本发明专利技术公开了一种癌胚抗原化学发光定量检测试剂盒，该试剂盒包括癌胚抗原检测反应板，反应板包被有抗癌胚抗原抗体。癌胚抗原定量检测试剂盒，还包括：酶结合物，发光底物，校准品，质控品，浓缩洗涤液。本发明专利技术可以专一的定量检测出病人血清癌胚抗原的含量，用于肿瘤高危人群的筛查(包括乳腺癌、肺癌、胃癌和结肠直肠癌)，能够对癌症患者病况进行连续监测，为病人治疗提供辅助信息。与传统的ELISA技术相比，本发明专利技术不仅保留了ELISA技术的高度特异性，检测结果的稳定性、可靠性和操作的简便性，同时采用的化学发光法能提高检测的灵敏度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外临床检验和化学发光免疫检测领域，尤其涉及一种用于定量检测 肿瘤指标癌胚抗原(CEA)的试剂盒。
技术介绍
癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)是一种分子量约为22KD的酸性糖蛋 白。CEA的编码基因位于19号染色体，是胚胎性致癌抗原。CEA主要存在于胎儿消化道上 皮组织、胰脏和肝脏，在正常成人血清中含量极低，而失去极性的癌细胞分泌CEA进入血液 和淋巴，导致血中CEA水平增高。CEA主要存在于结肠癌、胰腺癌、胃癌、肝癌等组织中，但在 患肺癌、乳腺癌时，也有不同程度的提高。CEA广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌中，如胃癌、大肠癌、肝癌、胰腺癌，也可 存在于小细胞肺癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌中。因此，检测血清中CEA含量对上述癌症的诊 断具有辅助价值。CEA的临床意义为(1)用于结肠直肠癌、胃癌、胰癌、肝细胞癌、肺癌、乳癌以及甲状腺髓质癌的临床 监测。①胰液和胆汁内CEA定量可以用于诊断胰腺或胆道癌。②浆液性渗出液的CEA定量可以作为细胞学检查的辅助手段。③尿液CEA的定量可以作为诊断膀胱癌预后的参考。④血清中CEA的定量结合甲状腺降钙素测定，有助于甲状腺髓样癌的诊断和复发 的估计。(2)用于预测恶性肿瘤的预后CEA浓度越低说明病程较早，治疗效果好，存活时 间长。(3)可以检测疗效治疗后血清水平将下降至正常水平，如复发或治疗失败将两 次上升。(4)可以跟踪复发治疗后CEA又复升高，提示有转移可能。与目前常用的酶联免疫(ELISA)检测方法相比，化学发光免疫分析既具有放射免 疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作。检测过程中不 使用有害的试剂，试剂保持期长，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。在化学 发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统的基本原 理是ELISA。抗原或抗体结合到某种固相载体表面，待测样品中的抗体或抗原按一定程序与 结合到固相载体上的抗原或抗体反应形成抗原-抗体复合物。再加入酶标的抗原或抗体与 其反应，底物在酶的催化下变成有色产物，通过分析有色产物检测待测样本中物质。化学发 光系统的原理在于免疫反应中的酶作用于发光底物。发光底物在酶的作用下，底物发生化 学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基 态时，可同时发射出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样 品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。
技术实现思路
为快速、高效的定性、定量检测肿瘤标志物CEA，本专利技术提供一种用于定性、定量检 测肿瘤标志物CEA的化学发光免疫分析定量检测试剂盒。本专利技术的技术方案如下一种癌胚抗原化学发光定量检测试剂盒，包括反应板，酶结合物，发光底物，校准 品，质控品，浓缩洗涤液，所述的反应板包被有抗癌胚抗原抗体。所述的校准品以癌胚抗原纯品配制，浓度为0、5、20、40、80、160ng/ml。所述的质控品以癌胚抗原纯品配制，由质控品I和质控品II两部分组成，质控品 I的浓度为3-40ng/ml，质控品II的浓度为45-155ng/ml。所述的质控品I的浓度优选为20ng/ml，质控品II的浓度为优选80ng/ml。所述的酶结合物为HRP标记的抗癌胚抗原抗体，所述的反应板材质是不透明的聚 苯乙烯或聚乙烯，所述的发光底物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物，所述的浓缩洗涤液是 pH7. 0-pH8. 0的中性缓冲液。本专利技术提供的癌胚抗原(CEA)化学发光定量检测试剂盒具有以下优越性1.本专利技术可定性、定量的检测病人癌胚抗原的含量，并通过癌胚抗原的含量多少 诊断病情，判断病人病情发展、变化。2.本专利技术采用化学发光免疫分析技术，既保留了酶联免疫的操作简便、快速的特 点，又具有放射免疫的高灵敏度，易于标准化操作，适合在医院普及、推广使用。3.本专利技术通过检测发光信号值分析显色底物，大大提高了检测的灵敏性，与 ELISA法相比，其分析灵敏度大幅度提高。4.试剂盒制作工艺简单，操作安全，检测所需样本量少、时间短，实用性强。 附图说明图1 CEA化学发光定量检测试剂盒临界值的确定图2癌胚抗原化学发光定量检测试剂盒与Roche试剂盒的比较具体实施例方式实施例1 制备本专利技术的癌胚抗原化学发光定量检测试剂盒1.固相包被板的制备1)包被取 lmol/L Na2HP04 77. 4ml 和 lmol/L NaH2P04 22. 6ml 混勻，加入去离子 水定容至IOOOml即成10倍包被液，临用前稀释十倍，加入适量抗CEA单抗混勻，然后加入 到微孔板板孔中，100 μ 1/孔，4°C 16小时；2)封闭弃去包被液，在吸水纸上拍干，加入含有3% BSA和0.05%防腐剂 (Procl in 300)的磷酸盐缓冲液(pH 7. 4), 200 μ 1/ 孔，37°C 2 小时；3)封袋弃去封闭液，在吸水纸上拍干，室温下于真空干燥箱中抽5小时，立即进 行真空封袋，检查有无漏气，如有重新封袋，贴上标签后于2-8°C保存。2.酶标CEA单克隆抗体的制备抗CEA单抗用过碘酸盐氧化法与辣根过氧化物酶交联，通过方阵滴定，确定酶标抗体的使用浓度。加入甘油，_20°C以下保存。3. CEA校准品的制备用含有3% BSA和0. 05%防腐剂(Proclin 300)的磷酸盐缓冲液(pH 7. 4)稀释 CEA纯品(购自瑞典康乃格)，分装0、5、20、40、80、160ng/ml。4. CEA质控品的制备用含有3 WBSAa^海藻糖和0.05%防腐剂(Proclin 300)的磷酸盐缓冲液(pH 7. 4)稀释CEA纯品配制质控品1，2。浓度分别为20ng/ml和80ng/ml。5.化学发光底物液购买(购自ThermoFisher)商品化发光底物液进行分装。6.浓缩洗涤液取NaCl 170g，吐温-20 IOml加水定容至IL即成，临用前稀释20倍。7.半成品及成品组成上述步骤所得产品分装后即为半成品。抽检合格后组装成试剂盒成品，成品还需 抽检，合格后才能出厂。综上，本专利技术的研究过程中，本专利技术的专利技术人首先对本专利技术所用的原材料进行了 筛选实验和质量鉴定，包括标记抗体及包被抗体的活性，载体的颜色、吸附性和变异大小， 化学发光的发光强度、持续时间。然后对包被方法进行了研究，用不同的包被缓冲液和保护 液进行了实验，选出最适合的包被缓冲液和保护液，通过抗体不同包被浓度实验，找到最佳 的浓度条件，同时也对真空干燥的时间和温度也进行了研究，最后确定了干燥时间最短，稳 定性最好的时间。对于HRP的标记可以有不同的方法，通过反复探索和对比实验最终找到 简便，产率高，成本低，质量可靠的标记方法。实施例2 本专利技术的试剂盒的使用方法以实施例1制备的CEA化学发光定量检测试剂盒的具体操作如下1.试剂、样本准备1)试剂准备①试剂盒置于室温(1816°C )平衡20分钟。②从试剂盒中取出浓缩洗涤液，用纯化水1 20稀释后加入洗板机的洗液瓶中。2)样本准备使用前将待测的合格血清或血浆置于室温(1846°C )平衡20分钟。2.试验条件在室温(1816°C )严格按照试剂盒说明书进行操作。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种癌胚抗原化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，包括反应板，酶结合物，发光底物，校准品，质控品，浓缩洗涤液，所述的反应板包被有抗癌胚抗原抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，穆宇豪，孙向宇，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31
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