甘草药材全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法技术

本发明专利技术公开了甘草药材全时段多波长融合指纹图谱的质量控制方法，它是将现代分析检测手段和信息处理手段结合起来，有效融合中药材指标成分的谱图信息，可以克服单一波长单一指标检测时信息量不足的缺点，从而可以较完善地反映中药材的内在质量。本发明专利技术的质量控制方法操作简单、稳定可靠、重现性较好，可用于中药材质量评价和控制及中药新药研发中。特别是可将其作为甘草药材质量控制及真伪鉴别的指标之一。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于采用现代分析检测手段和信息处理手段对中药材的质量进行检测的
，涉及一种中药材质量的控制方法，更具体的说是一种。
技术介绍
据中华人民共和国药典2010年版一部记载本品为豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的干燥根和根茎。始载于神农本草经，列为上品。本品药性平和通行十二经脉，传统医学认为其有益气补中、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药等功效，有“十方九草”之说。临床主要用于慢性肝炎硬变、溃疡病、初发劳力性心绞痛、妊娠恶阻重症、气滞血瘀型痛经、腰椎间盘突出等疾病的治疗及慢性肝病肝组织学改善、慢性肝病肝癌变的抑制等。在我国，甘草主要产于内蒙古、甘肃、新疆、东北、山西等地区。甘草中主要含三萜类和黄酮类成分，其中三萜类成分主要有甘草酸、甘草次酸等；黄酮类成分主要有甘草苷、甘草苷元、异甘草苷等。随着科学技术的发展，现代先进分析检测仪器的普遍使用以及信息处理技术的逐步完善，使中药分析检测水平有了显著提高，中药质量控制方法得到不断改进。近年来通过建立指纹图谱对中药材指标成分进行含量测定成为中药质量控制和评价的一种发展趋势。 中药指纹图谱是指某些中药材或中成药经过适当处理后，利用现代信息采集技术和质量分析手段得到的能够显现中药材或中成药化学特征的光谱图或色谱图。由于在两个不同色谱条件下使用不同的前处理方法对甘草中甘草苷、异甘草苷和甘草酸单铵盐分别进行检测是无法实现对甘草指纹图谱进行全面和整体评价的，因此，遵循信息最大化原则建立甘草药材全时段多波长融合指纹图谱并对其指标成分进行含量测定可以获取一种较为有效的质量控制方法，从而保证甘草药材质量的安全、稳定和可靠。甘草药材在中药材中占有十分重要的地位。目前，市售的甘草药材质量参差不齐， 因此甘草药材的稳定性难以保证。2010版中国药典规定的含量测定本品按干燥品计算， 含甘草苷不得少于0. 50% ；甘草酸以甘草酸铵计不得少于2. 0%。
技术实现思路
本专利技术目的在于采用现代分析检测手段和信息处理手段建立甘草药材的全新指纹图谱，及以该指纹图谱为基础的全时段多波长融合的含量测定方法，以确保甘草药材的质量控制方法更加简便、合理、可靠。本专利技术是通过以下技术方案实现的甘草药材全时段多波长融合指纹图谱的质量控制方法，其特征在于该方法按如下步骤进行(1)供试品溶液的制备取甘草药材粉末约5g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入水 IOOmL,称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇勻，滤过，精密吸取续滤液20mL，加在AB-8树脂柱上，用蒸馏水120mL洗涤，再用100mL95%乙醇洗脱， 收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加20%乙腈使溶解并转移至IOmL量瓶中，加20%乙腈定容至刻度，摇勻，滤过，取续滤液即得；(2)对照品溶液的制备精密称取甘草酸单铵盐对照品、甘草苷对照品和异甘草苷对照品适量，加甲醇分别制成每ImL含甘草酸单铵盐对照品0. 15%ig、甘草苷对照品0. 587mg和异甘草苷对照品0. 362mg的溶液，即得；(3)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂的AgilentTC-C18 色谱柱；以0. 2%。甲酸水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱(TlOmin为5°/Γ Ο%Β， 10 61min 为 10% 27%B，61 70min 为 27% 40%B，70 90min 为 40% 50%B ；流速 1. OmL/min ；柱温30°C ；DAD检测器在波长254nm、279nm和362 nm下同时进行检测；进样量10 μ L ；理论塔板数计算，应不低于3000;(4)全时段多波长融合采用多波长融合指纹图谱技术将254nm、279nm和362nm三个波长下的谱图数据进行全时段融合，得到一张能够同时包含三个波长信息的色谱图。(5)样品含量测定应用融合后的指纹图谱数据，计算样品中指标成分的含量。(6)对上述确定的含量测定方法进行有效性评价，其中包括专属性、准确度、精密度、重复性、稳定性、线性、范围以及耐用性。本专利技术所述甘草药材的质量控制方法，优选的供试品溶液的制备取甘草药材粉末约5g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入水IOOmL,称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇勻，滤过，精密吸取续滤液20mL，加在AB-8树脂柱上，用蒸馏水120mL洗涤，再用100mL95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加20%乙腈使溶解并转移至IOmL量瓶中，加20%乙腈定容至刻度，摇勻，滤过，取续滤液即得；本专利技术所述甘草药材质量控制方法，优选的检测方法用十八烷基键合硅胶为填充剂的Agilent TC-C18色谱柱；以0. 2%。甲酸水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱0 10min 为 5% 10%B，10 61min 为 10% 27%B，61 70min 为 27% 40%B，70 90min 为 40% 50%B ；流速1. OmL/min ；柱温30°C ；DAD检测器在波长254nm、279nm和362 nm下同时进行检测；进样量10 μ L ；理论塔板数计算，应不低于3000 ；本专利技术所述的甘草药材质量控制方法，由分析检测仪器得到254nm、279nm和362 nm 三个波长下的谱图数据，运用信息处理手段全时段融合三个波长下的谱图数据，得到一张能够同时包含三个波长信息的色谱图。本专利技术所述的甘草药材质量控制方法，将254歷、279nm和362 nm三个波长下的谱图数据全时段融合后可获得一组谱图数据。本专利技术所述的甘草药材质量控制方法，得到的指纹图谱数据，可以用于甘草药材的指纹定性分析。本专利技术所述的甘草药材质量控制方法，得到的指纹图谱数据，可以用于甘草药材指标成分的定量分析。本专利技术所述的与现有的中国药典规定的测定方法相比所具有的积极效果在于(1)本专利技术首次公开通过建立甘草药材全时段多波长融合指纹图谱并对其指标成分进行含量测定的方法，此方法对同一样品不同成分多波长同时定性定量分析，从而完善了甘草药材质量控制方法。(2)本专利技术采用现代先进分析检测技术，对甘草药材多个指标成分进行分析检测， 从而获得极其丰富的信息量。(3)本专利技术通过信息处理手段将甘草药材多波长下的色谱图进行全时段融合，在保证数据信息损失最小的前提下，获得一张同时反应多个波长信息的色谱图。(4)本专利技术的质量控制方法，其优点是操作简单，稳定可靠，精密度、重复性、回收率均达到定量分析要求，能够综合宏观地分析甘草药材的质量。(5)本专利技术通过建立甘草药材全时段多波长融合指纹图谱，对甘草药材中的各类成分进行指纹定性和定量分析，较全面真实地揭示甘草药材的内在质量特征，从而保证了甘草药材的安全、有效、可靠、稳定，确保了其质量的均衡稳定和工艺的规范化。附图说明图1为2Mnm波长下对照品甘草苷、异甘草苷、甘草酸单铵盐色谱图。图2为279nm波长下对照品甘草苷、异甘草苷、甘草酸单铵盐色谱图。图3为362nm波长下对照品甘草苷、异甘草苷、甘草酸单铵盐色谱图。图4为甘草苷的紫外扫描图。图5为异甘草苷的紫外扫描图。图6为甘草酸单铵盐的紫外扫描图。图7为甘草药材254nm波长下HPLC指纹图谱。图8为甘草药材279nm波长下HPLC指纹图谱。图9为甘草药材36本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．甘草药材全时段多波长融合指纹图谱的质量控制方法，其特征在于该方法按如下步骤进行：（１）供试品溶液的制备：取甘草药材粉末约５ｇ，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入水１００ｍＬ，称定重量，加热回流２小时，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液２０ｍＬ，加在ＡＢ－８树脂柱上，用蒸馏水１２０ｍＬ洗涤，再用１００ｍＬ９５％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加２０％乙腈使溶解并转移至１０ｍＬ量瓶中，加２０％乙腈定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；（２）对照品溶液的制备：精密称取甘草酸单铵盐对照品、甘草苷对照品和异甘草苷对照品适量，加甲醇分别制成每１ｍＬ含甘草酸单铵盐对照品０．１５４ｍｇ、甘草苷对照品０．５８７ｍｇ和异甘草苷对照品０．３６２ｍｇ的溶液，即得；（３）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂Ａｇｉｌｅｎｔ　ＴＣ－Ｃ１８色谱柱；以０．２‰甲酸水为流动相Ａ，以乙腈为流动相Ｂ，梯度洗脱：０～１０ｍｉｎ为５％～１０％Ｂ，１０～６１ｍｉｎ为１０％～２７％Ｂ，６１～７０ｍｉｎ为２７％～４０％Ｂ，７０～９０ｍｉｎ为４０％～５０％Ｂ；流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ；柱温３０℃；ＤＡＤ检测器在波长２５４ｎｍ　、２７９ｎｍ和３６２　ｎｍ下同时进行检测；进样量１０μＬ；理论塔板数计算，应不低于３０００；（４）全时段多波长融合：采用多波长融合指纹图谱技术将２５４ｎｍ、　２７９ｎｍ和３６２　ｎｍ三个波长下的谱图数据进行全时段融合，得到一张能够同时包含三个波长信息的色谱图；（５）样品含量测定：应用融合后的指纹图谱数据，计算样品中指标成分的含量；（６）对上述确定的含量测定方法进行有效性评价，其中包括专属性、准确度、精密度、重复性、稳定性、线性、范围以及耐用性。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孟宪生，包永睿，姚东，王帅，吴寅萍，
申请(专利权)人：辽宁中医药大学，
类型：发明
国别省市：89