本实用新型专利技术公开了一种检测普氏立克次体病原体抗体的蛋白悬浮芯片系统，包括：芯片基体、加液系统、悬浮芯片检测仪和计算机，芯片基体内装有相关缓冲溶液和待测抗体，相关缓冲液中设置有编码微球，编码微球上包被捕获抗原，加液系统依次向芯片基体中加入生物素标记的二抗、荧光信号检测物，悬浮芯片检测仪包括微细管检测通道和检测激光，编码微球依次通过微细管检测通道，检测激光激发并识别编码微球的颜色及其上待测物的颜色，计算机与悬浮芯片检测仪相连，并记录、分析悬浮芯片检测仪的测量结果。悬浮芯片技术利用微球在溶液中反应，利用激光检测技术，提高了样品检测的准确性和重复性，具有优于片膜芯片的操作简便、重复性好等特点。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本技术涉及一种检测普氏立克次体抗体的蛋白悬浮芯片系统。
技术介绍
普氏立克次体(R. prowazekii)是流行性斑疹伤寒的病原体，立克次体 (Rickettsia)是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物，在形态结构、化学组成及代谢方式等方面均与细菌类似具有细胞壁；以二分裂方式繁殖；含有RNA和DNA两种核酸；由于酶系不完整需在活细胞内寄生；对多种抗生素敏感等。人感染立克次体后，经两周左右的潜伏期后急性发病，主要表现为高热、皮疹，伴有神经系统、心血管系统或其他实质脏器损害的症状。这些症状与普氏立克次体在体内的繁殖及其毒素样物质的作用有关。隐性感染者或病愈病人体内可潜伏立克次体，一般认为这类人可能是普氏立克次体的储存宿主。当机体免疫力降低时，潜伏于巨噬细胞内的立克次体重又繁殖，可导致复发。免疫学方法酶联免疫实验(ELISA)中利用抗原与抗体特异性反应来检测抗原或抗体主要有由双抗原夹心测抗体、双抗体夹心测抗原、竞争法、间接法等。间接法测抗体的原理是特异性抗原结合到固相载体上，然后和待检血清中的相应抗体结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体与免疫复合物中的抗体结合形成酶标记抗体-抗体-固相抗原复合物，加底物显色，判断抗体含量。悬浮芯片(suspension array)也称液相芯片，是20世纪70年代美国Luminex公司研制出的新一代生物芯片技术，利用带编码的微球体作为载体，流式细胞仪作为检测平台，对核酸、蛋白质等生物分子进行大规模测定。目前，该技术已广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、抗体筛选及受体与配体的识别分析等领域。目前发展的悬浮芯片主要是基于实验室检测方法的建立和方法评价及优化，以缩短检测时间，降低方法的检测成本。但是悬浮芯片是否能够检测人血清中的普氏立克次体抗体，其定量检测能力如何，尚缺乏模型和评价。
技术实现思路
本技术的目的在于提供一种检测普氏立克次体病原体抗体的蛋白悬浮芯片系统，该芯片系统包括芯片基体、加液系统、悬浮芯片检测仪和计算机，其中，芯片基体内装有相关缓冲溶液和待测抗体，相关缓冲液中设置有包被捕获抗原的033号编码微球，加液系统与芯片基体连通，以向芯片基体中加入生物素标记的二抗、荧光信号检测物，悬浮芯片检测仪包括微细管检测通道和检测激光，微细管检测通道与芯片基体连通，该微细管检测通道吸入反应后的溶液、以使得每个编码微球依次通过微细管检测通道，检测激光激发并识别编码微球的颜色及其上待测物的荧光信号，计算机与悬浮芯片检测仪相连，并记录、 分析悬浮芯片检测仪的测量结果。进一步，所述相关缓冲溶液包括用于所述待测抗体稀释的样品稀释液、稀释所述编码微球所用的微球稀释液、稀释所述生物素标记的二抗所用的抗体稀释液、每个反应之后洗涤编码微球所用的微球清洗液、SA-PE稀释液、检测缓冲液。进--步，所述捕获抗原优选为普氏立克次体120C蛋白。进--步，所述待测抗体为血清样品。进--步，所述生物素标记的二抗优选为Biotin-SPA和/或Biotin-羊抗人IgG。进--步，所述荧光信号检测物为链亲和素-藻红蛋白。进--步，所述芯片基体为96孔滤板或者微量离心管。进--步，所述检测激光包括用激发所述编码微球基质中的颜色、识别编码微球分类编码以确定检测项目的红色激光，用于激发并识别待测分子的颜色信号、记录信号强弱以检测所述待测抗体的含量的绿色激光。经过大量和深入的研究，对普氏立克次体抗体的蛋白悬浮芯片制备及其检测条件作了实质性的改进和创新，其具有下列优点1、抗原包被量的改进普氏立克次体120C蛋白的包被量是成功检测的关键，本技术对包被微球的抗原包被量进行实质性优化使血清样本的检测效果非常良好，并且包被悬浮芯片所需的抗原包被量很低，本技术的普氏立克次体120C蛋白抗原包被量为0. 1 300 μ g/1. 25 X IO6个编码微球或0. 02 1200ng/2500 5000个微球/测试，而一般的 ELISA试验所需抗原的包被量为1 μ g/测试。2、生物素标记的改进通常，标记抗体需要使用过量的生物素。理论上讲，在检测过程中，过量的生物素因未标记上抗体而不被微球上结合捕获抗体的抗原连接，清洗时被抽滤掉，不会与随后加入的SA-PE反应，不影响检测。但在实际检测过程中，偶尔遇到过检测信号可能过高的现象，因此建议生物素标记抗体后，尽量去除多余的生物素。以标记ang/mL的IgG(分子量 150，000) ImL溶液为例，需加入IOmM生物素溶液约27 μ L。3、检测的灵敏度及动态范围本技术的血清样品普氏立克次体抗体的蛋白悬浮芯片定量检测方法和悬浮芯片的灵敏度为滴度0.000058 ；并且悬浮芯片方法动态检测范围为1 163840 1 640。4、方法的特异性本技术通过选用普氏立克次体的120C蛋白为包被抗原，以兔抗普氏立克次体IgG为待测抗体，以生物素化-SPA为检测物。本研究试验证明，在存在兔抗圣路易斯脑炎NSl血清、兔抗天花血清、鼠抗西尼罗E血清、兔抗委内瑞拉马脑炎血清、兔抗Q热立克次体血清、兔抗马秋波抗体、兔抗土拉抗体、兔抗登革热血清、兔抗东方马脑炎抗体、兔抗西方马脑炎抗体、兔血清、大鼠血清、小鼠血清、BSA、酪蛋白、胰蛋白胨等干扰抗体或蛋白存在条件下本方法具有良好的特异性。5、样品的检测能力本技术评价了悬浮芯片方法对人血清的检测能力。通过人血清的检测，初步证实了该方法在检测人血清中普氏立克次体抗体的实用性。附图说明图1为本技术结构示意4图2为包被有普氏立克次体120C蛋白的033号微球检测普氏立克次体抗体示意图1 ；图3为包被有普氏立克次体120C蛋白的033号微球检测普氏立克次体抗体示意图2;图4为蛋白悬浮芯片方法检测兔抗普氏立克次体IgG剂量-反应标准曲线。具体实施方式如图1至图4所示，本技术一种检测普氏立克次体病原体抗体的蛋白悬浮芯片系统，包括芯片基体1、加液系统2、悬浮芯片检测仪3和计算机4，其中，芯片基体1为 96孔滤板或者微量离心管，其内装有相关缓冲溶液和待测抗体，相关缓冲液中设置有033 号编码微球，编码微球上包被有普氏立克次体120C蛋白，用于捕获待检测血清样品中的待测抗体，如果样品中有普氏立克次体抗体，普氏立克次体抗体与编码微球上的普氏立克次体120C蛋白结合，再加入带有生物素标记的二抗，形成编码微球-普氏立克次体120C蛋白-普氏立克次体抗体-二抗-生物素复合物，最后加入链亲和素-藻红蛋白，链亲和素与生物素结合，形成编码微球-普氏立克次体120C蛋白-普氏立克次体抗体-二抗-生物素-链亲和素-藻红蛋白复合物，通过悬浮芯片检测仪对藻红蛋白荧光信号的检测来达到对血清样品中普氏立克次体抗体的检测，如果血清样品中没有普氏立克次体抗体，包被有普氏立克次体120C蛋白的编码微球不会与后面加入的生物素标记的二抗、链亲和素-藻红蛋白结合，最后通过悬浮芯片检测仪器进行检测时无荧光信号或应该信号非常弱。上述芯片系统中，编码微球在微球稀释液，待测抗体在样品稀释液中，生物素标记的二抗在抗体稀释液中，荧光信号检测物在SA-PE稀释液中，悬浮芯片检测仪检测时编码微球复合物在检测缓冲液中，每步结合之后均用微球清洗液洗涤微球，使得没有结合的物质本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种检测普氏立克次体病原体抗体的蛋白悬浮芯片系统，其特征在于，该芯片系统包括：芯片基体、加液系统、悬浮芯片检测仪和计算机，其中，芯片基体内装有０３３号编码微球，加液系统与芯片基体连通，以向芯片基体中加入生物素标记的二抗、荧光信号检测物，悬浮芯片检测仪包括微细管检测通道和检测激光，微细管检测通道与芯片基体连通，该微细管检测通道吸入反应后的溶液、以使得每个编码微球依次通过微细管检测通道，检测激光激发并识别编码微球的颜色及其上待测物的荧光信号，计算机与悬浮芯片检测仪相连，并记录、分析悬浮芯片检测仪的测量结果。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王静，杨永莉，杨宇，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：实用新型
国别省市：11
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