从川芎提取物中制备洋川芎内酯I的方法技术

本发明专利技术公开了一种从川芎提取物中制备洋川芎内酯I的方法，包括步骤：(1)大孔树脂纯化；(2)硅胶色谱纯化；(3)反相色谱纯化，其中，所述硅胶色谱纯化步骤与反相色谱纯化步骤的顺序能颠倒。本发明专利技术是一种制备洋川芎内酯I的简化工艺，能极大地提高洋川芎内酯I得率，可用于洋川芎内酯I的工业制备。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种洋川芎内酯Ksenkyimolide I)的制备方法，特别是涉及一种从 川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)提取物中分离制备洋川芎内酯I的方法。
技术介绍
川弯(Ligusticum chuanxiong Hort.)为伞形科藁本属植物，其药用部位为根茎。 川芎为我国传统中药，具有活血行气，祛风止痛的功效，东汉《神农本草经》将其列为上品， 是治疗抑郁症与偏头痛的常用中药。苯酞类化合物是存在于川芎中的一类化合物，被证明在心血管、血液和平滑肌方 面有活性。其中研究较多的丁基苯酞具有抗脑缺血、保护脑外伤组织等诸多活性，可以被认 为是川芎药效的物质基础之一。洋川芎内酯KSenkynolide I，式1)是自川芎中分离得到的一种苯酞类化合物， 具有很好的脂溶性和水溶性，能够迅速进入血液和脑脊液，具有一定的开发新药的潜力。其 药理作用主要包括其能够减轻ConA引红细胞的变形性损伤，降低其聚集性时珍国医国 药，2003，14(1 :738 739;抑制豚鼠心肌细胞及人神经细胞瘤的钙内流；减低缺血再灌 注动物模型脑干中N0，并抑制NO合酶的活性(Clin ExpPharmacology Physion, 1999, 26 845 846)。目前技术公开洋川芎内酯I的制备方法色谱，2004,22(1) :41 43是通过石油 醚及乙酸乙酯依次萃取，然后依次通过硅胶柱、高效液相制备色谱及MCI gelCHP-20柱分离 而得。该方法非常繁琐，不利于工业化生产，且产率极低(文献报道仅为百万分之一点九)。 因此洋川芎内酯I分离手段的不足是限制其医药用途的一个主要原因。CrC-I ρHO、、·^^ OH O式1
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种从川芎提取物中制备洋川芎内酯I的方法， 以解决现有技术中制备手段繁琐，产率极低的技术问题。为解决上述技术问题，本专利技术的从川芎提取物中制备洋川芎内酯I的方法，包括 步骤(1)大孔树脂纯化步骤将川芎提取物的水溶液(该水溶液浓度相当于生药0. 5g · ml—1 1. Og · ml—1)上HPD-100大孔树脂柱大孔树脂与原药材(川芎)的重量比为0.3 1 0.5 1，大孔树 脂柱中的吸附流速为1 2BV · tT1，BV指柱体积，用体积浓度为0% 10%乙醇洗脱4 6BV后弃去洗脱液，再用体积浓度为40% 50%乙醇洗脱4 6BV，收集洗脱液，减压回收 溶剂，得经大孔树脂纯化的浸膏；(2)硅胶色谱纯化步骤将步骤(1)所得浸膏用硅胶柱色谱分离(硅胶为100 200目或200 300目柱 层析硅胶或薄层层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为1 30 1 100)，并以氯仿-甲醇 体积比为50 1 20 1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样后于紫外灯254nm 下观察，收集含有洋川芎内酯I的部分，并减压回收溶剂，得经硅胶色谱纯化的浸膏；(3)反相色谱纯化步骤将步骤⑵所得浸膏用C18反相硅胶柱色谱分离(浸膏样品与C18反相硅胶重量比 为=1 30 1 50)，并以甲醇-水体积比为15 85 25 75洗脱4 6BV后弃去 洗脱液，再用甲醇-水体积比为30 70 40 60洗脱4 6BV，收集洗脱液并减压回收 溶剂，即得纯化的洋川芎内酯I;其中，所述硅胶色谱纯化步骤与反相色谱纯化步骤的顺序能够颠倒。所述步骤⑴中川芎提取物中所用的提取溶剂为体积浓度为0% 95%的乙醇溶液。采用本专利技术的方法依次经(1)大孔树脂纯化、(2)硅胶色谱纯化、(3)反相色谱纯 化，或依次经(1)大孔树脂纯化、(2)反相色谱纯化、(3)硅胶色谱纯化，能极大地提高得率， 因此，该方法是一种制备洋川芎内酯I的简化工艺，可用于洋川芎内酯I的工业制备。具体实施例方式下面将结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。实施例1洋川芎内酯I的制备川芎饮片1kg，去除杂质后粉碎成粉末，体积浓度为95%乙醇IOL回流提取2次， 每次2小时，合并提取液，回收溶剂得浸膏A约200g。将浸膏A用去离子水稀释至约2000mL (该水溶液浓度相当于生药0. 5g · ml—1)后 上HPD-100大孔树脂柱大孔树脂与原药材(川芎饮片)的重量比为0.3 1，大孔树脂柱 规格Φ150*1500πιπι，吸附流速为2BV化―1，用去离子水洗脱6BV后弃去洗脱液，再用体积浓 度为50%乙醇洗脱4BV，收集50%乙醇洗脱液，减压回收溶剂得浸膏B约35g。将浸膏B用硅胶柱色谱分离(硅胶为100 200目或200 300目柱层析硅胶， 浸膏B样品与硅胶重量比为1 30，硅胶柱规格Φ 100*1000mm)，并以氯仿-甲醇体积比为 20 1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿甲醇体积比为10 1展开后 置于紫外灯254nm下观察，收集含有洋川芎内酯I的部分，并减压回收溶剂，得经硅胶色谱 纯化的浸膏，减压回收溶剂得浸膏C约4g。将浸膏C用反相C18硅胶柱色谱分离(浸膏C样品与C18反相硅胶重量比为= 1 50，Cw反相硅胶柱规格Φ30*300mm)，并以甲醇-水体积比为15 85洗脱6BV后弃去 洗脱液，再用甲醇-水体积比为40 60洗脱4BV，收集洗脱液并减压回收溶剂，即得纯化的 洋川芎内酯I约1.3g。最终所得洋川芎内酯I经常规公知的NMR方法鉴定13C-NMR (⑶Cl3，400M) 169. 3 (C-I)，153. 0 (C-3)，148. 0 (C_3a)，18. 8 (C-4)，26. 3 (C-5) ,71. 4 (C-6)，67. 3 (C-7)， 125. 9 (C-7a), 114. 2 (C-8)，28. 0 (C-9)，22. 2 (C-10)，13. 8 (C-Il) ； δ Η4· 43 (1Η, d，J = 5. IHz， H-7)[phytochemisrty, 1996,41 (1) 233 236，并经高效液相法Kromasil-Cw 柱 (4. 6mm*250mm)，检测波长278nm，流动相体积百分比为1 %的冰醋酸-甲醇(体积比 55 45)，流速lmLiirr1，进样量10μ1，柱温25°C，理论塔板数以洋川芎内酯I计不低于 5000检测含量在98%以上，其得率为0. 13%。实施例2洋川芎内酯I的制备川芎饮片1kg，去除杂质后粉碎成粉末，体积浓度为50%乙醇IOL回流提取2次， 每次2小时，合并提取液，回收溶剂得浸膏A约200g。将浸膏A用去离子水稀释至约IOOOmL(该水溶液浓度相当于生药1. Og · πιΓ1) 后上HPD-100大孔树脂柱(大孔树脂与原药材的重量比为0.5 1，大孔树脂柱规格 Φ 150* 1500mm)，吸附流速为IBV化―1，用体积浓度为10%乙醇洗脱4BV后弃去洗脱液，再用 体积浓度为40%乙醇洗脱6BV，收集40%乙醇洗脱液，减压回收溶剂得浸膏B约30g。将浸膏B用反相C18硅胶柱色谱分离(浸膏B样品与C18反相硅胶重量比为= 1 30，Cw反相硅胶柱规格Φ50*500mm)，并以甲醇-水体积比为25 75洗脱4BV后弃去 洗脱液，再用甲醇-水体积比为3本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．从川芎提取物中制备洋川芎内酯Ｉ的方法，其特征在于：包括步骤：（１）大孔树脂纯化步骤将川芎提取物的水溶液上大孔树脂柱，用体积浓度为０％～１０％乙醇洗脱４～６ＢＶ后弃去洗脱液，再用体积浓度为４０％～５０％的乙醇洗脱４～６ＢＶ，收集洗脱液，减压回收溶剂，得经大孔树脂纯化的浸膏；（２）硅胶色谱纯化步骤将步骤（１）所得浸膏用硅胶柱色谱分离，并以氯仿－甲醇体积比为５０∶１～２０∶１进行洗脱，将洗脱液硅胶板点样，收集含有洋川芎内酯Ｉ的洗脱液部分，减压回收溶剂，得经硅胶色谱纯化的浸膏；（３）反相色谱纯化步骤将步骤（２）所得浸膏用反相Ｃ１８硅胶柱色谱分离，并以甲醇－水体积比为１５∶８５～２５∶７５洗脱４～６ＢＶ后弃去洗脱液，再用甲醇－水体积比为３０∶７０～４０∶６０洗脱４～６ＢＶ，收集洗脱液并减压回收溶剂，即得纯化的洋川芎内酯Ｉ；其中，所述硅胶色谱纯化步骤与反相色谱纯化步骤的顺序能颠倒。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：阮克锋，冯怡，徐德生，梁爽，
申请(专利权)人：上海张江中药现代制剂技术工程研究中心，
类型：发明
国别省市：31