本发明专利技术属于植物保护技术领域，公开了一种防治小麦全蚀病的生防菌株YP1及其应用。生防菌株YP1，为荧光假单胞菌(Pseudomonas?fluorescens)，于2011年6月1号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC?NO.4922。用所述的生防菌株YP1制备的生防菌剂，其中YP1的活菌总浓度为1×109-1×1010CFU/mL。所述的生防菌剂可在防治小麦全蚀病方面应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物保护
，涉及一种防治小麦全蚀病的生防菌株YPl及其应用。
技术介绍
小麦全蚀病是由禾顶囊壳小麦变种Gaeumannomyces graminis var. tritici (Ggt)引起的一种危害严重的根部病害，世界各小麦主要产区均有发生。小麦全蚀病在苗期和成熟期均可发生，苗期症状较轻，而以成株期症状最为明显。苗期病株矮小，下部黄叶多，种子根和地中茎变成灰黑色，严重时造成麦苗连片枯死。到目前为止还没有有效的防治手段。小麦是我国重要的粮食作物，小麦全蚀病早在20世纪30年代就有报道，近年来发病趋势逐渐严重，据调查，轻者减产1-2成，重者减产5成甚至绝产，对小麦生产威胁很大，造成了严重的经济损失。长期以来，国内外对小麦全蚀病的防治多从农业防治和化学防治出发，防治效果不明显，而且造成了一定程度的环境污染。因此，生物防治由于其自身的优点开始受到越来越多的重视。综上所述，开发新的、更为高效和安全的微生物杀菌剂控制小麦全蚀病的发生是提高社会生产总量的需要，同时更是农业安全可持续发展的需要，符号社会发展需求。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中没有对小麦全蚀病有较高防效的生防制剂的现状，提供开发一种防治小麦全蚀病的单一生防菌菌株及其菌剂。本专利技术的另一目的是提供该菌株及菌剂的应用。一种用于防治小麦全蚀病的生防菌株YPl，为荧光假单胞菌(I^eudomonas fluorescens)，于2011年6月1日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO. 4922。所述的菌种保藏号为CGMCC N0. 4922的生防菌株YPl在制备防治防治小麦全蚀病的药剂中的应用。用所述的生防菌株YPl制备的生防菌剂，菌剂成品中菌种保藏号为CGMCC N0. 4922的生防菌株YPl的活菌总浓度为1 X IO9-I X 10lclCFU/mL。所述的生防菌剂通过如下方法制备将权利要求1所述的菌种保藏号为CGMCC N0. 4922生防菌株YPl在LB培养液中25 28 °C 180rpm振荡培养12_16h，然后5000 6000rpm离心10 15min，沉淀用灭菌水稀释成YPl活菌总浓度为1 X IO9-I X 1010CFU/m L 的菌剂。所述的生防菌剂在防治小麦全蚀病方面的应用。用所述防治小麦全蚀病的生防菌株YPl制备生防菌剂的方法将所述的菌种保藏号为CGMCC N0. 4922生防菌株YPl在LB培养液中25 观°C 180rpm振荡培养 12-16h，然后5000 6000rpm离心10 15min，沉淀用灭菌水稀释成YPl活菌总浓度为1 X 109-1X 1010CFU/mL 的菌剂。上述生防菌剂在防治小麦全蚀病方面的应用方法为YP1菌株制剂在作物种植前浸种使用半小时。有益效果本专利技术是专门针对小麦全蚀病开发的生防制剂。由于是生物制剂，完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题，因而有利于粮食作物的无公害生产，农民可以不用或减少其他化学农药的用量，这不仅可为农民节省开支，而且有利于提升粮食品质。同时，该菌剂还有增产功能，可为农民增加收入。温室实验表明该菌制剂能显著降低小麦全蚀病的发生。该菌剂可以稀释100倍后在小麦种植时浸种处理。在温室条件下对于小麦全蚀病病的防效可以达到62. 4% (表 2)。生物材料保藏信息防治小麦全蚀病的生防菌株ΥΡ1，为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens), 于2011年6月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCCJ* 址北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC NO. 4922。具体实施例方式实施例IYPl的分离(1)菌株YPl是2008年6月份在小麦叶表分离的一株荧光假单胞菌，分离过程如下在小麦成熟期，取数株小麦放入灭菌塑料袋中迅速带回实验室，取5g小麦叶片放入灭菌的三角瓶中，加45mL无菌0. 85%的NaCl，灭菌玻璃珠5g，于摇床上120_150rpm振荡 30min后，静置5min,得到10-1稀释液，吸取0. ImL加入到0. 9mL的无菌0. 85 %的NaCl中， 混勻即为10_2稀释液，以此类推，可制备ΙΟ"3, ΙΟ"4, ΙΟ"5,10_6稀释液。ΙΟ"4, ΙΟ"5,10_6三个梯度的稀释液吸0. ImL接种在KMB选择性培养基上，每个梯度重复三次，根据培养基上菌落大小和形态分离纯化。在365nm波长的紫外灯下，根据是否有荧光挑取不同菌落形态的有荧光的菌株，纯化二次后编号保存于40%甘油(_70°C)。对于分离到的500多株菌株在WA培养基平板上进行对小麦全蚀病菌的拮抗试验，具体的操作方法如下在含WA培养基的平板(直径9cm)底部放置与平板等大的白色硬纸片，将圆纸片十字垂直交叉分成四等分，进行离体拮抗实验时，在WA培养基平板上沿四条垂直线离圆纸片中心2cm处分别用灭菌牙签挑取在 KMB培养基上培养过夜的待测荧光假单胞菌株接种，对照不接种细菌，最后在平板的正中心放置一块在PDA培养基上生长的指示病原真菌菌丝块(小麦全蚀病菌(上海福众(亚平宁)生物科技发展有限公司)菌丝块，取指示菌边缘生长势旺盛的菌丝块，直径为4mm)，置于25°C培养箱中培养，待对照平板中的指示真菌菌丝长到滤纸片处时，记录拮抗圈半径。通过拮抗试验我们发现，菌株YPl在WA培养基平板上具有对小麦全蚀病较强的拮抗作用，因此选择菌株YPl保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.4922。。KMB 培养基蛋白胨 20. 0g, K2HPO4 1. 5g，MgSO4 · 7H20 1. 5g，甘油 15. 0ml，琼脂 15. 0g，蒸馏水950ml，12rC高压灭菌15min，冷却待用。将75mg放线菌酮，75mg青霉素， 45mg新生霉素加入IOml 95%酒精中，然后将它与40ml灭菌的超纯水混勻，加入到快冷却的950ml灭菌KMB培养基中得到KMB选择培养基。Warkingsman (WA)培养基5g蛋白胨，IOg葡萄糖，3g酵母提取物，5g氯化钠，20g 琼脂，蒸馏水定容至1L，用于拮抗活性测定。(2) YPl菌株在KMB培养基上划线接种，28°C下培养小时后，生长良好，菌落微隆起，黄绿色，边缘光滑，表面较湿润，易被挑起，可产生水溶性的黄绿色色素。在254nm 紫外光照射下可见强烈的黄绿色荧光，在其他培养基上(如LB或PDA)培养，荧光较弱。在电镜下观察为杆状(0. 5-0. 8 μ mX 1. 4-1. 7 μ m)鞭毛极生。YPl相关的理化特性革兰氏染色阴性，有鞭毛能够运动，生长温度为4-37°C，最适生长温度为2618°C，能液化明胶，葡萄糖发酵、蔗糖发酵、乳糖发酵均为阳性，水解淀粉阴性，反硝化阳性，柠檬酸盐发酵阳性，接触酶反应阳性，酯酶反应阴性，不产生绿脓菌素等抗生素。通过16S rRNA测序，及NCBI比对，我们发现菌株YPl的16S rRNA序列与荧光假单胞菌CFBPl 1348 (FN666560. 1)的同源性达到99%。实施例2YP1生防菌剂的制备将生防菌株YPl (CGMCC NO. 4922)本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种用于防治小麦全蚀病的生防菌株ＹＰ１，为荧光假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ），于２０１１年６月１号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为ＣＧＭＣＣ ＮＯ．４９２２。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郭坚华，杨明明，刘红霞，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84
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