用于制备干的、贮存稳定的血小板的方法和组合物技术

本发明专利技术提供用于干燥血小板以得到组合物的方法，该组合物在宽的温度范围内经过长时间贮存是稳定的。本发明专利技术还提供由此得到的组合物和用于此的设备。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

Methods and compositions for the preparation of dry, stored stable platelets

The present invention provides a method for drying platelets to obtain a composition which is stable over a wide temperature range for a long period of time. The present invention also provides compositions obtained therefrom and devices for use in the same.

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及保存血小板的方法。还提供了其使用的方法和由其得到的组合物。还提供了用于保存、贮存和重新悬浮血小板的包装袋。
技术介绍
血小板是参与维持止血的复杂成分的一种。当血管壁受损时，血小板附着到由胶原蛋白、微丝和基膜组成的暴露的表面上。附着的血小板促进了其它血小板的聚集形成一种叫做止血血小板栓子(hemostaticplatelet plug)的聚集体。其结果是激活了提供稳定血小板栓子和减少流血的网络的凝固蛋白质，使组织修复得以开始。血小板被输入病人体内用于许多临床适应症。例如，血小板输入被用于纠正由创伤、疾病或药物引起的功能失常所引起的循环血小板的缺陷或功能失常。那些经受特发性血小板减少症和进行烧蚀化疗的病人进行血小板输入处理。用于多种恶性肿瘤的烧蚀化疗使用的日益增多已经导致对替代血小板疗法的需求不断增加。使用分离的血小板中的主要困难是它们的贮藏寿命短。血小板仅仅被食品与药品管理局(FDA)批准以液体状态在室温下贮存至多五天，在这期间其功能性质很快被破坏。这在民用和军事医学中引起许多后勤上的问题。以液体状态贮存血小板的另一缺点包括需要相当大的贮存空间，并需要在特别制作的可透气塑料的包装袋内保证持续的摇动。一般地，血小板贮存在体积为45至65毫升的悬浮血浆中。最近，有研究报告液体贮存的最小血浆体积为30至50毫升。Home等(1994)，输血(Transfusion)，3439；和Ali等(1994)，输血，3444。但是这种贮存方法仍然需要相当大的空间，而且贮藏寿命不超过大约五天。液体贮存的主要问题是血小板需要贮存在20℃以上，因为在贮存过程中即使短时间暴露到低温下也会导致其体内和体外性质显著改变。Moroff G.等(1994)，输血，34317。因为这种贮存通常还需要在大约20至24℃贮存时在葡萄糖存在下时常摇动血小板，这就为细菌生长提供了最适条件，这是液体血小板贮存的主要问题。为了减小细菌生长的问题，已建议在4℃冷藏贮存或在-80℃冷冻贮存。但是，这需要防止所贮存的血小板冷激活的方法，并且已建议使用抗冻糖蛋白用于保存血小板。Tablin等(1996)，输血医学中的冷冻血小板和血小板替代物，Uniformed Services University of the HealthSciences(Bethesda会议)。但是这种方法需要在治疗应用前彻底洗涤血小板，去除抗冻蛋白质。这个缺点还存在于冷冻血小板的方法中，该方法使用DMSO，在治疗应用前也需要彻底洗涤血小板。Bock等(1995)，输血，53921。通过冷冻干燥贮存血小板的方法已有描述。Bateson等(1994)，输血医学，4213，EPA 0356257。在冷冻干燥过程中血小板被激活，并只能用作血液学标准，而且所保存的血小板的动电性质与相应的新鲜血小板的性质不同。Oliver等，Bethesda会议。关于冷冻干燥血小板的其它努力已得到接近最适的结果。Bode(1993a和b)，第一和第二个三年报告，(分别地)用于输血的血小板干燥贮存的评价生理学完整性与止血功能性。DNR基金No.N00014-92-J-1244。在冷冻干燥前固定血小板可提高其功能，但这些冷冻干燥的血小板需要被冷冻贮存在-80℃。Read等(1995)，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.)，92397。在Bethesda会议上，提出了下列关于血小板的想法。防止出血长达24小时；24小时后20％输入的血小板进入循环；在冷冻箱或冷藏箱外长期贮存；重量轻、耐久并容易运输；使用方便不需离心；非免疫原性；无菌；并且三个月后能够检查供血者。会议同时强调，缺乏评价大多数正在研制的人血小板制品的体内模型及其体内评价的数据。一个例外是Blajchman的网状内皮系统阻断型血小板减少症兔模型(RES-阻断模型)，该模型使得能够在动物模型中评价人血小板的效能。Ali等(1994)，输血，3444，Blajchman等(1994)，英国血液学杂志(Brit.J.Haematol.)，86347。血小板产品也已被提议用作血小板替代物和独立治疗剂。这些产品也比完整的血小板具有更长的贮藏寿命。已通过一些方法制备得到血小板膜泡，并且在兔模型中表现出减少流血时间。Chao等(1996)，输血，36536-542；及美国专利5,428,008和5,332,578。干燥、粉状的血小板膜也已被制备作为免疫吸附剂。EP 141939。实现许多上面列举的目标十分有用。建立一种能够在环境温度下贮存血小板超过五天的方法特别有用。这些标准立即了淘汰了所有目前的液体和低温冷藏的血小板制品。长期贮存干血小板的方法将更具优越性，特别是解决了关于液体贮存时细菌生长的问题。干血小板的贮存与以液体或冷冻的固态血小板贮存相比需要较少的空间，因为其体积减小了，并且不需要在液体状态下连续的摇动，因此会大大节省贮存和运输费用会。这还使得世界上那些不具备足够的贮存和运输设备的地区也能够使用血小板。还可以建立HLA-匹配的干血小板库用于异源免疫病人的治疗中。海藻糖，D-吡喃葡萄糖D-吡喃葡萄糖苷，是一个自然发生的非还原性二糖，最初发现它与某些植物和动物中脱水伤害的防止有关，它们可以没有伤害地脱水并当再水化时复活。已经显示海藻糖可用于蛋白质、病毒和食品在干燥和随后的贮存时防止变性。参考美国专利4,891,319；5,149,653；5,026,566；Blakeley等(1990)，柳叶刀(Lancet)，336854；Roser(1991年7月)，食品科技发展趋势(Trends in Food Sci.and Tech.)，第166-169页；Colaco等(1992)，国际生物技术(Biotechnol.Internat.)，第345-350页；Roser等(1991)，生物药学(BioPharm.)，447；Colaco等(1992)，生物技术(Bio/Tech.)，101007；及Roser等(1993年5月)，新科学家(New Scientist)，第25-28页。在自然界中，海藻糖在各种逆境条件下稳定细胞膜。海藻糖与酵母细胞在完全脱水时的生存能力相关。Eleutherio等(1993)，生物化学与生物物理学通报(Biochim Biophys Acta)，1156263。还已知海藻糖能够稳定冷冻干燥的蛋白质，例如甲醇脱氢酶(Argall和Smith(1993)，国际生物化学与分子生物学(Biochem Mol.Biol.Int.)，30491)，并且为来自酵母的酶提供热保护。Hottiger等(1994)，欧洲生物化学杂志(Eur.J.Biochem.)，219187。海藻糖已被用于稳定冷冻干燥的肌质网和脂质体。Crowe，J.等(1983)，生物化学与生物物理学进展(Arch.Biochem.Biophys.)，220470-484；和Crowe，L.等(1984)，生物化学与生物物理学通报，769141-150。在这两个例子中，将海藻糖加入到膜或脂质体悬浮的溶液中，将混合物冷冻并冷冻干燥。发现海藻糖可以防止膜相转变。海藻糖已被建议用于血小板的冷藏；通过冷冻诱导的膜相转变对这些血小板的充填已被报导本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种保存血小板的方法，包括在有效引入血小板一定数量的内部海藻糖的条件下处理分离的血小板，海藻糖数量在随后的操作中能够有效地保护血小板，以及在一定数量的能够在干燥时有效保护血小板的外部稳定剂存在下干燥血小板。

【技术特征摘要】
US 1997-2-7 60/037,4931.一种保存血小板的方法，包括在有效引入血小板一定数量的内部海藻糖的条件下处理分离的血小板，海藻糖数量在随后的操作中能够有效地保护血小板，以及在一定数量的能够在干燥时有效保护血小板的外部稳定剂存在下干燥血小板。2.根据权利要求1的方法，其中内部海藻糖的浓度为5-150mM。3.根据权利要求1的方法，其中内部海藻糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：VC曼尼斯，DJ菲普斯，LM格兰德芝，BJ罗泽，
申请(专利权)人：扇形支撑剑桥有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]