本发明专利技术涉及可用作药物载体的壳聚糖微球的制备。本发明专利技术采用自组装法制备壳聚糖微球。首先用10-溴癸酸甲酯对羟甲香豆素进行改性，制备含有羧基的羟甲香豆素，接着将其加入壳聚糖的乙酸溶液进行反应，用NaOH调节反应体系的pH为7～9，在丙酮中沉淀出产品。取20～30mg的产品溶于50mL的pH为6～9的PBS缓冲液中，用探针式超声均化仪均化，过滤膜过滤，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。本方法制备工艺简单，成本较低，且制备的纳米粒子无细胞毒性，可用作药物载体。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及可载药壳聚糖微球的制备
技术介绍
甲壳素是地球上储量仅次于纤维素的天然的可再生资源，壳聚糖是其N-乙酰基脱去55%以上而得到的一种碱性多糖。由于壳聚糖具有良好的生物相容性、生物可降解性、 抗菌性、防腐性以及止血和促进伤口愈合等诸多特性，因此壳聚糖在伤口敷料、药物控释系统和组织工程等方面有着良好的应用前景。壳聚糖微球由高分子材料形成的外壳和水或油状内核构成，而药物通常就被聚合物膜包封在此内核层。理想的微球载体可生物降解并且无毒，所具有的特异靶向性使药物被定向释放出来，载体则被生物降解，避免转运过程中药物在其它组织释放而产生副作用或过早被灭活。由于壳聚糖具有可被体内多种酶生物降解，降解产物无毒且能被生物体完全吸收等优良特性，是药物缓释的理想载体，因此其作为药物载体材料的研究受到了极大的重视。制备壳聚糖微球的方法主要有乳化交联法、离子凝胶化法、分子自组装法等。有文献报道以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，以Span-80为乳化剂，环己烷为油相，通过乳化交联法制备出分散性及圆整度良好的5-氟尿嘧啶壳聚糖微球。还有文献采取离子交联法利用壳聚糖的游离氨基与多聚磷酸钠阴离子发生分子间或分子内交联反应，制备平均直径为100纳米左右的壳聚糖球状凝胶。乳化交联法制备的纳米粒子粒径较小、球形度好，用作药物载体药物释放周期较长，但此方法常用戊二醛作交联剂，戊二醛具有抗基因毒性，而且蛋白质或多肽也与戊二醛反应，因此这种制备方法对于蛋白类和肽类药物方面的应用很受限制。离子交联法的机理主要是壳聚糖与带负电荷的聚阴离子电解质通过聚电解质大分子的分子内和分子间的静电相互作用而交联形成纳米粒子，这种反应条件温和，易于得到均一粒径的纳米粒且粒径的范围可调整，但由于较弱的离子键作用，使得形成的粒子骨架密度低，用作药物载体的药物主要分布在粒子的表面，药物突释效应严重。分子自组装是指在一定条件下，通过非化学键的相互作用，分子间自发组合，形成一类具有明确、稳定结构的且有某种特定性能的分子聚集体。分子自组装法在制备过程中不需要添加乳化剂、表面活性剂等有机溶剂，可减少载体的毒性；此外该方法工艺简单、成本低，是环境友好型的绿色方法，具有很好的产品开发前景。
技术实现思路
针对离子交联法和乳化交联法的限制，本专利技术的目的在于用自组装法制备可载药壳聚糖微球本专利技术的原理及方法本专利技术以壳聚糖为基体，向壳聚糖链引入疏水性基团，加上壳聚糖链本身具有亲水基团，采用自组装法制备壳聚糖微球。制备本专利技术所述的壳聚糖微球的方法包括如下步骤(1)称取一定量的10-溴癸酸甲酯，羟甲香豆素和碳酸钾，将其溶于丙酮中，40 70°C下搅拌反应5 IOh。(2)将步骤(1)中所得产物与5% NaOH反应，再用HCl酸化，反复用水洗。(3)称取一定量的上述产物，溶于乙醇中，加入EDC和NHS活化羧基0. 池后， 慢慢滴加至溶于2%乙酸的壳聚糖水溶液中，CS EDC NHS = I 1. 2 1.2 1 2 2， 室温下避光反应。(4)用lmol/L的NaOH溶液调反应体系的pH值为7 9，于丙酮中沉淀出产品。(5)取20 30mg的产品溶于50mLpH为6 9的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。本专利技术的优点1.本专利技术提供的制备方法中，不需要加任何交联剂，避免了交联剂潜在的细胞毒性。2.本专利技术提供的制备方法工艺简单，成本较低。 附图说明图1为可载药壳聚糖微球的扫描电镜图具体实施例方式实施例1称取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羟甲香豆素，和0.8g碳酸钾于25mL丙酮中，40°C 下搅拌反应证。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5% NaOH反应，用HCl酸化至体系pH值为3.5，反复用水洗。称取上述产物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 18gEDC和0. llgNHS，磁力搅拌 0.证，活化羧基。称取壳聚糖0. 13g溶于2%的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应Mh。用lmol/L的NaOH溶液调反应体系的pH值为7，于丙酮中沉淀出产品。取20mg的产品溶于50mLpH为6的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后， 得到较为纯净的壳聚糖微球。实施例2称取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羟甲香豆素，和0.8g碳酸钾于25mL丙酮中，40°C 下搅拌反应10h。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5% NaOH反应，用HCl酸化至体系pH值为4.5，反复用水洗。称取上述产物0. 66g，溶于乙醇中，加入0. 3gEDC和0. 18gNHS,磁力搅拌池，活化羧基。称取壳聚糖0. 13g溶于2%的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。 室温下避光反应48h。用lmol/L的NaOH溶液调反应体系的PH值为7，于丙酮中沉淀出产品。取20mg的产品溶于50mLpH为6的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。实施例3称取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羟甲香豆素，和0.8g碳酸钾于25mL丙酮中，40°C下搅拌反应证。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5% NaOH反应，用HCl酸化至体系pH值为3.5，反复用水洗。称取上述产物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 18gEDC和0. llgNHS，磁力搅拌 0.证，活化羧基。称取壳聚糖0. 13g溶于的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应Mh。用lmol/L的NaOH溶液调反应体系的PH值为9，于丙酮中沉淀出产品。取30mg的产品溶于50mLpH为9的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后， 得到较为纯净的壳聚糖微球。实施例4称取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羟甲香豆素，和0.8g碳酸钾于25mL丙酮中，50°C 下搅拌反应5h。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5% NaOH反应，用HCl酸化至体系pH值为4， 反复用水洗。称取上述产物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 3gEDC和0. 18gNHS，磁力搅拌0. 5h， 活化羧基。称取壳聚糖0. 13g溶于2%的乙酸溶液，将活化好的溶液滴到壳聚糖溶液中。室温下避光反应Mh。用lmol/L的NaOH溶液调反应体系的PH值为7，于丙酮中沉淀出产品。 取20mg的产品溶于50mLpH为8的PBS缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。实施例5称取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羟甲香豆素，和0.8g碳酸钾于25mL丙酮中，50°C 下搅拌反应5h。抽滤，旋蒸出产品，再将产品与5% NaOH反应，用HCl酸化至体系pH值为4， 反复用水洗。称取上述产物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 3gEDC和0. 18gNHS，磁力搅拌0. 5h， 活化羧基。称取壳聚糖0. 13本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．可载药壳聚糖微球的制备，其特征在于包括以下步骤：（１）按摩尔比为１∶１∶１称取一定量的１０－溴癸酸甲酯，羟甲香豆素和碳酸钾，将其溶于２５ｍＬ丙酮中，４０～７０℃下搅拌反应５～１０ｈ。（２）将步骤（１）中所得产物与５％ＮａＯＨ反应，再用ＨＣｌ酸化至ｐＨ为３．５～４．５，反复用水洗。（３）按摩尔比为１∶１～１∶２称取一定量的壳聚糖和上述产物，将产物溶于乙醇中，加入ＥＤＣ和ＮＨＳ活化羧基０．５ｈ～２ｈ后，慢慢滴加至１％～２％（ｗ／ｖ）乙酸的壳聚糖水溶液中，室温下避光反应１～２天。（４）用１ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液调反应体系的ｐＨ值为７～９，于丙酮中沉淀出产品。（５）取２０～３０ｍｇ的产品溶于５０ｍＬｐＨ为６～９的ＰＢＳ缓冲液中，将所得溶液用探针式超声均化仪均化，然后通过过滤膜过滤掉沉淀物质，将所得样品进行冻干，反复透析一冻干纯化后，得到较为纯净的壳聚糖微球。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：聂俊，朱晓丹，马贵平，徐娟，
申请(专利权)人：北京化工大学常州先进材料研究院，
类型：发明
国别省市：32
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