本发明专利技术涉及一种用废糖蜜和废甘油发酵生产槐糖酯的方法，实施步骤如下：（1）孢子悬液的制备：将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到培养基斜面上，于30℃恒温培养2-4天，加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液；（2）上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，按照体积百分比2-5%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中，得到液体种子；（3）上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，然后按照体积比2-5%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度30-34℃，溶氧控制在30-40%，发酵时间48-72h；（4）发酵结束后，用与发酵液等体积的有机溶剂乙酸乙脂/异丙醇的混合有机溶剂提取槐糖脂。本发明专利技术工艺简单，成本低，效果显著。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种 发酵生产槐糖脂的方法，特别涉及一种。
技术介绍
大豆糖蜜是生产大豆浓缩蛋白过程中得到的副产品，大豆糖蜜中含有丰富的大豆低聚糖，可作为功能性大豆低聚糖的生产原料。其中主要成分含量为总糖54. 64%(其中蔗糖32. 17 %，棉籽糖4. 27%，水苏糖17. 54%)，总类脂18. 00%,总甾甙3. 06%,总磷脂8. 79%，粗蛋白8. 71%，灰分8. 69%ο甘油又名丙三醇，是一种无色、无臭、味甘的粘稠液体。甘油的化学结构与碳水化合物完全不同，因而不属于同一类物质。废甘油来源广阔，价格较低。主要来源于肥皂厂和生物柴油厂，直接排放会污染环境，如果加以利用，将使废品转换成经济价值较高的甘油产品，利国利己。槐糖脂kophorolipid)是一种可降解的生物表面活性剂。生物表面活性剂具有较高的选择性，其表面活性受极端温度、PH值、盐度等条件影响小。与其它通过化学合成或石油炼制法生产的表面活性剂相比，生物表面活性剂在食品、化妆品、医药和环境保护等领域具有广阔的应用前景。槐糖脂作为其中重要的一员，毒性低，与人体和环境相容性好，具有良好的乳化、分散、增溶等特性，在食品、医药、化妆品、冶金、环境保护、废油回收等领域具有研究和开发价值，目前已应用于日化、食品工业、石油工业等。国际上对槐糖脂理论研究及应用开发已开展多年，最近欧美及韩国一些学者经研究发现，槐糖脂具有一定的抑菌作用，并且能够刺激皮肤表皮细胞和真皮成纤维细胞的生长，这些研究对槐糖脂的有效应用具有非常重要的意义。我国目前该领域还处于起步阶段。目前通常采用植物油发酵生产槐糖脂的方法，由于植物油价格较高，发酵周期较长，生产工艺较复杂，再加上后提取工艺损失率较大，所以槐糖脂的收率也较低，导致槐糖脂的成本较高，市场价格也较高，很不利于槐糖脂的推广应用。因此，提供一种高效可行的用废糖蜜和废甘油发酵生产槐糖脂的方法，是该
科研人员急需开发的新课题之一。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述已有技术的不足之处，提供一种高效可行并可降低槐糖脂生产成本，减小投资，益于生产应用的用废糖蜜和废甘油生产槐糖脂的方法。为实现上述目的本专利技术所采用的实施方式如下一种，其特征在于实施步骤如下(1)孢子悬液的制备将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到培养基斜面上，于30°C恒温培养2-4天，加入质量浓度为0. 75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液，悬液中孢子含量约为IO5-IO6个，待用；斜面培养基组成包括，单位IL 葡萄糖8g，麦芽粉3g，蛋白胨4g，酵母粉4g，琼脂15g，用蒸馏水定容至1L，pH值3.5;其中所用菌种球拟酵母菌(1101~111叩8土8 bombicola) TJZKBA10326 ； (2)上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括，单位IL 葡萄糖含量20-60g，玉米油含量20-60g，酵母粉4_8g，尿素0. 5-lg,用蒸馏水定容至1L，pH值3. 5 ；将液体种子培养基于12rC、15min灭菌再冷却；然后按照体积百分比 2-5%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中，500ml规格的摇瓶装液量是 100ml，摇瓶于30-34°C、转速为100-150rpm的摇床上培养24h，得到液体种子；(3)上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵罐培养基组成包括 废甘油240-360g，废糖蜜稀释1-5倍，用蒸馏水定容至3L，pH值4. 0-4. 5，将发酵罐培养基于121 °C、15min灭菌再冷却；然后按照体积比2_5%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度30-34°C，溶氧控制在30-40%，发酵时间48_72h ；(4)发酵结束后，用与发酵液等体积的有机溶剂乙酸乙脂/异丙醇，所述乙酸乙脂/异丙醇两者比例4 :1，单位v/v，混合有机溶剂提取槐糖脂，并在70°C抽真空除去有机溶剂，得到槐糖脂产量为40-80g/L。本专利技术的有益效果是本专利技术采用废糖蜜和废甘油发酵生产槐糖脂工艺可以大大降低生产成本，既解决了废糖蜜和废甘油不易存放排放污染大的问题，又以较低的成本生产了槐糖脂，可谓一举两得、利国利民。并且不需要复杂的设备，处理方法非常简单，发酵过程简单易行，利于槐糖脂的开发应用的推广。该方法可连续补料发酵生产槐糖脂，具有很高的实际应用价值，市场优势非常明显。具体实施例方式以下结合实施例，对依据本专利技术提供的具体实施方式详述如下 实施例1(1)孢子悬液的制备将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到培养基斜面上，于30°C恒温培养2天，加入质量浓度为0. 75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液，悬液中孢子含量约为3. 6 X IO5个，待用；斜面培养基组成包括(1L)葡萄糖8g，麦芽粉3g，蛋白胨4g，酵母粉 4g,琼脂15g，用蒸馏水定容至1L，pH值3. 5。其中所用菌种为球拟酵母菌(Torulopsis bombicola)TJZKBA10326。(2)上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括(1L):葡萄糖30g，玉米油30g，酵母粉5g，尿素0.5g，用蒸馏水定容至1L，pH值3. 5。 将液体种子培养基于121 °C、15min灭菌再冷却；然后按照体积百分比2%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中(500ml规格的摇瓶装液量是100ml)，摇瓶于30°C、转速为IOOrpm的摇床上培养24h，得到液体种子；(3)上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵罐培养基组成包括 废甘油240g，废糖蜜稀释5倍，用蒸馏水定容至3L，pH值4.3，将发酵罐培养基于1211、 15min灭菌再冷却；然后按照体积比3%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度34°C，溶氧控制在40%，发酵时间48h ；(4)发酵结束后，用与发酵液等体积的乙酸乙脂/异丙醇(乙酸乙脂/异丙醇比值是4 1，v/v)，其混合有机溶剂提取槐糖脂，并在70°C抽真空除去有机溶剂，得到槐糖脂产量为41g/L。 实施例2(1)孢子悬液的制备将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到斜面上，于30°C恒温培养 2天，加入质量浓度为0. 75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液，悬液中孢子含量约为4.5 X IO5个，待用；斜面培养基组成包括(1L)葡萄糖8g，麦芽粉3g，蛋白胨4g，酵母粉4g， 琼脂15g，用蒸馏水定容至仏，？!1值3.5。(2)上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括(1L):葡萄糖50g，玉米油50g，酵母粉7g，尿素0.8g，用蒸馏水定容至1L，pH值3. 5。 将液体种子培养基于121°C、15min灭菌再冷却；然后按照体积比4%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中(500ml规格的摇瓶装液量是100ml)，摇瓶于32°C、转速为 120rpm的摇床上培养24h，得到液体种子；(3)上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵罐培养基组成包括 废甘油300g，废糖蜜稀释4倍，用蒸馏水定容至3L，pH值4.5，将发酵罐培养基于1211、 15min灭菌再冷却；然本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种用废糖蜜和废甘油发酵生产槐糖酯的方法，其特征在于实施步骤如下：（１）孢子悬液的制备：将球拟酵母菌ＴＪＺＫＢＡ１０３２６接种到培养基斜面上，于３０℃恒温培养２－４天，加入质量浓度为０．７５％的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液，悬液中孢子含量约为１０５－１０６个，待用；斜面培养基组成包括，单位１Ｌ：葡萄糖８ｇ，麦芽粉３ｇ，蛋白胨４ｇ，酵母粉４ｇ， 琼脂１５ｇ，用蒸馏水定容至１Ｌ，ｐＨ值３．５；其中所用菌种：球拟酵母菌ＴＪＺＫＢＡ１０３２６；（２）上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括，单位１Ｌ：葡萄糖含量２０－６０ｇ，玉米油含量２０－６０ｇ，酵母粉４－８ｇ，尿素０．５－１ｇ， 用蒸馏水定容至１Ｌ，ｐＨ值３．５；将液体种子培养基于１２１℃、１５ｍｉｎ灭菌再冷却；然后按照体积百分比２－５％的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中，５００ｍｌ规格的摇瓶装液量是１００ｍｌ，摇瓶于３０－３４℃、转速为１００－１５０ｒｐｍ的摇床上培养２４ｈ，得到液体种子；（３）上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的５Ｌ发酵罐中，发酵罐培养基组成包括：废甘油２４０－３６０ｇ， 废糖蜜稀释１－５倍， 用蒸馏水定容至３Ｌ，ｐＨ值４．０－４．５，将发酵罐培养基于１２１℃、１５ｍｉｎ灭菌再冷却；然后按照体积比２－５％的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度３０－３４℃，溶氧控制在３０－４０％，发酵时间４８－７２ｈ；（４）发酵结束后，用与发酵液等体积的有机溶剂乙酸乙脂／异丙醇，所述乙酸乙脂／异丙醇两者比例４：１，单位ｖ／ｖ，混合有机溶剂提取槐糖脂，并在７０℃抽真空除去有机溶剂，得到槐糖脂产量为４０－８０ｇ／Ｌ。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐勇虎，李睿颖，国华，王永乐，刘云，胡娅君，王晓琼，范婷，韩慧，墨玉欣，刘晓鸥，孙溪，
申请(专利权)人：天津实发中科百奥工业生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：12
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