牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品及其制备方法技术

技术编号:6983940 阅读:632 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及一种牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品及其制备方法。本发明专利技术所涉及的牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品是利用由我国田间自然感染牛布鲁氏菌病的阳性血清作为候选物,通过效价筛选、分装、冻干等工艺过程制备牛布鲁氏菌病阳性血清,并以VLA获得的牛布鲁氏菌病阳性血清国际标准品为参比进行补体结合试验、试管凝集试验和虎红平板凝集试验测定其效价,经过均一性检验、稳定性试验、协作标定和数据统计,保证效价定值准确而制备出牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及,属于标准物质技术和兽用生物制品

技术介绍
牛布鲁氏菌病通常由牛型布鲁氏菌(前称流产布鲁氏菌)引起,其感染呈全球趋势,给世界上很多国家和地区带来了严重的经济损失。世界动物卫生组织 (OIE)将其列为三类动物传染病。目前,血清学检查是牛布鲁氏菌病诊断的常用方法,为了促进牛布鲁氏菌病诊断试验的国际一体化和抗原标准化,OIE已经研制出国际标准血清 (可从OIE的布鲁氏菌参考实验室即英国卫桥VLA获得),也称之为基准标准品,各国实验室用国际标准品溯源制备各自的国家标准品,用于标定牛布鲁氏菌病补体结合试验、试管凝集试验和虎红平板凝集试验。目前,可从VLA获得的牛布鲁氏菌病阳性血清国际标准品是通过实验室免疫一头牛6年后制备完成的(The Second International Standard for Anti-Brucella abortus Serum. IanDavidson, C. Nancy Hebert & W. J. Brinley Morgan. Bull. Org. mond. Sante,Bull. Wld HIthiOrg. 1969,40,129-140)。本专利技术是通过采集田间自然感染牛布鲁氏菌病的阳性血清制备完成的,使得制备周期缩短,节约了成本。而且,标准品的质量要求高,制备方法和检验或标定方法严格,有关的制备程序和标定方法至今未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立国家级牛布鲁氏菌病阳性血清标准品,用于标定我国的牛布鲁氏菌病补体结合试验、试管凝集试验和虎红平板凝集试验。本专利技术是通过以下技术路线来实现的,即是通过采集田间自然感染牛布鲁氏菌病的阳性血清作为候选物,通过效价筛选、分装、冻干等工艺过程制备牛布鲁氏菌病阳性血清,以补体结合试验、试管凝集试验和虎红平板凝集试验测定其效价,经过均一性检验、稳定性试验和协作标定定值以制备出牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品。本专利技术的详细描沭一、牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品候选物的制备田间自然感染牛布鲁氏菌病的牛数头,分别按常规方法无菌采取血液并收集到经过灭菌的量筒中,置20°C左右室温4小时,待血液凝固后每个盛血量筒无菌操作加压铜。静置,待血清析出后,取上清,4000r/min离心20min分离血清。二、牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品候选物的鉴定1、无菌检验按《中华人民共和国兽用生物制品规程》(中华人民共和国农业部.中华人民共和国兽用生物制品规程二〇〇〇年版.化学工业出版社,2001,本专利技术以下简称《规程》)规定方法进行。2、效价测定按以下“附录A”、“附录B”、“附录C”的方法分别进行补体结合试验、试管凝集试验和虎红平板凝集试验进行效价测定。在2次以上重复测定效价均相同的基础上,根据效价测定试验结果确定该阳性血清的补体结合试验效价、试管凝集试验效价和虎红平板凝集试验效价。附录A 牛布鲁氏菌病补体结合试验(Complement Fixation Test,CFT)血清效价测定1工作液制备1. 12个单位溶血素稀释按溶血素使用说明进行稀释。1.22个单位补体稀释。1. 2. 1补体滴度测定(每次试验当天都要测定补体滴度)。1)1 10 补体稀释。2)制备致敏红细胞在烧杯中加20mL 2. 5%绵羊红细胞悬液,在磁力搅拌下将 20mL 2个单位溶血素慢慢加入,为了充分致敏,混合后在室温下用磁力搅拌器搅拌15分钟。3)按表1进行补体滴度程序。表1补体滴度程序权利要求1.一种牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品,其特征在于本专利技术所涉及的牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品其牛布鲁氏菌病补体结合试验效价为1 800 “++”、试管凝集试验效价为1 MOO “++”和虎红平板凝集试验效价为1 160 “ + ”,根据国际标准,按其试管凝集试验计算其国际单位含量为4800IU/安瓿。2.一种牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品的制备方法,其特征在于是通过采集田间自然感染牛布鲁氏菌病的阳性血清作为候选物,通过效价筛选、分装、冻干等工艺过程制备牛布鲁氏菌病阳性血清,以经过均一性检验、稳定性试验和协作标定定值以制备出牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品。全文摘要本专利技术涉及一种。本专利技术所涉及的牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品是利用由我国田间自然感染牛布鲁氏菌病的阳性血清作为候选物,通过效价筛选、分装、冻干等工艺过程制备牛布鲁氏菌病阳性血清,并以VLA获得的牛布鲁氏菌病阳性血清国际标准品为参比进行补体结合试验、试管凝集试验和虎红平板凝集试验测定其效价,经过均一性检验、稳定性试验、协作标定和数据统计,保证效价定值准确而制备出牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品。文档编号G01N33/96GK102288771SQ20111011963公开日2011年12月21日 申请日期2011年5月10日 优先权日2011年5月10日专利技术者关孚时, 张秀英, 戴志红, 李翠, 温芳, 王在时, 蒋卉, 陆连寿 申请人:中国兽医药品监察所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品,其特征在于本专利技术所涉及的牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品其牛布鲁氏菌病补体结合试验效价为1∶800“++”、试管凝集试验效价为1∶2400“++”和虎红平板凝集试验效价为1∶160“+”,根据国际标准,按其试管凝集试验计算其国际单位含量为4800IU/安瓿。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:李翠关孚时戴志红王在时蒋卉张秀英陆连寿温芳
申请(专利权)人:中国兽医药品监察所
类型:发明
国别省市:11

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