合硅胶；用乙醇-水为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱剂乙醇-水的体积比分别 ^ 90%,75%,60%,每种洗脱剂的量为2 2. 5BV,洗脱速度为1 1. 5BV/h,用TLC检测流出液，分步收集流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得神经酰胺样品III ； 经HPLC-ELSD检测，神经酰胺样品III的纯度可以到达95%以上。本专利技术提供了一种从魔芋飞粉中制备高纯度神经酰胺的方法，是利用魔芋飞粉为原料，通过硅胶柱层析技术联合中压C18键合硅胶柱层析技术制备高纯度的神经酰胺。1、神经酰胺的粗提以魔芋飞粉为原料，用75% 95% (ν/ν)乙醇于60 80°C搅拌提取1 2h，料液比为1 3 1 5，提取完毕后过滤，收集滤液，滤液转入酒精回收装置，回收酒精至浓缩液中的酒精度为0 20%，然后往浓缩液中加入2 4倍体积的60 90°C石油醚进行萃取，搅拌0. 5 1. 5h后静置分层，收集醚相，萃取2次，合并醚相，将醚相浓缩至浸膏状， 得棕色的神经酰胺样品I ；2、硅胶柱层析纯化神经酰胺2.1硅胶的活化称取300 400目的硅胶于105 110°C活化1 2h。2. 2湿法装柱将活化好的硅胶放入容器中，并加入适量的石油醚，顺着固定方向搅拌，待硅胶中没有气泡时，湿法装入中压色谱柱中。并用初始洗脱剂平衡层析柱。2. 3湿法上样和洗脱将上述的神经酰胺粗品I用初始流动相溶解后湿法上样，上样量为1 5g粗品 /IOOg 硅胶。然后用石油醚-乙酸乙酯(95 5，85 15，75 25，60 40,40 60, ν/ν) 为洗脱剂进行梯度洗脱，95 5和85 15两种洗脱剂使用量各为1BV，后三种洗脱剂的使用量各为2BV，分步收集流出液，洗脱速度为2 4BV/h，用TLC检测流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得神经酰胺样品II。硅胶层析柱经甲醇再生后可重复使用。3、中压C18键合硅胶(0此)柱层析纯化神经酰胺3. 1湿法装柱称取适量的C18键合硅胶用初始流动相进行浸泡，并且搅拌，待硅胶中没有气泡时，湿法装入中压色谱柱中。然后用加压装置进行压缩，使压缩后的C18键合硅胶柱在正常流本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种从魔芋飞粉中制备神经酰胺的方法，其特征在于包括如下操作步骤：（ａ）神经酰胺的粗提：以魔芋飞粉为原料，用乙醇溶液提取，提取完毕后过滤，浓缩，回收乙醇，然后将浓缩液用石油醚萃取２次，合并石油醚相，回收石油醚得棕色的神经酰胺浸膏，即神经酰胺样品Ｉ；（ｂ）硅胶柱层析纯化：将硅胶湿法装柱，并用初始洗脱剂平衡层析柱；神经酰胺样品Ｉ用初始洗脱剂溶解，湿法上样；用石油醚－乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，分步收集流出液，用ＴＬＣ检测流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得神经酰胺样品ＩＩ：（ｃ）中压Ｃ１８键合硅胶ＯＤＳ柱层析纯化：将Ｃ１８键合硅胶湿法装柱，用加压装置进行压缩，并用初始洗脱剂平衡层析柱；将上述的神经酰胺样品ＩＩ用初始洗脱剂进行溶解，湿法上样；用乙醇－水为洗脱剂进行梯度洗脱，分步收集流出液，用ＴＬＣ检测流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得神经酰胺样品ＩＩＩ；经ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ检测，神经酰胺样品ＩＩＩ的纯度可以到达９５％以上。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：向极钎，程新华，龙澜，吴昊，张亮，李亚杰，杨永康，殷红清，郭光耀，
申请(专利权)人：恩施清江生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：42
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