本发明专利技术公开了一种用于糖链抗原15-3检测的化学发光定量检测试剂盒，该试剂盒包括CA15-3检测反应板，反应板包括有CA15-3抗体。CA15-3化学发光定量检测试剂盒还包括：酶结合物，发光底物，校准品，质控品，浓缩洗涤液。本发明专利技术可以专一地定量检测出病人血清CA15-3的含量，判断转移性乳腺癌预后和对转移性乳腺癌的治疗检测，同时也能诊断转移性乳腺癌。与传统的ELISA技术相比，本发明专利技术不仅保留了ELISA技术的高度特异性，检测结果的稳定性、可靠性和操作的简便性，同时采用的化学发光法能提高检测的灵敏度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外临床检验和化学发光免疫法
，尤其涉及一种用于乳腺癌 和卵巢癌相关指标糖链抗原15-3检测的反应板及试剂盒。
技术介绍
近半个世纪以来，肿瘤的发病率和死亡率逐年升高，成为医学界热点中的热点。20 世纪70年代，美国提出的向“肿瘤进军”反映了社会对肿瘤死亡率居高不下的焦虑，同时， 在过去的几十年中，肿瘤标志在技术上和定义上有了突破，这一切都促使了肿瘤标志研究 的快速发展。糖链抗原15-3 (Carbohydrate Antigen 15-3, CA15-3)于 1984 年被发现，相对分 子质量为300 500kD。其又称为DF3、CD227和PUM。CA15-3有两种抗体一种由鼠抗人乳 腺癌肝转移株膜富集提取物的单克隆抗体DF3制备，另一种抗体115DB是鼠抗人乳脂球蛋 白抗体。和DF3抗体反应的是相对分子量为3(T45kD的异质糖蛋白分子，基因位于1号染 色体长臂。它的cDNA克隆表明DF3多肽的核心有一段60bp高度保守的串联重复序列，重 复序列数量的差异导致了该抗原的多态性。DF3抗体识别位于多肽核心的20氨基酸重复序 列的抗原决定簇，即基因核心的表达产物，抗原决定簇的识别同样受到糖基化的影响。在健康人群，血清CA15-3参考值上限为25kU/L。以此为标准，1050名正常人中 的5.5%、23%的原发性乳腺癌患者以及69(%的转移性乳腺癌患者的0415-3超过了这一水 平。在其他一些恶性肿瘤中也能见到CA15-3升高，如80%的胰腺癌、71 %的肺癌、68%的乳 腺癌、64%的卵巢癌、63%的直肠癌和的肝癌；CA15-3升高还可见于一些良性疾病如 肝病(42% )和良性乳腺病(16% )，但升高比例较低。由于原发性乳腺癌CA15-3升高不显著(23% )，因而CA15-3常用于转移的乳腺癌 患者的治疗检测和预后判断。1997年美国FDA批准Mucinl (CA153)作为II/III期乳腺癌 复发的检测指标。CA15-3比原来水平升高25%预示病情进展或恶化，并与90%进展期、78%恢复期 相关，60%病情稳定患者的CA153水平没有改变。由于CA15-3对转移性乳腺癌诊断的敏感 性和特异性均优于CEA，因而成为诊断转移性乳腺癌的首选指标。上世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光 的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前， 这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析 (Chemiluminescencelmmunoassay, CLIA)是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结 合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫(RIA) 和酶免疫(EIA)相似，不同之处是以发光物质作为底物，并藉助其自身的发光强度直接进 行测定。在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反 应系统，其基本原理同酶联免疫技术(ELISA)。化学发光系统的原理在于免疫反应中的酶作用于发光底物。发光底物在酶的作用下，底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发 态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信 号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由此可 以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快 速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保持期长，应用于生物学、医 学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。
技术实现思路
本专利技术将化学发光技术与免疫分析技术相结合，提供了一种简便，快速，稳定的检 测CA15-3的试剂盒。本专利技术的技术方案如下一种糖链抗原15-3化学发光定量检测试剂盒，包括反应板，酶结合物，发光底物， 校准品，质控品，浓缩洗涤液，所述的反应板包被有抗糖链抗原15-3抗体。所述的校准品以糖链抗原15-3纯品配制，浓度为0、10、20、40、80、160、M0U/ml。所述的质控品以糖链抗原15-3纯品配制，由质控品I和质控品II两部分组成，质 控品I的浓度为10-40U/ml，质控品II的浓度为50_160U/ml。所述的质控品I的浓度优选为20. 5U/ml，质控品II的浓度优选为80. 6U/ml。所述的酶结合物为HRP标记的抗糖链抗原15-3抗体；所述的反应板材质是不透明 的聚苯乙烯或聚乙烯，所述的发光底物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物，所述的浓缩洗涤液 是pH7. 0-pH8. 0的中性缓冲液。本专利技术可以专一的定量检测出病人血清CA15-3的含量，判断转移性乳腺癌预后 和对转移性乳腺癌的治疗检测，同时也能诊断转移性乳腺癌。与传统的ELISA技术相比，本 专利技术不仅保留了 ELISA技术的高度特异性，检测结果的稳定性、可靠性和操作的简便性，同 时采用的化学发光法能提高检测的灵敏度。附图说明图1本专利技术的CA15-3定量检测试剂盒的血清检测结果与罗氏试剂盒检测结果的 相关性。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本 专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照 常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New York =Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1 :CA15_3定量检测试剂盒的制备其步骤主要是(1)抗CA15-3的抗体包被板制备(CA15-3检测反应板的制备)； ⑵酶标抗体的制备；(3)CA15-3校准品的制备；(4)CA15-3质控品的制备；(5)化学发光底 物液的制备；(6)洗涤液制备；(7)半成品及成品组成(1)抗CA15-3的抗体包被板制备a.包被取 lmol/L Na2HPO4 77. 4ml 和 lmol/L NaH2PO4 22. 6ml 混勻，加入去离子 水定容至IOOOml即成10倍包被液，临用前稀释十倍，加入适量抗CA15-3单抗(购自瑞典 康乃格)混勻，然后加入到微孔板板孔中，ΙΟΟμΙ/孔，4°C 16小时；b.封闭弃去包被液，在吸水纸纸上拍干，加入含有3% BSA和0.05%防腐剂 (Procl in 300)的磷酸盐缓冲液(pH 7. 4), 200 μ 1/ 孔，37°C 2 小时；c.封袋弃去封闭液，在吸水纸上拍干，室温下于真空干燥箱中抽5小时，立即进 行真空封袋，检查有无漏气，如有重新封袋，贴上标签后于2-8°C保存。(2)酶标抗体的制备抗CA15-3单抗用过碘酸盐氧化法与辣根过氧化物酶交联，通过方阵滴定，确定酶 标抗体的使用浓度。(3) CA15-3校准品的制备用含有3% BSA和0. 05%防腐剂(Proclin 300)的磷酸盐缓冲液(pH 7. 4)稀释 〇八15-3(购自瑞典康乃格)，分装0、10、20、40、80、160、24(^/1111。(4) CA15-3质控品的制备用含有3 WBSAa^海藻糖和0.05%本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种糖链抗原１５－３化学发光定量检测试剂盒，包括反应板，酶结合物，发光底物，校准品，质控品，浓缩洗涤液，所述的反应板包被有抗糖链抗原１５－３的抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，穆宇豪，李胡丹，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31
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