一种包裹药理活性物质的核酸纳米粒的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种包裹药理活性物质的核酸纳米粒的制备方法。本发明专利技术利用DNA滚环复制原理制备具有大量重复序列的核酸球形或者类球形结构，然后将药理活性物质包入，形成纳米粒，用于体内递送。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种包裹药理活性物质的核酸纳米粒的方法，属于药理活性物质的体内递送及其临床应用领域。具体来说，本专利技术是一种将药理活性物质包裹进入核酸，从而形成纳米粒，用于体内药物递送。
技术介绍
静脉注射给药能够快速直接地作用于机体。为了降低静脉注射给药的副作用，有效的方法之一就是将药理活性物质包入微米或纳米级的粒子中。一方面，静脉注射的粒子可以缓释药理活性物质并延长药理活性物质的半衰期；另一方面，靶向材料可以将粒子中的药理活性物质靶向地释放。近年来，以核酸适体(Aptamer)作为主动靶向给药载体的研究日益受到了人们的关注。核酸适体是一段小的DNA或者RNA片段，能够形成比较特殊的三维结构，从而识别细胞表面的核酸质、糖类或者核苷酸等分子。目前已经报道的以核酸适体为导向给药系统有 核酸适体-药物结合体，核酸适体-脂质体结合体，核酸适体-纳米粒结合体。Bagalkot 等人(Angew Chem Int Ed Engl, 2006,45 (48) :8149-8152)将阿霉素与核酸适体连接，成功制备了适体-药物结合体。但是这种连接中，核酸与药物是一对一的关系，载药量相对较低，而且靶向性也较差。Cao 等人(Angew Chem Int Ed Engl，2009，48 (35) :6494-6498)制备了以顺钼为治疗药物的核酸适体-脂质纳米囊的靶向制剂。用该结合物处理乳腺癌MCF-7细胞，大大地提高了药物的化疗效果。Farokhzad等人(Cancer Res, 2004,64 (21) :7668-7672)以核酸适体 AlO作为“靶向载体”，通过PEG与包裹有模型药物右旋糖酐的纳米粒相连构成适体-PEG-纳米粒复合物，由于适体AlO的存在，使得前列腺癌LNCaP细胞(PSMA+)对该结合体的吸纳能力比没有适体的PEG-纳米粒复合物提高了 77倍。尽管这些方法部分实现了药物的靶向， 但是这些技术都是基于高分子材料表面修饰核酸，因此会带来一定的免疫原性。另外这里用到的核酸通常为几十个碱基的片段，其靶向性有一定的局限性。同时，由于核酸适体的立体结构与纳米粒的大小相比有几十倍甚至几百倍的差距，因此当利用核酸适体导向纳米粒至靶向部位，其局限性也是显而易见的。
技术实现思路
本专利技术的技术目的在于提供。为了实现本专利技术的技术目的，本专利技术的技术方案为一种制备用于包裹药理活性物质的核酸纳米粒的方法，包括以下步骤(a)环化单链DNA引物；(b)以步骤(a)中所述的DNA引物为模板，利用滚环复制扩增核酸形成具有高度重复序列的球形或者近球形结构；(c)在加热条件下将药理活性物质加入步骤(b)中所述的球形或者近球形结构中，形成核酸纳米粒。本专利技术技术方案中所述的核酸纳米粒平均粒径为50 300nm。本专利技术技术方案中所述的核酸纳米粒可包载占核酸纳米粒总重量 20%的药理活性物质。本专利技术技术方案所述的药理活性物质是紫杉醇、多西紫杉醇、伊立替康、5-氟尿嘧啶、卡莫司汀、阿霉素、苯芥胆留醇、哌泊舒凡、他莫昔芬、洛莫司汀、藤黄酸、冬凌草甲素、鬼臼毒素、环磷酰胺、博莱霉素、道诺霉素、表柔比星、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、钼、长春碱、丝裂霉素-C、依托泊苷。其中，优选的药理活性物质是紫杉醇，多西紫杉醇、阿霉素或者是他们的组合。本专利技术技术方案中所述的单链DNA引物的序列是CTCTACTACCTTCTCCCTCCCACAAAC GCAAACCCACTACCACCAAAC。本专利技术技术方案中所述的步骤(c)的操作温度为60 100°C。本专利技术的技术方案的方法进一步包括(d)除去步骤(C)所得纳米粒水溶液中多余的小分子。本专利技术的技术方案的方法进一步包括(e)将纳米粒经过脱水步骤制备成药物制剂。其中，所述的脱水的步骤是冷冻干燥、喷雾干燥或减压蒸馏。下面是对本专利技术技术方案的进一步描述本专利技术技术方案进一步提出了一种制备用于体内递送紫杉醇核酸纳米粒的方法， 所述方法包含以下几个步骤(a)环化单链DNA引物；(b)以步骤(a)中所述的DNA引物为模板，利用滚环复制扩增核酸形成具有高度重复序列的球形或者近似球形结构；(c)在加热条件下将紫杉醇加入步骤(b)中所述的球形或者近球形结构中，形成核酸纳米粒。(d)除去步骤(c)中所得纳米粒水溶液中多余的小分子。(e)将纳米粒经过脱水步骤制备成药物制剂。这里制得的纳米粒平均粒径为50 300nm，可包载占粒子总重量约1 20%的药理活性物质。其中本专利技术技术方案中所述的单链DNA引物的序列是CTCTACTACCTTCTCCCTCCC ACAAACGCAAACCCACTACCACCAAAC。本专利技术技术方案进再一步提出了一种制备用于体内递送多西紫杉醇核酸纳米粒的方法，所述方法包含以下几个步骤(a)环化单链DNA引物；(b)以步骤(a)中所述的DNA 引物为模板，利用滚环复制扩增核酸形成具有高度重复序列的球形或者近似球形结构；(c) 在加热条件下将多西紫杉醇加入步骤(b)中所述的球形或者近球形结构中，形成核酸纳米粒。(d)除去步骤(c)中所得纳米粒水溶液中多余的小分子。(e)将纳米粒经过脱水步骤制备成药物制剂。这里制得的纳米粒平均粒径为50 300nm，可包载占粒子总重量约1 20%的药理活性物质。其中本专利技术技术方案中所述的单链DNA引物的序列是CTCTACTACCT TCTCCCTCCCACAAACGCAAACCCACTACCACCAAAC。本专利技术技术方案进再一步提出了一种制备用于体内递送阿霉素核酸纳米粒的方法，所述方法包含以下几个步骤(a)环化单链DNA引物；(b)以步骤(a)中所述的DNA引物为模板，利用滚环复制扩增核酸形成具有高度重复序列的球形或者近似球形结构；(c)在加热条件下将阿霉素加入步骤(b)中所述的球形或者近球形结构中，形成核酸纳米粒。(d) 除去步骤(c)中所得纳米粒水溶液中多余的小分子。(e)将纳米粒经过脱水步骤制备成药物制剂。这里制得的纳米粒平均粒径为50 300nm，可包载占粒子总重量约1 20%的药理活性物质。其中本专利技术技术方案中所述的单链DNA引物的序列是CTCTACTACCTTCTCCCTCCCACAAACGCAAACCCACTACCACCAAAC。对本专利技术所述技术方案的进一步说明本专利技术所制备的核酸纳米粒平均粒径分布于50nm到300nm。而且，本专利技术所制备的纳米粒能够结合高达20%的药理活性物质。本专利技术中所述的将药理活性物质包入核酸，指的是药理活性物质可以通过核酸的展开和再折叠，进入核酸中心区域。一般来说，药理活性物质包括在给病人服用时，能够产生药理反应的任何的物质。本专利技术中的药理活性物质包括疏水和亲水的化合物。本领域技术人员清楚疏水性药理活性物质的水溶性不好，亲水性药理活性物质能够顺利的溶解在水中。疏水性的药理活性物质包括如下的化合物，但是不仅仅限于此抗肿瘤药物，心血管药物，抗炎药物，降糖药物，中枢神经系统药物，免疫抑制药物，以及抗病毒药物。本专利技术涉及的药理活性物质可以包括，但是不仅仅局限于此紫杉醇、多西紫杉醇、伊立替康、卡莫司汀、阿霉素、苯芥胆留醇、哌泊舒凡、他莫昔芬、洛莫司汀、藤黄酸、冬凌草甲素、鬼臼毒素、阿托伐他汀、斯伐他汀、非诺贝特、硝苯地平、布洛芬、喷哚美辛、吡罗昔康、格列本脲、本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种包裹药理活性物质的核酸纳米粒的制备方法，其特征是：（ａ）环化单链的ＤＮＡ引物；（ｂ）以步骤（ａ）中所述的ＤＮＡ引物为模板，利用滚环复制扩增核酸形成具有高度重复序列的球形或者近似球形结构；（ｃ）在加热条件下将药理活性物质加入步骤（ｂ）中所述的球形或者近似球形结构中，形成核酸纳米粒。

【技术特征摘要】
1.一种包裹药理活性物质的核酸纳米粒的制备方法，其特征是(a)环化单链的DNA引物；(b)以步骤(a)中所述的DNA引物为模板，利用滚环复制扩增核酸形成具有高度重复序列的球形或者近似球形结构；(c)在加热条件下将药理活性物质加入步骤(b)中所述的球形或者近似球形结构中， 形成核酸纳米粒。2.权利要求1所述的方法，其特征在于所述的核酸纳米粒的平均粒径为50nm 300nmo3.权利要求1所述的方法，其特征在于所述的药理活性物质在纳米粒中所占的重量比是 20%。4.权利要求1所述的方法，其特征在于所述的药理活性物质是紫杉醇、多西紫杉醇、阿霉素或者...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴锦慧，陈晶，王永毅，
申请(专利权)人：南京从一医药咨询有限公司，
类型：发明
国别省市：84