本发明专利技术公开了一种高效液相色谱法测定米糠油中谷维素含量的方法，其主要是通过采用反相高效液相色谱法，其色谱条件为：a.色谱柱：C18柱，250×4.6mm，5μm；b.流动相组成：70%乙腈-30%辛烷磺酸钠溶液；c.所用紫外检测器的检测波长：320nm；d.流速：1.0mL/min，进样体积：20μL，柱温：30℃。本发明专利技术可准确测定米糠油中谷维素的含量，方法操作简单、灵敏度高、重现性好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属分析化学领域，涉及。
技术介绍
谷维素主要存在于毛糠油及其油脚中，是一种植物神经调节剂，能有效改善和调节植物神经失调、内分泌平衡障碍及精神失调等症状，并且具有抗高血脂、抑制胆固醇在消化道吸收和抗脂质氧化的作用，能改善调节肠胃神经官能症。米糠油中的谷维素含量测定常用紫外-可见分光光度法检测，在化药部颁标准对其有详细描述，该方法较繁琐，且易受到米糠油萃取液中其它营养成份的干扰，造成谷维素含量测定的重复性差。HPLC是一项高压、高效、高灵敏度的分离技术，可用于分离分析高沸点、相对分子量大、热稳定性差的有机化合物，广泛应用于化学、化工、高分子、生物、食品、医药等领域。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供，从而准确测定其含量，方法操作简单、灵敏度高、重现性好。为了实现上述目的本专利技术采用如下技术方案—种高效液相色谱法测定米糠油中谷维素含量的方法，其特征在于包括以下步骤(1)样品溶液的处理称取0. 08-0. 12g米糠油样品置于容量瓶中，加入15_25mL、 1. 5mol/L KOH的乙醇溶液加塞密封，剧烈振荡25-3 ，置于70_80°C水浴中皂化1_1. 5h，每隔8-ianin振摇一次；(2)待步骤(1)溶液冷至室温后打开瓶塞，加1. 8-2. 2mL超纯水和8_12. OmL正己烷进行萃取操作，密封后剧烈振摇3-^iin，静置，将上层萃取液转移至小烧杯，水层再用正己烷重复萃取3-4次，每次8-12mL，合并上层萃取液；(3)将装有步骤( 合并的上层萃取液的小烧杯放在水浴上挥干正己烷，用色谱纯甲醇溶解残留物，定容于10. OmL容量瓶，过0. 40-0. 50 μ m微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱法测定，得测定数值；(4)配制谷维素标准溶液的标准溶液，并制作标准曲线，将步骤(3)测定数值与标准曲线对比，即得所测米糠油中谷维素含量。所述的高效液相色谱法测定米糠油中谷维素含量的方法，其特征在于所述的实验色谱条件为色谱柱C18柱，250X4. 6πιπι，5μπι;流动相70 %乙腈-30 %辛烷磺酸钠溶液；紫外检测器的检测波长320nm ；流动相流速为1. OmL/min,柱温30°C，进样体积为 20 μ Lo本专利技术的有益效果本专利技术可准确测定米糠油中谷维素的含量，方法操作简单、灵3敏度高、重现性好。 附图说明图1本专利技术实施例2中谷维素标准曲线。图2本专利技术实施例2木糠油中谷维素的色谱图。具体实施例方式实施例1 高效液相色谱法测定米糠油中谷维素含量的方法，包括以下步骤(1)样品溶液的处理称取0.08-0. 12g米糠油样品置于容量瓶中，加入15_25mL 1. 5mol/L KOH的乙醇溶液加塞密封，剧烈振荡25-3 ，置于70_80°C水浴中皂化1_1. 5h，每隔8-ianin振摇一次；(2)待步骤(1)溶液冷至室温后打开瓶塞，加1. 8-2. 2mL超纯水和8_12. OmL正己烷，密封后剧烈振摇3-^iin，静置，将上层转移至小烧杯，水层再用正己烷萃取3-4次，每次 8-12mL，合并上层萃取液；(3)将小烧杯放在水浴上挥干正己烷，用色谱纯甲醇溶解残留物，定容于10. OmL 容量瓶，过0. 40-0. 50 μ m微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱法测定。(4)配制谷维素标准溶液的标准溶液，并制作标准曲线，将步骤( 测定数值与标准曲线对比，即得所测米糠油中谷维素含量。所述的实验色谱条件为色谱柱A8柱，250Χ4.6πιπι(Ι.0.)，5μπι;流动相70%乙腈-30%辛烷磺酸钠溶液(辛烷磺酸钠0. 22g，乙酸铵2mL，加水至IOOOmL)；紫外检测器的检测波长320nm ；流动相流速为1. OmL/min,柱温30°C，进样体积为20 μ L。实施例2 本专利技术的具体实验数据1仪器与试剂仪器皖仪LC3000B型高效液相色谱仪，配UV3000B紫外检测器；色谱分离系统由皖仪LCS3000Q工作站控制试剂谷维素标准品(sigma)，米糠油(市售)，乙腈(色谱纯)，超纯水，正己烷 (色谱纯)，甲醇(色谱纯)1. 5mol/L氢氧化钾的乙醇溶液在氮气保护下，将8. 4g氢氧化钾溶解在无水乙醇中，冷至室温后，用无水乙醇定容至IOOmL辛烷磺酸钠溶液辛烷磺酸钠0. 22g，乙酸铵2mL，加水至IOOOmL谷维素标准溶液取谷维素约20mg精密称定，放置于IOOmL容量瓶中，加甲醇 20mL超声溶解，再用甲醇定容至刻度，配制成浓度为0. 2mg/mL,作为标准品溶液。样品溶液的处理准确称取0. Ig米糠油样品置于50mL容量瓶中，加入 20. OmLl. 5mol/L KOH的乙醇溶液加塞密封，剧烈振荡30s，置于75°C水浴中皂化lh，每隔 IOmin振摇一次，冷至室温后打开瓶塞，加2. OmL超纯水和10. OmL正己烷，密封后剧烈振摇 3min，静置，将上层(正己烷层)转移至250. OmL小烧杯，水层再用正己烷萃取3次，每次 10. OmL，合并上层萃取液。将小烧杯放在水浴上挥干正己烷，用色谱纯甲醇溶解残留物，定容于10. OmL容量瓶。过0.45 μ m微孔滤膜后，在实验设定条件下进行HPLC测定。2含量测定方法的建立2.1波长选择谷维素在在231 士 lnm、291 士 Inm与315 士 Inm的波长处有最大吸收，考虑到米糠油中干扰组分的影响，对不同波长的检测结果比较，选用320nm作为检测波长。2. 2流动相的选择对甲醇-水、乙腈-水-乙酸铵、乙腈-辛烷磺酸钠溶液等作为流动相进行考察， 经过多次试验后，发现采用70%乙腈-30%辛烷磺酸钠溶液为流动相的分离效果最佳。2. 3定性试验利用相对保留时间法及添加标准物质法定性。对照标准溶液、加标样品溶液和样品溶液在相同的色谱条件下的色谱图和相对保留时间。实验结果表明，三种溶液中谷维素的出峰时间是一致的。2. 4标准曲线和相关系数精确量取上述配制的标准溶液1.0,2.0,3.0,5.0,7. OmL,分别放置于IOmL的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，得到20 μ g/mL, 40 μ g/mL, 60 μ g/mL, 100 μ g/mL, 140yg/mL。在上述色谱条件下，浓度由低到高，分别进样6次，记录数据。以平均峰面积 (Y)为纵坐标，浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线，见下附图1。计算线性回归方程Y = 6095. 8X+1862. 7，r = 0. 9997。结果表明谷维素进样量在20-140 μ g/mL范围内线性关系良好。2. 5样品的测定及重复性试验取上述经处理的样品溶液，依照上述的色谱条件，将样品打入高效液相色谱仪中， 其色谱图见附图2。 进样6次后，根据色谱图，记录实验数据，其进样结果见下表1 表1谷维素的峰面积序号123456峰面积263719262643265413260325266120260218平均值263073RSD%0.95试验结果米糠油中谷维素的平均含量为0. 427%, RSD为0. 95%。2. 6稳定性试验取同一米糠油样品依照上述处理方法，制取样品溶液，分别在0，4，8，12，24h进样测定，峰面积的RSD为1. 05%，结果表明样品溶液中谷维素在MH内含量本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种高效液相色谱法测定米糠油中谷维素含量的方法，其特征在于包括以下步骤：（１）样品溶液的处理：称取０．０８－０．１２ｇ米糠油样品置于容量瓶中，加入１５－２５ｍＬ、１．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＯＨ的乙醇溶液加塞密封，剧烈振荡２５－３５ｓ，置于７０－８０℃水浴中皂化１－１．５ｈ，每隔８－１２ｍｉｎ振摇一次；（２）待步骤（１）溶液冷至室温后打开瓶塞，加１．８－２．２ｍＬ超纯水和８－１２．０ｍＬ正己烷进行萃取操作，密封后剧烈振摇３－４ｍｉｎ，静置，将上层萃取液转移至小烧杯，水层再用正己烷重复萃取３－４次，每次８－１２ｍＬ，合并上层萃取液；（３）将装有步骤（２）合并的上层萃取液的小烧杯放在水浴上挥干正己烷，用色谱纯甲醇溶解残留物，定容于１０．０ｍＬ容量瓶，过０．４０－０．５０μｍ微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱法测定，得测定数值；（４）配制谷维素标准溶液的标准溶液，并制作标准曲线，将步骤（３）测定数值与标准曲线对比，即得所测米糠油中谷维素含量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林春铭，尹杨青，
申请(专利权)人：安徽皖仪科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：34
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