本发明专利技术公开了一种马度米星发酵液效价的检测方法，首先将1mL标准移液枪的枪头口径进行扩大处理，用处理后的移液枪枪头移取未经消泡处理的马度米星发酵液，将称取的发酵液放入容量瓶中，在容量瓶中加入无水甲醇摇匀，进行超声波浸提，浸提后进行定容、过滤，得到滤液；然后依次制备待测液、标准液和参比液，并将三种液体进行水浴加热处理、冷却、定容，然后利用分光光度计分别测其吸光度，最后根据效价公式进行效价计算。本发明专利技术检测法是一种称重检测法，操作方便、数据精确，并且节能减排。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种抗生素效价的检测方法，特别是涉及一种马度米星发酵液的检测方法。
技术介绍
目前，抗生素生产领域关于马度米星发酵液的效价检测，都采用基于体积的分光光度法，此方法第一步采用标准移液器移取一定体积的样品，在检测过程中由于发酵液有泡沫，需要加入消泡剂进行预先消泡处理；同时发酵液中有时存在代谢产物结晶或原辅料形成的大颗粒物质，而该分光光度法效价检测的起始步骤是用移液器或吸管量取一定体积的发酵液进行浸提，加入消泡剂后的发酵液不仅存在均勻问题，而且发酵液中存在的大颗粒物质或大颗粒的代谢产物结晶，会导致用标准移液工具移液时，大颗粒物质不能吸入，或者大颗粒物质吸入过多，均会造成较大的检测偏差。基于体积的分光光度法测定效价不仅受发酵液物理性状、发酵液温度、外界温度、 人员操作差异等影响较大，而且该分光光度法检测过程中发酵液预处理需用有机溶剂正丁醇进行预先消泡，由此不仅增加了检测成本和检测时间，并且对环境造成了一定污染。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对上述马度米星发酵液效价的基于体积的分光光度法检测存在的缺陷，本专利技术提供一种。本专利技术检测法是一种基于重量的分光光度法，操作方便、数据精确，并且节能减排。为了解决上述问题，本专利技术采用的技术方案是本专利技术提供一种，所述检测方法包括以下步骤a、首先将ImL标准移液枪的枪头口径进行扩大处理，扩大处理后的ImL移液枪枪头口径是ImL标准移液枪枪头口径的3 5倍，用处理后的ImL移液枪枪头移取未经消泡处理的马度米星发酵液，并用电子天平称取1. Og,将称取的马度米星发酵液放入容量瓶中，然后在容量瓶中加入1 2 mL的无水甲醇，摇动容量瓶使发酵液与无水甲醇混合均勻，然后再加入适量无水甲醇混合均勻，加入适量无水甲醇后无水甲醇的总加入量占容量瓶体积的 85 90%，将混合均勻后的混合液进行超声波浸提8 iaiiin或静止放置；b、浸提或静止后向容量瓶中加入无水甲醇进行定容至容量瓶的刻度线，将定容后的混合液进行过滤，过滤后得到滤液；c、用标准移液管移取ImL步骤b过滤后得到的滤液和2mL香草醛溶液放入10mL棕色容量瓶中，然后加入5 6mL的无水甲醇，摇勻后得到待测液；d、用标准移液管移取ImL马度米星标准溶液、2mL香草醛溶液放入另外一支IOmL棕色容量瓶中，然后加入5 6mL的无水甲醇，摇勻后得到标准液；e、在另一IOmL棕色容量瓶中加入2mL香草醛溶液和5 6mL的无水甲醇，摇勻后得到参比液，参比液作为分光光度计校零溶液；f、将步骤c、d、e分别制作的待测液、标准液和参比液放于68 72°C的水浴锅中水浴加热22 ^min，水浴加热后分别取出冷却至室温，冷却后分别加入无水甲醇进行定容至 IOmL棕色容量瓶的刻度线；g、将步骤f处理后的待测液、标准液和参比液利用分光光度计分别测其吸光度，最后根据效价公式进行效价计算。根据上述的，步骤a中所述容量瓶为25mL容量瓶或50mL容量瓶或IOOmL容量瓶。根据上述的，步骤a中所述超声波浸提所采用的超声波型号为KQ - 250B，工作频率为40KHz，功率为250W;所述静止放置时的放置时间为 20 30min。根据上述的，步骤b中所述将定容后的混合液进行过滤除去溶液中的大颗粒杂质，得到滤液。根据上述的，步骤C、d和e中所述香草醛溶液的配制方法为称取15g香草醛、IOOmL无水甲醇和质量浓度为98%的浓硫酸7. 5mL加入到500 mL容量瓶中进行摇勻，摇勻后加入无水甲醇定容至容量瓶刻度线，定容后得到香草醛溶液。根据上述的，步骤f中所述将步骤C、d、e分别制作的待测液、标准液和参比液放于70°C的水浴过中水浴加热25min。根据上述的，步骤g中所述利用分光光度计分别测其吸光度是在515nm波长处分别测其吸光度。根据上述的，步骤g中所述的效价计算公式为本专利技术的积极有益效果权利要求1.一种，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤a、首先将ImL标准移液枪的枪头口径进行扩大处理，扩大处理后的ImL移液枪枪头口径是ImL标准移液枪枪头口径的3 5倍，用处理后的ImL移液枪枪头移取未经消泡处理的马度米星发酵液，并用电子天平称取1. Og,将称取的马度米星发酵液放入容量瓶中，然后在容量瓶中加入1 2 mL的无水甲醇，摇动容量瓶使发酵液与无水甲醇混合均勻，然后再加入适量无水甲醇混合均勻，加入适量无水甲醇后无水甲醇的总加入量占容量瓶体积的 85 90%，将混合均勻后的混合液进行超声波浸提8 iaiiin或静止放置；b、浸提或静止后向容量瓶中加入无水甲醇进行定容至容量瓶的刻度线，将定容后的混合液进行过滤，过滤后得到滤液；c、用标准移液管移取ImL步骤b过滤后得到的滤液和2mL香草醛溶液放入10mL棕色容量瓶中，然后加入5 6mL的无水甲醇，摇勻后得到待测液；d、用标准移液管移取ImL马度米星标准溶液、2mL香草醛溶液放入另外一支IOmL棕色容量瓶中，然后加入5 6mL的无水甲醇，摇勻后得到标准液；e、在另一IOmL棕色容量瓶中加入2mL香草醛溶液和5 6mL的无水甲醇，摇勻后得到参比液，参比液作为分光光度计校零溶液；f、将步骤c、d、e分别制作的待测液、标准液和参比液放于68 72°C的水浴锅中水浴加热22 ^min，水浴加热后分别取出冷却至室温，冷却后分别加入无水甲醇进行定容至 IOmL棕色容量瓶的刻度线；g、将步骤f处理后的待测液、标准液和参比液利用分光光度计分别测其吸光度，最后根据效价公式进行效价计算。2.根据权利要求1所述的，其特征在于，步骤a中所述容量瓶为25mL容量瓶或50mL容量瓶或IOOmL容量瓶。3.根据权利要求1所述的，其特征在于，步骤a中所述超声波浸提所采用的超声波型号为KQ - 250B，工作频率为40KHz，功率为250W;所述静止放置时的放置时间为20 30min。4.根据权利要求1所述的，其特征在于步骤b中所述将定容后的混合液进行过滤除去溶液中的大颗粒杂质，得到滤液。5.根据权利要求1所述的，其特征在于，步骤c、d和e 中所述香草醛溶液的配制方法为称取15g香草醛、IOOmL无水甲醇和质量浓度为98%的浓硫酸7. 5mL加入到500 mL容量瓶中进行摇勻，摇勻后加入无水甲醇定容至容量瓶刻度线， 定容后得到香草醛溶液。6.根据权利要求1所述的，其特征在于步骤f中所述将步骤c、d、e分别制作的待测液、标准液和参比液放于70°C的水浴过中水浴加热25min。7.根据权利要求1所述的，其特征在于步骤g中所述利用分光光度计分别测其吸光度是在515nm波长处分别测其吸光度。全文摘要本专利技术公开了一种，首先将1mL标准移液枪的枪头口径进行扩大处理，用处理后的移液枪枪头移取未经消泡处理的马度米星发酵液，将称取的发酵液放入容量瓶中，在容量瓶中加入无水甲醇摇匀，进行超声波浸提，浸提后进行定容、过滤，得到滤液；然后依次制备待测液、标准液和参比液，并将三种液体进行水浴加热处理、冷却、定容，然后利用分光光度计分别测其吸光度，最后根据效价公式进行效价计算。本专利技术检测法是一种称重检测法，操作方便、数据精确，并且节能减排。文档编号G01N21/31GK102331405SQ20111014247公开日2012年1月25日 申请日期2011年本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种马度米星发酵液效价的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：ａ、首先将１ｍＬ标准移液枪的枪头口径进行扩大处理，扩大处理后的１ｍＬ移液枪枪头口径是１ｍＬ标准移液枪枪头口径的３～５倍，用处理后的１ｍＬ移液枪枪头移取未经消泡处理的马度米星发酵液，并用电子天平称取１．０ｇ，将称取的马度米星发酵液放入容量瓶中，然后在容量瓶中加入１～２ ｍＬ的无水甲醇，摇动容量瓶使发酵液与无水甲醇混合均匀，然后再加入适量无水甲醇混合均匀，加入适量无水甲醇后无水甲醇的总加入量占容量瓶体积的８５～９０％，将混合均匀后的混合液进行超声波浸提８～１２ｍｉｎ或静止放置；ｂ、浸提或静止后向容量瓶中加入无水甲醇进行定容至容量瓶的刻度线，将定容后的混合液进行过滤，过滤后得到滤液；ｃ、用标准移液管移取１ｍＬ步骤ｂ过滤后得到的滤液和２ｍＬ香草醛溶液放入１０ ｍＬ棕色容量瓶中，然后加入５～６ｍＬ的无水甲醇，摇匀后得到待测液；ｄ、用标准移液管移取１ｍＬ马度米星标准溶液、２ｍＬ香草醛溶液放入另外一支１０ｍＬ棕色容量瓶中，然后加入５～６ｍＬ的无水甲醇，摇匀后得到标准液；ｅ、在另一１０ｍＬ棕色容量瓶中加入２ｍＬ香草醛溶液和５～６ｍＬ的无水甲醇，摇匀后得到参比液，参比液作为分光光度计校零溶液；ｆ、将步骤ｃ、ｄ、ｅ分别制作的待测液、标准液和参比液放于６８～７２℃的水浴锅中水浴加热２２～２８ｍｉｎ，水浴加热后分别取出冷却至室温，冷却后分别加入无水甲醇进行定容至１０ｍＬ棕色容量瓶的刻度线；ｇ、将步骤ｆ处理后的待测液、标准液和参比液利用分光光度计分别测其吸光度，最后根据效价公式进行效价计算。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周超，郑瑞谦，陈文成，黄玉欣，张永旺，王凤芝，
申请(专利权)人：濮阳泓天威药业有限公司，
类型：发明
国别省市：41
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