一种管道化鸡冠提取玻璃酸钠(透明质酸钠)的制备方法技术

本发明专利技术公开一种管道化鸡冠提取玻璃酸钠(透明质酸钠)的制备方法，该方法以鸡冠为原料，经过加热病毒灭活，加热去脂，组织消化，季铵盐分离，乙醇提纯、除菌、真空干燥制得无菌玻璃酸钠(透明质酸钠)。本发明专利技术制得产品质量稳定，纯度高，收率可达到千分之六以上，成本大幅下降。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药
，尤其涉及从动物组织中(鸡冠)提取玻璃酸钠 (透明质酸钠)的制备方法。
技术介绍
玻璃酸钠(透明质酸钠)是存在于鸡冠和动物结缔组织中的一种高分子多糖体， 它是从动物结缔组织中萃取精制获得的，具有良好的保水性和润滑性的玻璃酸或玻璃酸钠 (透明质酸钠)。目前已广泛用作化妆品的主要原料和眼科手术用的粘弹剂、骨关节腔的润 滑剂，以及妇科、外科手术中的防粘连剂。为了达到适用于上述各领域的目的，就需要制取 高纯度的玻璃酸钠(透明质酸钠)。
技术实现思路
本专利技术涉及，包括以下 步骤1)鸡冠中病毒灭活的处理鸡冠中病毒在68 98°C灭活，灭活时间为1 4小时。2)鸡冠中脂肪的处理将绞碎肉鸡冠置于反应罐中，加纯化水浸泡，去除上层油脂。病毒灭活期间不断去 除上层油脂。3)酶解木瓜酶酶解温度控制在48 68°C，pH = 5 7，缓慢搅拌，加木瓜酶每公斤鸡冠 200 440万单位，12 18小时，期间不断去除上层油脂。胰酶酶解加氢氧化钠溶液调节pH至7 9，温度35 50°C，加胰酶粉每公斤鸡 冠0.75 1.6万单位。酶解2 6小时，酶解期间，控制pH为7 9。4)卤代烷吡啶盐的纯化两次添加卤代烷吡啶盐进行提纯，将两次提纯物分别用盐溶液进行复溶。5)乙醇沉淀将上述提取物的复溶液用乙醇沉淀收取，进行两次乙醇沉淀。将两次提纯物分别 用不同盐浓度进行复溶。6)预过滤及除菌过滤乙醇提取物进行活性炭吸附去内毒素和色素等杂质预过滤，再进行0.22U微孔滤 器除菌过滤，除菌液脱水，真空干燥制得玻璃酸钠(透明质酸钠)。本专利技术从动物组织中提取的玻璃酸钠(透明质酸钠)制成的产品，用于人体时具 有更好的生物相容性，但是在另一方面，它们应用到人体则会增加病毒传播和免疫原性等 方面的安全风险。因此，本专利技术的目的在于管道化鸡冠提取玻璃酸钠(透明质酸钠)的制造 过程中，增加病毒灭活的处理，将动物组织中可能存在的病毒灭活，提高产品的安全性。主要工艺参数为纯蒸汽加热68-98°C灭活，灭活时间为1 4小时。本专利技术中对动物组织中存在的脂肪通过物理加热的方法去除，避免了传统工艺中 采用化学溶剂如丙酮去脂。提高产品生产的安全性，减少对环境的污染。主要工艺为将绞 碎鸡冠置于反应罐中，加纯化水浸泡，去除上层油脂。病毒灭活期间不断去除上层油脂。本专利技术中的组织消化，采用木瓜酶和胰酶进行酶消化。对鸡冠组织中蛋白质去除 更彻底。主要工艺参数为木瓜酶酶解温度控制在48 68°C，pH = 5 7，缓慢搅拌，加木瓜酶每公斤鸡冠 200 440万单位，12 18小时，期间不断去除上层油脂。胰酶酶解加氢氧化钠溶液调节pH至7 9，温度35 50°C，加胰酶粉每公斤鸡 冠0.75 1.6万单位。酶解2 6小时，酶解期间，控制pH为7 9。本专利技术中采用两次CPC沉淀，沉淀完全后，收集沉淀，用NaCl溶液复溶，加硅藻土 过滤ο本专利技术中采用两次乙醇沉淀90%以上乙醇加至过滤料液中，沉淀完全后，收集沉 淀。0. 4 lmol/L NaCl溶液中复溶。本专利技术中第二次乙醇沉淀的复溶溶液用活性炭吸附(0. 2% -0. 25% )，50°C以上 吸附不少于1小时，搅拌吸附后，进行除活性炭过滤，收集滤液。以上滤过液，经0.22um微 孔滤器过滤，收集滤液。本专利技术在搅拌状态下加2-2. 5倍量体积左右95%乙醇，充分沉淀后加适量体积的 95%除菌乙醇固化，经固化的沉淀物于三合一机器内洗涤、脱水、干燥。即得玻璃酸钠(透 明质酸钠)。本专利技术采用管道化制备，每Ikg鸡冠经上述方法可制得玻璃酸钠(透明质酸 钠)5 7g，比非管道生产方法提高2 3倍，单批产量达4kg以上，比非管道生产方式提高 20倍。下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术 而不用于限制本专利技术的范围。实施例1将绞碎肉鸡冠置于反应罐中，加纯化水浸泡，去除上层油脂。88°C灭活2小时。病 毒灭活期间不断去除上层油脂。温度控制在58°C，PH6.0，缓慢搅拌，加木瓜酶每公斤鸡冠 200 440万单位，16小时，期间不断去除上层油脂。加氢氧化钠溶液调节pH至8. 0，温度 450C，加胰酶粉每公斤鸡冠0. 75 1. 6万单位。酶解4小时，酶解期间，控制pH为8. 0。两 次添加卤代烷吡啶盐进行提纯，将两次提纯物分别用盐溶液进行复溶。将上述提取物的复 溶液用乙醇沉淀收取，进行两次乙醇沉淀。将两次提纯物分别用不同盐浓度进行复溶。乙醇 提取物进行活性炭吸附去内毒素和色素等杂质预过滤，再进行0. 22u微孔滤器除菌过滤， 除菌液脱水，真空干燥制得玻璃酸钠(透明质酸钠)。实施例2将绞碎肉鸡冠置于反应罐中，加纯化水浸泡，去除上层油脂。78°C灭活1.5小时。 病毒灭活期间不断去除上层油脂。温度控制在48°C，PH5.0，缓慢搅拌，加木瓜酶每公斤鸡 冠200 440万单位，12小时，期间不断去除上层油脂。加氢氧化钠溶液调节pH至7. 0，温 度50°C，加胰酶粉每公斤鸡冠0. 75 1. 6万单位。酶解3小时，酶解期间，控制pH为8. 0。两次添加卤代烷吡啶盐进行提纯，将两次提纯物分别用盐溶液进行复溶。将上述提取物的 复溶液用乙醇沉淀收取，进行两次乙醇沉淀。将两次提纯物分别用不同盐浓度进行复溶。 乙醇提取物进行活性炭吸附去内毒素和色素等杂质预过滤，再进行0. 22u微孔滤器除菌过 滤，除菌液脱水，真空干燥制得玻璃酸钠(透明质酸钠)。实施例3将绞碎肉鸡冠置于反应罐中，加纯化水浸泡，去除上层油脂。70°C灭活2小时。病 毒灭活期间不断去除上层油脂。温度控制在68°C，PH7.0，缓慢搅拌，加木瓜酶每公斤鸡冠 200 440万单位，16小时，期间不断去除上层油脂。加氢氧化钠溶液调节pH至9. 0，温度 500C，加胰酶粉每公斤鸡冠0. 75 1. 6万单位。酶解4小时，酶解期间，控制pH为8. 0。两 次添加卤代烷吡啶盐进行提纯，将两次提纯物分别用盐溶液进行复溶。将上述提取物的复 溶液用乙醇沉淀收取，进行两次乙醇沉淀。将两次提纯物分别用不同盐浓度进行复溶。乙醇 提取物进行活性炭吸附去内毒素和色素等杂质预过滤，再进行0. 22u微孔滤器除菌过滤， 除菌液脱水，真空干燥制得玻璃酸钠(透明质酸钠)。病毒灭活的效果验证实施例4用本专利技术方法制得的玻璃酸钠(透明质酸钠)取至生产过程中88°C加热处理之 前的中间品，批号分别为090622、090707、090714的玻璃酸钠(透明质酸钠)中间品，送中 国药品生物制品检定所委托进行玻璃酸钠(透明质酸钠)病毒灭活效果验证。经中国药品生物制品检定所病毒灭活效果验证，结果如下采用指示病毒1)呼肠孤病毒III型(Reo3)属呼肠病毒科，为双股RNA病毒，无囊膜，在 ph2. 2-8. 0稳定，对有机溶剂有抵抗力，较耐热。2)伪狂犬病毒(PRV)属疱疹病毒科，为双股DNA病毒，有囊膜，对乙醚、氯仿等脂 溶剂，福尔马林和紫外线照射等敏感，是疱疹病毒中抵抗力较强的一种。3)水泡性口炎病毒(VSV)属弹状病毒科，为单股负链RNA病毒，有囊膜，可见光、 紫外光及脂溶剂能使其灭活，不耐酸。对理化学因子的抵抗力与口蹄疫病毒相似。4)猴空泡病毒40 (SV40)属乳多空病毒科，为双股D本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种管道化鸡冠提取玻璃酸钠（透明质酸钠）的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：１）鸡冠中病毒灭活的处理鸡冠中病毒在６８～９８℃灭活，灭活时间为１～４小时。２）鸡冠中脂肪的处理将绞碎肉鸡冠置于反应罐中，加纯化水浸泡，去除上层油脂。病毒灭活期间不断去除上层油脂。３）酶解木瓜酶酶解：温度控制在４８～６８℃，ｐＨ为５～７，缓慢搅拌，加木瓜酶每公斤鸡冠２００～４４０万单位，１２～１８小时，期间不断去除上层油脂。胰酶酶解：加氢氧化钠溶液调节ｐＨ至７～９，温度３５～５０℃，加胰酶粉每公斤鸡冠０．７５～１．６万单位。酶解２～６小时，酶解期间，控制ｐＨ为７～９。４）卤代烷吡啶盐的纯化两次添加卤代烷吡啶盐进行提纯，将两次提纯物分别用盐溶液进行复溶。５）乙醇沉淀将上述提取物的复溶液用乙醇沉淀收取，进行两次乙醇沉淀。将两次提纯物分别用不同盐浓度进行复溶。６）预过滤及除菌过滤：乙醇提取物进行活性炭吸附去内毒素和色素等杂质预过滤，再进行０．２２ｕ微孔滤器除菌过滤，除菌液脱水，真空干燥制得玻璃酸钠（透明质酸钠）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：任彩霞，张伟群，范素俊，梁文峰，侯永泰，吴剑英，孔淑静，
申请(专利权)人：上海昊海生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：31