他莫昔芬用药靶向位点检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测他莫昔芬用药靶向位点检测试剂盒。该试剂盒包括检测他莫昔芬用药靶向位点CYP2D6基因多态性位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反应缓冲液、去离子水。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本专利技术涉及一种检测他莫昔芬用 药靶向位点检测试剂盒。
技术介绍
他莫昔芬(Tamoxifen，ΤΑΜ)是一种非留体抗雌激素药物，在临床已广泛应用于乳 腺癌的预防和治疗。其结构与雌激素相似，在靶器官内竞争雌激素受体(ER)，减少细胞质 内ER的含量，阻止核内雌激素生成、基因转录和ER再合成。在组织培养中可见ER阳性细 胞的生长可直接被TAM所抑制。TAM还通过作用于信号转导过程的MAPK通路、阻断蛋白激 酶C介导的ERK激活、激活TGF-β (转化生长因子来抑制肿瘤细胞的生长。CYP2D6基因参与约25%临床常用药物的代谢，包括β受体阻滞剂、抗抑郁药物、 抗精神病药物及化疗药物等。由于CYP2D6基因存在遗传多态性导致个体之间CYP2D6酶活 性有差异，出现药物代谢能力的多态性，导致病人用药时很难获得最佳血药浓度，如血药浓 度过低无法有效发挥药物疗效或浓度过高出现毒副作用。他莫西芬作为无活性的前药，在 体内主要由CYP2D6催化形成有活性的化学成分Endoxifen，发挥药物疗效，因此CYP2D6基 因多态性导致的酶活性改变将直接影响他莫西芬用药效果。所以CYP2D6基因的分型检测 对于临床他莫西芬用药指导有重要意义。CYP2D6基因呈现高度多态性，目前已知有63种主要的等位基因，导致酶活性增 加、降低或缺失。CYP2D6等位基因活性的改变是由于基因突变造成表达产物酶分子的改变， 从而产生代谢缺陷。基因突变的主要方式是碱基缺失或替换引起读码框架移位，或者大片 段基因的丢失。
技术实现思路
本专利技术提供一种检测他莫昔芬用药靶向位点的试剂盒。该试剂盒包括检测CYP2D6基因多态性位点的特异性引物对及特异性荧光探针 对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反应缓冲液、去离子水。本试剂盒中所述的特异性荧光探针对是能够轻易完成设计的，特异性荧光探针对 可用常规的探针合成技术进行合成。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。下列实施例中未注明具体条件的实验 方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。实施例检测试剂盒的使用步骤1:DNA模板的抽取用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组DNA。步骤2 荧光定量PCR反应使用检测试剂盒中的荧光定量PCR套装，进行荧光定量PCR反应，反应的体系为总 体积10 μ 1，包含浓度为20ng/ μ 1的DNA模板2 μ 1、1 μ 1 IOX荧光定量PCR反应缓冲液、 0. 1 μ 1 25mM dNTP 混合液、0. 6 μ 1 25mMMgCl2 溶液、0. 025 μ 1 (5units/ μ 1) Taq DNA 聚合 酶、20 μ M的有义引物和反义引物各0. 225 μ 1、10 μ M的带VIC荧光探针和带FAM荧光探针 各0. 25μ 1，去离子水5. 325 μ 1。在PCR扩增仪上进行反应，反应条件为50°C、2分钟，95°C、10分钟，进行60个循环 的95°C、30秒，60°C、1分钟。反应结束后在荧光定量PCR仪上读取样品荧光量。步骤3:基因型分析根据试剂盒使用说明书标示的基因分型图示对SNP位点进行基因型分析。熟悉荧光定量PCR技术的本领域技术人员能够通过辨识荧光定量PCR仪上显示 的最终样品荧光量，根据不同序列探针荧光信号的强弱即可确定所检测的SNP位点的基因 型。权利要求1. 一种检测他莫昔芬用药靶向位点检测试剂盒，包括特异性引物对及特异性荧光探针 对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、荧光定量PCR反应缓冲液、去离子水，其特征在于所 述的特异性引物对及特异性荧光探针对是针对CYP2D6基因多态性位点设计的。全文摘要本专利技术公开了一种检测他莫昔芬用药靶向位点检测试剂盒。该试剂盒包括检测他莫昔芬用药靶向位点CYP2D6基因多态性位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反应缓冲液、去离子水。文档编号C12Q1/68GK102108386SQ200910200490公开日2011年6月29日 申请日期2009年12月23日 优先权日2009年12月23日专利技术者冯哲民, 贺宪民, 邹祖烨 申请人:上海主健生物工程有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种检测他莫昔芬用药靶向位点检测试剂盒，包括特异性引物对及特异性荧光探针对、Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰ混合液、ＭｇＣｌ２溶液、荧光定量ＰＣＲ反应缓冲液、去离子水，其特征在于：所述的特异性引物对及特异性荧光探针对是针对ＣＹＰ２Ｄ６基因多态性位点设计的。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯哲民，邹祖烨，贺宪民，
申请(专利权)人：上海主健生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：31