本发明专利技术公开了一种地锦草提取物、制备工艺及其应用，属于天然药物化学领域。本发明专利技术将地锦草经回流提取、提取液浓缩，然后将浓缩液置聚酰胺柱上，分别用水，30％乙醇，50％乙醇梯度洗脱，收集50％乙醇洗脱液，洗脱液经浓缩、干燥制得。其主要成分及含量为：总黄酮含量为24～27wt％，其中以槲皮素为主，含量为12～14wt％。本发明专利技术经聚酰胺柱洗脱后得到的产品，去除了可消解性鞣质成分，使最终的提取物得到了纯化，为产品进行下一步的开发应用奠定了坚实的基础。经实验证明本工艺制备的地锦草提取物具有良好的抑制耐药性禽源大肠杆菌的作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种地锦草提取物、制备工艺及其应用，属于天然药物化学领域。
技术介绍
地锦草为大戟科植物地锦草或斑地锦干燥的全草，为多年生草本植物，具有清解毒、利湿退黄、活血止血、抗病原等功能。现代研究表明，地锦草主要含可水解性鞣质类和槲皮素、山萘素等黄酮类化合物；药理研究证明其具有抗菌、抗病毒、抗氧化、护肝、止血等生物活性。目前地锦草的提取均采用普通的水提醇沉或单纯的醇提，其鞣质、脂溶性杂质较多、纯度低，干燥后提取物的引湿性过大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的地锦草提取物制备工艺，经该工艺制备的提取物具有良好的抑制耐药性禽源大肠杆菌的作用。本专利技术采用的技术方案是地锦草提取物的制备工艺，其特征是，依次包括以下步骤(1)取地锦草，加入70%的乙醇回流提取2次，每次3小时，70%的乙醇加入量每次为地锦草质量的8倍；(2)合并两次提取液，然后将提取液加入到浓缩罐中，控制浓缩罐内温度为 90士 1°C进行浓缩，至浓缩液相对密度为1. 025 ；(3)将浓缩液置聚酰胺柱上，分别用水，30%乙醇，50%乙醇梯度洗脱，每个梯度洗脱至无色；收集50 %乙醇洗脱液置浓缩罐中，控制浓缩罐内温度为90 士 1 °C，浓缩至相对密度为1.025 ；(4)将浓缩后的50%乙醇洗脱液送入喷雾干燥器，控制容器内进风口温度为 180士5°C，出风口温度为60 70°C，进行喷雾干燥得到便于存放的地锦草提取物。上述乙醇的百分数均为重量百分数。上述工艺制得的地锦草提取物的主要成分及含量为总黄酮(槲皮素、山萘素、异黄酮、双黄酮、查尔酮等)含量为M 27wt%，其中以槲皮素为主，地锦草提取物中槲皮素含量为12 Hwt %。该提取物具有良好的抑制耐药性禽源大肠杆菌的作用。本专利技术的有益效果是经聚酰胺柱洗脱后得到的产品，去除了可消解性鞣质成分， 使最终的提取物得到了纯化，为产品进行下一步的开发应用奠定了坚实的基础。经实验证明本工艺制备的地锦草提取物具有良好的抑制耐药性禽源大肠杆菌的作用。具体实施例方式实施例11、仪器与材料地锦草购自济南市建联中药有限公司中药饮片厂，产地为山东。聚酰胺柱40CmX200Cm 制造厂家天津阿托兹精细化工有限公司实验菌种来自临床经鉴定具有耐药性的禽源大肠杆菌2、地锦草提取物制备取地锦草药材50kg，置提取罐内，加入70%乙醇400Kg，加热回流3小时，滤过，滤渣加入70 %乙醇400Kg，加热回流3小时，滤过，滤液合并，置浓缩罐中，控制浓缩罐内温度为90士 1°C，浓缩至相对密度为1.025，放冷。将浓缩液置40cmX 200cm聚酰胺柱内，调节洗脱液流速为5L/min，用水洗脱至无色(5小时)，再用30%乙醇洗脱至无色G小时)，然后用50%乙醇洗脱至无色(5小时)，收集50%乙醇洗脱液置浓缩罐中，控制浓缩罐内温度为90士 1°C，浓缩至相对密度为1.025， 放冷。将浓缩后的50%乙醇洗脱液送入喷雾干燥器内，控制容器内进风口温度为 180士5°C，出风口温度为60 70°C，进行喷雾干燥，得喷干粉2kg。上述乙醇的百分数均为重量百分数。3、地锦草提取物抑菌实验3. 1药液制备用IOg提取物，加入IOOml无菌蒸馏水，搅拌，3000转/min离心，去除不溶物，高压灭菌，即得。3. 2细菌悬液的制备用接种环将耐药大肠杆菌接种于营养琼脂斜面培养基， 37°C培养M小时，传种于无菌肉汤培养基中，经18小时培养，再传种于无菌肉汤培养基中培养6小时，将菌液浓度做1 100稀释3. 3抑菌实验取无菌小试管，每管加肉汤培养基1ml。取药液Iml加入第1管， 混勻后取Iml加入第2管，第1管补加肉汤培养基1ml，第2管混勻后取Iml加入第3管， 第2管补加肉汤培养基1ml，如此连续稀释至第10管，从第10管取出Iml弃掉，第11管用anl肉汤培养基做对照，这样1 10管为倍比稀释的药液(按提取物折算即1 40，1 80......1 20480)。第1 9和第11管每管各加菌液0.05ml，第10管不加菌液。将所有试管充分混勻，置37°C培养M小时，观察结果。3. 4结果判断要求药液对照管即第10管无大肠杆菌生长，菌液对照管即第11管有大肠杆菌生长正常，实验方为有效。以抑制大肠杆菌生长的药液最高稀释度为抗菌效价。 以能抑制大肠杆菌生长的最高稀释度为最低抑菌浓度MIC。实验重复3次。结果显示本工艺制备的地锦草提取物对耐药性的禽源大肠杆菌的最低抑菌浓度 MIC 为 5120。4、槲皮素含量测定4. 1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液(50 50)为流动相；检测波长360nm。4. 2对照品溶液的制备精密称定槲皮素对照品适量，加80%甲醇制成每ImL 含20 μ g的溶液，即得。4. 3供试品溶液的制备取本品粉末约0. 03g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密封，称定重量，超声提取5分钟，取出，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，精密量取续滤液20mL，精密加入25%盐酸7mL，置85°C水浴中水解30min，取出，迅速放冷，转至50mL容量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。4. 4测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得。4. 5计算公式权利要求1.一种地锦草提取物，其特征是，由地锦草提取制得，其总黄酮含量为M 27wt%;所述总黄酮以槲皮素为主，所述地锦草提取物中槲皮素含量为12 Hwt%。2.权利要求1所述的地锦草提取物的制备工艺，其特征是，依次包括以下步骤(1)取地锦草，加入70%的乙醇回流提取2次，每次3小时，70 %的乙醇加入量每次为地锦草质量的8倍；(2)合并两次提取液，然后将提取液加入到浓缩罐中，控制浓缩罐内温度为90士1°C进行浓缩，至浓缩液相对密度为1. 025 ；(3)将浓缩液置聚酰胺柱上，分别用水，30%乙醇，50%乙醇梯度洗脱，每个梯度洗脱至无色；收集50%乙醇洗脱液置浓缩罐中，控制浓缩罐内温度为90士 1°C，浓缩至相对密度为 1. 025 ；(4)将浓缩后的50%乙醇洗脱液送入喷雾干燥器，控制容器内进风口温度为 180士5°C，出风口温度为60 70°C，进行喷雾干燥制得产品。3.权利要求1所述的地锦草提取物在抑制耐药性禽源大肠杆菌方面的应用。全文摘要本专利技术公开了一种地锦草提取物、制备工艺及其应用，属于天然药物化学领域。本专利技术将地锦草经回流提取、提取液浓缩，然后将浓缩液置聚酰胺柱上，分别用水，30％乙醇，50％乙醇梯度洗脱，收集50％乙醇洗脱液，洗脱液经浓缩、干燥制得。其主要成分及含量为总黄酮含量为24～27wt％，其中以槲皮素为主，含量为12～14wt％。本专利技术经聚酰胺柱洗脱后得到的产品，去除了可消解性鞣质成分，使最终的提取物得到了纯化，为产品进行下一步的开发应用奠定了坚实的基础。经实验证明本工艺制备的地锦草提取物具有良好的抑制耐药性禽源大肠杆菌的作用。文档编号A61K36/47GK102302538SQ20111025560公开日2012年1月4日 申请日期2011年9月1日 优先权日2011年9月1日专利技术者张传津, 苏梅, 高本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种地锦草提取物，其特征是，由地锦草提取制得，其总黄酮含量为２４～２７ｗｔ％；所述总黄酮以槲皮素为主，所述地锦草提取物中槲皮素含量为１２～１４ｗｔ％。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高迎春，苏梅，张传津，
申请(专利权)人：山东华尔康兽药有限公司，
类型：发明
国别省市：88
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