本发明专利技术公开了一种Kin17基因及其编码的蛋白在乳腺癌诊断、预后观察及治疗中的应用。本发明专利技术通过免疫组化与免疫荧光方法检测分析组织细胞中Kin17的表达水平，发现组织细胞中Kin17蛋白的表达量随乳腺疾病的发展从早期到晚期逐渐提高，可通过对Kin17蛋白的检测来了解肿瘤细胞的增殖程度，帮助及时诊断乳腺癌；同时发现Kin17蛋白在预后较好的乳腺癌患者组织中表达较低，在发生远处转移或死亡的乳腺癌患者组织中高表达，可通过对组织中Kin17蛋白的检测来进行患者预后分析及预警；本发明专利技术通过沉默或降低肿瘤细胞Kin17基因的表达，发现肿瘤细胞的增殖受到抑制，且对抗癌药物阿霉素的敏感性增强，可通过沉默Kin17基因的方法应用于乳腺癌治疗，降低阿霉素用量，从而降低肿瘤细胞耐受性及降低阿霉素造成的细胞毒性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及Kinl7基因及其编码的蛋白Kinl7在乳腺癌诊断、预后分析以及治疗中的应用。
技术介绍
乳腺癌是一种高度异质性的肿瘤，根据大量乳腺癌标本的基因芯片的结果，将乳腺癌分为以下几种Luminal A型——此型乳腺癌的分子标记表达特点为ER+或PR+，HER-2—，多见于早期乳腺癌，该型乳腺癌对内分泌激素治疗敏感，对化疗不敏感，复发风险低，预后较好。Luminal B型——此型乳腺癌的分子标记表达特点为ER+和/或PR+，HER-2+。该型乳腺癌高表达HER-2基因；对内分泌治疗敏感，但对他莫昔芬(Tamoxifen)的反应性较差。Normal breast like型——此型乳腺癌的分子标记特点为ER+，PR+，HER-2-。其基因表达特点为高表达脂肪组织和非上皮细胞的基因，低表达基底上皮和管腔上皮基因。此类型乳腺癌对内分泌治疗较为敏感，预后较好。HER-2阳性型此型乳腺癌的分子标记表达特点为ER_PR_HER-2+。该型乳腺癌虽然对化疗较为敏感，但其预后较差。该型高表达HER-2基因，所以对HER-2抗体的靶向治疗有效。目前临床上采用曲妥珠单抗联合紫杉醇类药物或多西他赛/卡钼化疗，反应性好。Basal-like型(基底样型)此型乳腺癌的分子标记表达特点为ER_PR_HER_2_，持续表达正常乳腺中的肌上皮细胞或是基底细胞基因(如CK5/6、CK14、CK17、EGFR等)。由于该型激素受体及HER-2受体的表达均为阴性，对内分泌治疗及HER-2抗体治疗无效，化疗是唯一的全身性治疗，恶性程度高，肿瘤进展快，且易复发转移，预后最差。通常情况下，ER, PR, HER2表达均为阴性的乳腺癌被称为“三阴性型“(triple negative breast carcinoma，TNBC)，大多数的三阴乳腺癌属于基底样亚型。近年来，乳腺癌的发病率越来越高。2010年，美国癌症协会统计表明，乳腺癌是女性发病率最高( % )，死亡率第二(沈％，仅次于肺癌)的肿瘤。目前在乳腺癌的诊断方面取得了较大的进步，主要的治疗方法有化疗、手术切除病灶、内分泌治疗和分子靶向治疗等，但治疗效果还不尽理想。有6%的乳腺癌患者在确诊时已发生转移；有20-50%的乳腺癌患者在初次确诊后发生转移，发生转移的乳腺癌患者的五年生存率仅有沈％。大约30% 早期乳腺癌患者尽管接受一些辅助治疗，但仍然容易复发。50%的乳腺癌患者对化疗药物产生耐药性。最近出现的癌症靶向治疗，给乳腺癌的合理治疗带来了曙光，是当前乳腺癌治疗领域的研究热点。但在靶向药物的使用过程中会出现耐药性与药物抵抗性，给乳腺癌治疗带来了新的障碍。因此对乳腺癌靶向分子的研究显得越来越为重要。人类Kinl7基因定位于人类第10号染色体的P15-P14。该基因表达的蛋白Kinl7 是一种在物种进化过程中高度保守，而分布广泛的核蛋白，现有的研究结果表明，Kinl7可能参与一个存在于所有类型细胞中的普遍调节机制。Kinl7的蛋白结构呈模块状，有与DNA 和RNA的结合活性。Kinl7在DNA复制、细胞周期、DNA损伤修复等多方面都有重要的功能， 而且有可能与细胞增殖有关。但目前尚未发现有对Kinl7与病理过程，如衰老、肿瘤的关系的研究。
技术实现思路
本专利技术公开了一种Kinl7基因及其编码的蛋白Kinl7在乳腺癌诊断、预后观察及治疗中的应用。所述Kinl7 cDNA序列如序列表400<1>所示，所述Kinl7蛋白序列如序列表400<2>所示。首先，本专利技术通过免疫组化与免疫荧光方法检测分析各种新鲜乳腺癌组织、乳腺疾病标本、乳腺癌细胞系中Kinl7的表达水平。发现Kinl7在癌组织中的表达比正常组织中的表达高、Kinl7在浸润性导管癌(Invasive ductal carcinoma, IDC)组织的血管内皮细胞中高表达、在肿瘤细胞系中高表达、并与反应细胞增殖程度的标记Ki-67共表达，同时发现Kinl7的表达量随乳腺疾病的发展从早期到晚期逐渐提高。上述结果说明Kinl7参与了肿瘤的一些普遍的机制，与肿瘤的细胞增殖相关，可将组织细胞中Kinl7的表达量作为确定肿瘤形成发展程度的一项指标，Kinl7也可应用于制备乳腺癌诊断制剂。其次，本专利技术对65例的IDC患者的临床特征进行了回顾性分析，并对所述IDC患者的预后情况进行随访分析，解析Kinl7的表达与IDC患者的临床特征及预后参数的相关性。研究发现，Kinl7与肿瘤级别及Ki-67表达量呈正相关。另外，Kinl7在预后较好的乳腺癌患者组织中表达较低，在发生远处转移或死亡的乳腺癌患者组织中高表达。因此，可将Kinl7的表达量作为一项指标应用于乳腺癌患者的预后情况分析。最后，本专利技术通过siRNA_Kinl7沉默肿瘤细胞Kinl7表达，或通过Kinl7表达载体在肿瘤细胞中过量表达Kinl7，从而检测不同的Kinl7表达水平对细胞的增殖及分化的影响。研究发现Kinl7的表达与细胞的增殖状况一致，降低肿瘤细胞中的Kinl7表达能抑制乳腺癌细胞的增殖和克隆形成能力，并改变癌细胞的细胞周期；而过表达Kinl7则促进乳腺正常上皮细胞的增殖，同时抑制乳腺正常上皮细胞的分化。说明通过沉默Kinl7 基因可抑制乳腺癌细胞的增殖，此机制与乳腺癌的分型无关，这就为乳腺癌患者，尤其是 ER-PR-HER-2—型患者提供了一个有效的、新的治疗方案。另，本专利技术在不同的Kinl7表达水平下采用阿霉素(Adriamycin，Doxorubicin, ADM)诱发DNA损伤，通过ComtAssay法检测DNA损伤。研究发现，Kinl7表达量的下降加剧了细胞中的DNA损伤，而ADM处理能引起Kinl7表达上调，沉默Kinl7基因后，细胞对DNA 损伤药物更敏感。因此，通过沉默或敲除基因降低Kinl7的表达可以减少ADM的用量，从而降低乳腺癌细胞的耐药性以及降低ADM造成的细胞毒性。说明Kinl7可应用于协助抗癌药物ADM治疗乳腺癌，可与传统抗癌药物一同制备效率更高的治疗乳腺癌的药物组合物。综上所述，说明该Kinl7可用于乳腺癌的辅助治疗。附图说明图lKinl7在几种常见的肿瘤中的表达(a)肺癌(b)结肠癌(c)甲状腺癌(d)胃癌(e)直肠癌⑴睾卵癌(g)盲肠癌(h)肝癌(i)骨肉瘤(j)皮肤癌(k)牙龈癌(1) 口腔腺样囊性癌(m)舌癌；每种肿瘤的染色图片都有100倍代表性区域图及400倍的放大效果图。图a(inl7在乳腺的良性病变、导管内癌、浸润性导管癌标本中的表达图3乳腺癌中癌巢组织与相应的癌旁组织中Kinl7的表达图4Kinl7在乳腺的良性病变、导管内癌、浸润性导管癌标本中的血管内皮细胞中的表达图5乳腺肿瘤细胞与正常细胞对Kinl7的表达比较图6Ki_67在乳腺癌组织中高表达图7Kinl7与Ki_67的在临床IDC标本与MDA-MB-231细胞中的共表达情况图8Kinl7在预后不良的患者标本中的表达；图9转染pEGFP-Nl-Kinl7及pEGFP_Nl到MDA-MB-231细胞后的荧光蛋白表达情况(A)及总蛋白中Kinl7蛋白表达(B)0图10不同浓度血清刺激后的Kinl7表达情况图11转染siRNA_Kinl7后肿瘤细胞中Kinl7表达被本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种Ｋｉｎ１７基因及其编码的蛋白Ｋｉｎ１７在制备乳腺癌诊断制剂中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张雁，曾涛，喻佩，贺姮，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：81
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