一种瑞士乳杆菌H9及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种瑞士乳杆菌(Lactobacillus?helveticus?H9)及其在抗高血压和预防心血管疾病中的应用，包括：菌株分离、菌株鉴定、菌株保存、菌株培养、菌液制备、发酵乳制备、ACE抑制活性菌株筛选；进一步评价了Lactobacillus?helveticus?H9发酵乳对高血压(SHR)和正常血压(WKY鼠)的影响。研究表明，该菌株发酵乳具有较好的体内降血压效应，同时具有起效时间长、不影响血液循环，对正常血压无不利影响等有益效果。

【技术实现步骤摘要】
一种瑞士乳杆菌H9及其用途
本专利技术属于微生物技术应用领域。更具体地，本专利技术涉及一种瑞士乳杆菌 (Lactobacillus helveticus)H9，还涉及所述瑞士乳杆菌H9在制备预防心血管疾病的药物中的用途，还涉及所述瑞士乳杆菌H9在生产保健食品中的用途。
技术介绍
高血压是导致心脏病、脑血管病、肾脏病发生和死亡的最主要危险因素，是一种严重威胁人类健康和影响生活质量，并已给社会造成巨大经济损失的最常见的慢性疾病，而且有着发病年龄不断降低，发病率逐年上升的趋势。临床证明化学合成药物虽有降压作用， 但长期使用具有不同程度的副作用。从而食品来源的抗高血压活性物质研究早已成为防治高血压研究领域的热点。乳酸菌作为公认的安全的微生物，用于多种发酵食品加工，已被人类食用上千年， 而且乳酸菌的免疫调节、抗肿瘤、降血脂和降血压等诸多生理功能已被医界公认。乳酸菌的降血压作用大致来自四个方面①通过乳酸菌的蛋白水解作用，从食物蛋白(如，酪蛋白) 中释放出降血压活性肽；②乳酸菌的菌体成分，如多糖_肽聚糖成分；③部分乳酸菌，尤其是以活菌形式达到肠道的乳杆菌，在肠道内促进机体对部分可以调节血压的矿物质的吸收；④乳酸菌产生的部分胞外多糖。瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)是防治高血压方面，利用最多的微生物之一。CN102098923A公开了能产生大量降血压肽，特别是IPP、VPP和LPP的瑞士乳杆菌的新菌株。该专利技术还涉及含有三肽IPP、VPP和LPP的混合物和瑞士乳杆菌菌株的发酵乳制品。该专利技术还涉及由三肽IPP、VPP和LPP组成的特定的肽混合物以及发酵产物或肽的混合物在食品、食品补充剂或药物组合物中用于降低或预防高血压的用途。CN101420969A公开了一种具有可改善血管内皮相关功能、预防与血管内皮功能相关的各种疾病、或者具有抑制血管内膜增厚的作用、有望具有动脉硬化预防等作用、安全性优异、具有改善血管内皮功能和抑制血管内膜增厚的至少一种作用的药剂；以及动脉硬化预防剂。该专利技术的药剂含有(a)Xaa Pro Pro、或(b)含Xaa Pro Pro的动物乳酪蛋白的水解物或其浓缩物、或(c)通过属于瑞士乳杆菌种的菌株使含有乳蛋白质的原料发酵得到的含IlePro Pro和/或Val Pro Pro的发酵物作为有效成分。目前，还没有文献报道瑞士乳杆菌H9生物学特性、筛选方法与应用。因此，本专利技术人经过大量实验研究，终于完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)H9。本专利技术的另一个目的是提供一种瑞士乳杆菌H9在制备预防心血管疾病的药物中的用途。本专利技术的另一个目的是提供一种瑞士乳杆菌H9在生产保健食品中的用途。本专利技术是通过下述技术方案实现的。本专利技术涉及一种瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)H9。该菌菌株已于2011 年4月28日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心保藏，保藏号为 CGMCC 4811。本专利技术还涉及所述的瑞士乳杆菌H9在制备预防心血管疾病的药物中的用途。根据本专利技术，所述的心血管疾病是冠心病、高血压、运动猝死、心绞痛、急性心肌梗死、冠心病或高血脂。所述的药物是由所述的瑞士乳杆菌H9粉剂与在药学上可接受的载体组成的。在药学上可接受的载体是一种或多种选自在药学上通常使用的填充剂、粘合剂、 润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂或矫味剂的载体。所述药物的剂型是片剂、丸剂、胶囊或微胶囊剂型。本专利技术还涉及本专利技术所述的瑞士乳杆菌H9在生产保健食品中的用途。根据本专利技术，所述的保健食品是含有本专利技术所述瑞士乳杆菌H9的面包、点心或饮料。本专利技术所述的瑞士乳杆菌H9是按照下述筛选方法筛选得到的。该筛选方法包括下述步骤A、以传统发酵酸牦牛奶作为乳酸菌分离样品，取2_3mL所述酸牦牛奶放入灭菌小试管中，再取0. 5-lmL所述发酵酸牦牛奶放入装有灭菌CaCO3粉的无菌采样管中，在温度 2-6 °C条件下冷藏备用；B、用灭菌吸管吸取0. 5-lmL所述酸牦牛奶样品并接种于5_10mL石蕊脱脂乳培养基；并置于温度30 40°C恒温箱中增菌培养至酸化凝固并呈现粉红色；C、在步骤B)增菌培养后，用灭菌接种环挑取划线接种于含有以重量计IOppm放线菌酮和IOppm硫酸粘菌素的BL琼脂培养基中；将其放入厌氧培养罐中，在温度30 40°C 的条件下培养48 72小时，形成菌落后，用接种环挑取菌落，接种于MRS培养液中，再置于培养箱中在温度30 40°C的条件下培养24 48小时；D、待步骤C)菌株生长良好后，再次划线接种于BL琼脂培养基中，置于培养箱中在温度30 40°C的条件下培养24 48小时，观察记录菌落形态和革兰氏染色细胞形态特征，并进行过氧化氢酶试验，分离出在所述试验中呈阴性的杆菌，所述杆菌为乳杆菌；E、所述的乳杆菌接着在培养基MRS中在温度37°C的条件下进行纯化培养，然后在温度-80°C至_85°C的条件下进行低温冷冻保存，待用；F、取5mL脱脂乳在温度121°C下灭菌7min，急冷至温度40°C ；然后接种以其灭菌脱脂乳重量计11%在步骤E)得到的冷冻保存乳杆菌，在温度37°C的条件下进行第1代活化；然后，把以其灭菌脱脂乳重量计2%第1代活化种子转接到MRS培养基中，在温度37°C 的条件下培养18h进行第2代活化，然后使用BCP琼脂培养基进行计数；再将菌液离心后使用含有以重量计胰蛋白胨和0. 谷氨酸钠的PBS保护剂在4°C冰箱中保存，用于发酵乳的制备；G、将已计数的菌株以5X 106Cfu/mL接种量于在温度95°C下灭菌IOmin的11%脱脂乳中，在温度37 °C下恒温发酵至pH值4. 5时，将样品迅速冷却，并对样品进行酸度、OD600 值、游离氨基氮和ACE抑制活性的测定，从而筛选出具有抗高血压潜能的乳杆菌；H、采用血压测量方法和靶器官组织镜下观察分析方法，研究与评价瑞士乳杆菌H9 发酵乳对患高血压鼠和正常血压鼠的影响；I、将该菌株制成供试菌液，吸取1. OmL悬浮菌液加入到9. OmL pH值2. 5的人工胃液中，在温度37°C下消化3h，在其过程中分别于lh、2h、3h取样测定活菌数，并计算菌株存活率；然后，吸取1. OmL消化3h后的pH值2. 5的含菌人工胃液，加入到9. OmL的人工胰液中，继续在温度37°C下进行培养，分别于0h、4h、8h取样测定活菌数，并按照下式计算菌株存活率菌林存活率(％) = I^Vixl00O7oIogcfluVoN1——菌株处理后活菌数；N0——菌株初始活菌数；根据发酵乳酸度、OD600值、游离氨基氮和ACE抑制活性和菌株存活率选育出具有优良抗高血压效应的瑞士乳杆菌H9。下面将更详细地描述本专利技术。本专利技术涉及一种瑞士乳杆菌H9。该菌菌株已于2011年4月28日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心保藏，保藏号为CGMCC 4811。本专利技术的瑞士乳杆菌H9是采用下述筛选方法获得的。结合附附图说明图1对该方法步骤描述如下A、以传统发酵酸牦牛奶作为乳酸菌分离样品，取2_3mL所述酸牦牛奶放入灭菌小试管中，再取0. 5-lmL所述发酵酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种瑞士乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）Ｈ９，该菌菌株已于２０１１年４月２８日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心保藏，保藏号为ＣＧＭＣＣ　４８１１。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张和平，陈永福，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：15