本发明专利技术提供了一种复合酶制剂及其用于提取植物多糖的应用和方法，属于酶制剂的应用领域。本发明专利技术的技术方案是：提供一种复合酶制剂，包括以下重量份的组分：纤维素酶1-5份，果胶酶1-5份，蛋白酶2-12份，本发明专利技术还给出了将此复合酶制剂用于提取植物多糖，尤其是桑叶多糖的应用，并给出了具体的操作步骤，最终实现了植物多糖提取率60mg/g以上。本发明专利技术的有益效果是：反应条件温和，能保持天然产物的构象，不破坏其立体结构和生物活性，有利于保持有效成分原有的药效；能够去除体系内杂质，提高提取液的澄清度，提高了中药有效成分的提取率；对反应条件进行了优化组合，实现了提取得率的最大化。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，特别是涉及一种从中药桑叶中提取桑叶多糖的方法。
技术介绍
天然多糖是一类重要的生物活性物质，具有多方面的生物活性和保健功能，可作为各种药物和保健品的有效成分，对于预防和治疗包括癌症在内的多种疾病都具有巨大的潜力。常见的植物多糖有银耳多糖、苦瓜多糖、黄芪多糖、茶多糖、香菇多糖、灵芝多糖、银杏多糖、连翘多糖等。由于植物类中药成分十分复杂且很多贵重有效成分含量很低，为微量甚至痕量， 因此，如何快速有效地从中药材中提取分离和纯化低含量成分，并保持较高的活性已成为中药开发中的关键工序。但传统的提取分离方法(如煎煮法、浸渍法、渗滤法、回流法等) 存在有效成分提取率不高、杂质清除率低等问题，这些根本问题制约着中药开发的进程。因此，需要寻找一种具有反应特异性高、快速、高效、反应条件温和且易于控制的提取植物多糖的方法。桑叶异名铁扇子，为桑科桑属Morus alba L.的树叶。桑属植物具有降血糖、降血压、抗菌和抗病毒等多种生物活性。现代药理研究证明桑叶可抑制血糖升高，具有预防和治疗糖尿病的作用。除此之外，桑叶还具有祛风清热、凉血明目的功效，主治风湿发热、头痛、 目赤、口渴、肺热咳嗽、风痹等。具有药性平和无毒副作用等特点，已经被国家卫生部正式归入“既是食品又是药品”之列。桑叶多糖作为桑叶中的有效成分之一，经过现代药理研究表明其具有降血糖作用，对大鼠四氧嘧啶型糖尿病具有治疗作用，因此提取、分离、纯化桑叶多糖成分制成各种中成药的前景十分广阔。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种复合酶制剂，并将其应用在提取植物多糖，尤其是桑叶多糖中，进一步给出了具体的操作方法，该方法能在温和的条件下对植物有效成分进行高选择性转化，不仅可以克服工业中常用的醇水提取方法中有效成分提取率低、工序复杂等问题，提高提取体系澄清度、改变药材质地，还可以在提取中改变原有天然成分的结构， 增加提取物的生理活性，具有潜在的工业应用价值。为实现该目的，本专利技术采用以下技术方案—种复合酶制剂，其特征在于包括以下重量份的组分纤维素酶1-5份果胶酶 1-5份蛋白酶 2-12份所述蛋白酶选用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶中的至少一种。上述复合酶制剂用于提取植物多糖的应用。上述复合酶制剂用于提取植物多糖的方法，其特征在于包括以下步骤(1)取植物材料，粉碎，加入蒸馏水，煮沸后冷却备用；(2)取复合酶制剂加入适当蒸馏水，置于水浴锅里40-60°C条件下活化10-30分钟；(3)将步骤(2)与步骤(1)得到的溶液混合均勻，调节pH至4. 0-6. 0，在40_60°C 条件下酶解0. 5-2.0小时；(4)煎煮酶解液，控制加热温度，保持溶液在微沸的状态；(5)离心，取上清液过滤，将滤液浓缩，得到植物多糖浸膏。所述植物为桑叶的条件下，应用上述酶制剂提取桑叶多糖包括以下步骤(1)取桑树经风干的桑叶，粉碎，加入蒸馏水，煮沸后冷却备用；(2)取复合酶制剂加入适当蒸馏水，置于水浴锅里40-60°C条件下活化10-30分钟；(3)将步骤(2)与步骤(1)得到的溶液混合均勻，调节pH至4.0-5.5，在40_551 条件下酶解0. 5-2.0小时；(4)煎煮酶解液，控制加热温度，保持溶液在微沸的状态；(5)离心，取上清液过滤，将滤液浓缩，得到桑叶多糖浸膏。上面提到的提取植物多糖和进一步的提取桑叶多糖的方法中，所述植物粉碎至 40-100目，植物材料与加入的蒸馏水的质量比为1 10-30。所述的复合酶制剂与蒸馏水的质量比为1 5-15。步骤O)中所述的复合酶制剂添加量为步骤(1)植物材料添加量的1_4%。步骤中所述的浸提时间为1-2小时。本专利技术选用此种酶制剂的原理是纤维素酶可以分解植物纤维素；果胶酶可以破坏植物细胞壁；蛋白酶可以除去提取物中的蛋白质，提高提取物的纯度。因为植物类细胞结构相同，三种结合，适用于植物的细胞内多糖的提取，具有较广的应用范围。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点(1)本专利技术采用复合酶法提取植物多糖，反应条件温和，能保持天然产物的构象， 不破坏其立体结构和生物活性，有利于保持有效成分原有的药效。(2)本专利技术选用复合酶不仅能够去除体系内杂质，提高提取液的澄清度，同时又提高了中药有效成分的提取率。(3)本专利技术对复合酶的配比、提取时间、提取温度、加酶量、PH值进行了优化组合， 实现了植物多糖提取得率的最大化。(4)本专利技术复合酶制剂用于提取植物多糖的方法中，步骤(4)具有灭活酶制剂，同时又进行了水提的功效，在采用酶提和水提结合的条件下，提高了活性成分的得率。(5)采用本专利技术从药用植物桑叶中提取桑叶多糖，桑叶多糖提取率大于70mg/g， 而一般的水提醇提法，提取率一般仅为20-30mg/g，因此酶提法提取得率高。(6)本专利技术工艺简单、操作方便、投资少、不会产生噪音和污染，适应工艺生产应用。具体实施方式实施例1(1)取桑树经风干的桑叶，粉碎至100目，取该粉末9g，加入蒸馏水180ml，煮沸后冷却备用；(2)取复合酶制剂纤维素酶0. 02g，果胶酶0. 02g，木瓜蛋白酶0. 05g，加入蒸馏水 0. 9g，40°C水浴30分钟；(3)将步骤(2)与步骤(1)得到的溶液混合均勻，调节pH至5.0，在50°C条件下酶解1小时；(4)煎煮酶解液，控制加热温度，保持溶液在微沸的状态，2小时；(5)离心，取上清液过滤，将滤液浓缩，得到桑叶多糖浸膏。采用苯酚硫酸法测定多糖含量，桑叶多糖提取率为71. 63mg/g。实施例2(1)取桑树经风干的桑叶，粉碎至100目，取该粉末10g，加入蒸馏水200ml，煮沸后冷却备用；(2)取复合酶制剂纤维素酶0. 04g，果胶酶0. 04g，木瓜蛋白酶0. lg，加入蒸馏水 0. 9g，40°C水浴30分钟；(3)将步骤(2)与步骤(1)得到的溶液混合均勻，调节pH至5.0，在50°C条件下酶解30分钟；(4)煎煮酶解液，控制加热温度，保持溶液在微沸的状态，2小时；(5)离心，取上清液过滤，将滤液浓缩，得到桑叶多糖浸膏。采用苯酚硫酸法测定多糖含量，桑叶多糖提取率为70. 53mg/g。实施例3:(1)取桑树经风干的桑叶，粉碎至100目，取该粉末20g，加入蒸馏水400ml，煮沸后冷却备用；(2)取复合酶制剂0. 2g，其中纤维素酶果胶酶木瓜蛋白酶=2 2 5，加入蒸馏水2g，40°C水浴30分钟；(3)将步骤⑵与步骤(1)得到的溶液混合均勻，调节pH至5. 0，在45°C条件下酶解1小时；(4)煎煮酶解液，控制加热温度，保持溶液在微沸的状态，2小时；(5)离心，取上清液过滤，将滤液浓缩，得到桑叶多糖浸膏。采用苯酚硫酸法测定多糖含量，桑叶多糖提取率为75. 54mg/go实施例4(1)取桑树经风干的桑叶，粉碎至60目，取该粉末10g，加入蒸馏水300ml，煮沸后冷却备用；(2)取复合酶制剂纤维素酶0. 09g，果胶酶0. 09g,中性蛋白酶0. 18g，加入蒸馏水 1.8g，60°C水浴10分钟;(3)将步骤⑵与步骤(1)得到的溶液混合均勻，调节pH至5. 5，在60°C条件下酶解1小时；(4)煎煮酶解液，控制加热温度，保持溶液在微沸的状态，1小时；(5)离心，取上清液过滤，将滤液浓缩，得到桑叶多糖浸膏。采用苯酚硫酸法测定多糖本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种复合酶制剂，其特征在于：包括以下重量份的组分：纤维素酶 １－５份果胶酶 １－５份蛋白酶 ２－１２份
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘敏尧，刘宇，刘靓，刘海庆，刘晓津，董晓芳，
申请(专利权)人：天津滨海诺奥酶工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：12
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